癌癥尿液檢測試劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種臨床診斷用的體外檢測試劑，具體涉及一種癌癥尿液檢測試劑。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，全世界腫瘤疾病的發(fā)病率呈不斷上升趨勢，據(jù)美國癌癥學(xué)會(AmericanCancer Society)對世界范圍癌癥的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，從2008年至2030年，全球新增癌癥人數(shù)將從每年的1270萬增至2140萬，癌癥死亡人數(shù)將由760萬上升至1320萬人。與此同時(shí)，我國近年的統(tǒng)計(jì)資料表明，預(yù)計(jì)2020年中國癌癥新發(fā)病例將達(dá)349萬，因惡性腫瘤而死亡的人數(shù)將達(dá)263萬，較2002年上升60%。由此可見，無論在發(fā)達(dá)國家還是發(fā)展中國家，惡性腫瘤(癌癥)均已取代心血管病成為死亡人數(shù)最多的疾病。由于癌癥發(fā)病隱匿、進(jìn)展快、惡性程度高，因此，“早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療”仍是降低癌癥死亡率最主要的措施。
[0003]目前診斷癌癥的方法，基本上是通過特異性不高且操作費(fèi)時(shí)的方法，現(xiàn)在普遍采用的確診手段有CT、B趣.核磁共振、細(xì)胞學(xué)檢查等，這些手段都直接與人體聯(lián)系，或價(jià)格昂貴、復(fù)雜、痛苦且損傷身體的物理學(xué)和病理學(xué)檢查。這些都是早期(特別是無癥狀期)人們不易接受的，因而，不能及時(shí)檢查或不便多次檢測，不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和早期發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤，延誤了早期根治性手術(shù)和治療的機(jī)會。因此，開展區(qū)域性防癌普查，能夠發(fā)現(xiàn)早期癌癥病人，對提高癌癥患者的生存率是很重要的。故癌癥早期篩查技術(shù)已成為世界各國關(guān)注的熱點(diǎn)。鑒于此，研制一種既適合腫瘤普查又適合腫瘤篩查的無創(chuàng)性測試劑和檢測方法已是當(dāng)務(wù)之急O(jiān)
[0004]由于腫瘤標(biāo)志物對腫瘤的診斷、分類、預(yù)后判斷以及治療有重要的指導(dǎo)意義，因此，對于腫瘤標(biāo)志物的研究得到了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，尿中腫瘤標(biāo)志物的檢測是目前研究的熱點(diǎn)之一。
[0005]尿中腫瘤標(biāo)志物主要分兩大類:一類是特異性蛋白質(zhì)，如本一周氏蛋白、硫酸酯酶等；另一類則是腫瘤代謝產(chǎn)物，如核酸代謝產(chǎn)物多胺、含巰基化合物、氨基酸代謝產(chǎn)物5-羥吲哚乙酸、對羥基苯丙銅酸等。對后者的檢測方法很多，其中包括含汞試劑，最近的相關(guān)技術(shù)專利為《用于檢測人體尿液中酪氨酸類酚代謝物的試劑盒》CN102004103B (申請?zhí)?201010505793.4)和《對羥基苯丙氨酸尿液檢測試劑及其制備方法》CN103323452B (申請?zhí)?201310247724.1)。它們分別提出了較為實(shí)用的含汞尿檢試劑配方，其共同點(diǎn)是均采用了兩種汞離子Hg+與Hg2+，將二者按一定比例溶解在酸性溶液中，穩(wěn)定劑的Ni2+，即得專利所述試劑。該試劑中的兩種汞離子分別與尿中的不同成分反應(yīng)，Hg+與底物單羥酚類代謝物反應(yīng)生成紅色沉淀，Hg2+與無機(jī)鹽(其他陰離子反應(yīng)如Cl-、N02-等)生成白色沉淀。CN102004103B (申請?zhí)?201010505793.4)發(fā)明原理是將該試劑中的汞鹽與患者酪氨酸及代謝酚類物反應(yīng)生成紅色沉淀物。CN 103323452 B (專利申請?zhí)?01310247724.1 )本發(fā)明原理是將該試劑汞鹽與患者尿中酪氨酸、色氨酸及其衍生物及含有此類氨基酸殘基的變性蛋白反應(yīng)生成具特異性的紅色沉淀物。
[0006]上述專利的發(fā)明原理相同，即:被測者處于癌前病變及癌癥早中期時(shí)，細(xì)胞的異常增殖引發(fā)應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致人體內(nèi)氨基酸代謝異常，尿液中單羥酚類代謝物(如色氨酸、酪氨酸及其代謝衍生物)含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過正常人。基于米倫試劑而改進(jìn)的檢測試劑與尿液中單羥酚類代謝物發(fā)生具特異性顏色的沉淀反應(yīng)，從而判斷惡性腫瘤發(fā)生的可能性。
[0007]上述專利所提供的試劑，在應(yīng)用中有一定效果，特異性、靈敏度較高，但仍有不足之處。由于該方法在反應(yīng)離子與其溶解的溶解之間、反應(yīng)離子之間等方面存在的問題，以及尿樣的顏色、尿中所含蛋白及無機(jī)鹽干擾，致使利用所給條件進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，其方法、效果均不太穩(wěn)定，檢測試劑在腫瘤的普查篩檢應(yīng)用中，還有待于進(jìn)一步改進(jìn)，以提高靈敏度和特異度，減少漏檢率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于克服已有技術(shù)存在的問題，研制一種適用于臨床應(yīng)用的，穩(wěn)定性優(yōu)良的，檢測靈敏度和特異度高、漏檢率低的癌癥尿液檢測試劑，該試劑生產(chǎn)成本低，工藝簡單，只要將試液滴入被檢者的尿液中，即可用肉眼從顏色判斷出被檢者是健康者還是癌癥患者，或其他疾病患者。檢測快速、準(zhǔn)確、簡便。
[0009]本發(fā)明的目的采用如下方案實(shí)現(xiàn):
對已有技術(shù)的癌癥尿檢比色方法加以改進(jìn)，克服癌癥尿檢試劑的缺點(diǎn)，發(fā)明一種新的配方。
[0010]一、該尿液檢測試劑的制備方法包括以下步驟
A溶液制備:稱取碘2-3g，加入10ml蒸餾水中，待溶解后，定容至250ml;
B溶液制備:稱取碘化鉀40-60g，加入10ml蒸餾水中，待溶解后，定容至250ml;
C溶液制備:稱取氯化汞3-6g，加入10ml蒸餾水中，待溶解后，緩慢向內(nèi)加入60_80ml12N硫酸,而后加蒸懼水至500ml ；
將A溶液、B溶液和C溶液按體積比1: 0.8?1.5: 1.0?1.5進(jìn)行混合后，即得到目標(biāo)產(chǎn)品癌癥尿液檢測試劑。
[0011]二、檢測方法
本試劑為目測比色試劑，不受響尿樣的顏色、尿中所含蛋白及無機(jī)鹽干擾，試劑滴入尿液后，立即出現(xiàn)沉淀，根據(jù)沉淀的有無和沉淀的顏色即可判斷被檢測者是否患有癌癥，其具體檢測方法如下:
取3天禁食高蛋白食物、中西藥物后的新鮮晨尿5ml，加入癌癥相關(guān)因子尿液檢測試劑0.5ml,振勻后靜置5-15分鐘,觀察沉淀的有無和沉淀的顏色。
[0012]判斷標(biāo)準(zhǔn):與標(biāo)準(zhǔn)色板對照做出判斷:沉淀物呈微白色、黃色者為陰性；沉淀呈紅色球、灰紅色球狀、草綠色球狀、紅色球狀者為陽性；沉淀呈乳白色并直接沉入管底者為急、慢性腎炎、囊腫或良性腫瘤。
[0013]在使用中，本試劑對幾種特殊尿液，呈現(xiàn)的顏色不同，應(yīng)予以注意:
靜脈注射葡萄糖后的尿液呈乳白色，口服利福平后的尿液呈桔紅色的渾濁物等，這都為假陽性，為此特要求所用的尿液必須為在口服中西藥或注射藥物24小時(shí)后的尿液。
[0014]癌癥經(jīng)手術(shù)、化療、放療等治療好轉(zhuǎn)后，亦呈陰性反映。
[0015]本試劑用于病情檢測時(shí)，可用上述方法連續(xù)定期監(jiān)測，在此過程中如出現(xiàn)由陰性反應(yīng)轉(zhuǎn)為陽性反應(yīng)，則提示癌癥的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。
[0016]本試劑用于療效評價(jià)時(shí),可在某治療前后進(jìn)行檢測,如治療后仍為陽性,則為療效不明顯，如在治療前為陽性反應(yīng)，轉(zhuǎn)為治療后的陰性，則說明效果的有效性。
[0017]本發(fā)明依據(jù)的理論基礎(chǔ)是:
1、致癌因素(物理因索、化學(xué)因索、病毒因素和其它因素等)引起細(xì)胞畸變，使癌細(xì)胞代謝旺盛造成某些物質(zhì)成分激增。雖然這些特殊成分的質(zhì)和量隨不同部位類型的癌細(xì)胞而異，但仍有其共性，這些與癌變相關(guān)的因子統(tǒng)稱為惡性腫瘤相關(guān)因子(CAR)，可隨尿液排出體外，并可與某些離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，形成具有特異性顏色的有色絡(luò)合物。
[0018]2、具體的表現(xiàn)為當(dāng)受檢者體內(nèi)有癌細(xì)胞活動時(shí)，細(xì)胞的異常增殖引發(fā)應(yīng)激反應(yīng)，