人體唾液?jiǎn)瘟u酚類代謝物檢測(cè)試劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種臨床診斷用的體外檢測(cè)試劑，具體涉及一種人體唾液?jiǎn)瘟u酚類代 謝物檢測(cè)試劑的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤是世界性疾病，也是人類最兇惡的殺手之一，全世界每年死于癌癥的人 數(shù)為800萬(wàn)左右，我國(guó)每年死于癌癥的人數(shù)高達(dá)150萬(wàn)。多年來(lái)，國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者對(duì)惡性腫 瘤的早期發(fā)現(xiàn)和診斷進(jìn)行了多方面的研宄探討，多種腫瘤標(biāo)志物相繼應(yīng)用于對(duì)癌癥病人的 臨床診斷并取得了一定的效果，但它們卻存在著操作繁瑣、成本投入高、準(zhǔn)確度易受多種因 素影響等缺點(diǎn)。并且這些方法大多都是有創(chuàng)性的，這對(duì)于疾病的大規(guī)模篩查極為不利。因 此建立一種快速的無(wú)創(chuàng)腫瘤篩查方法更能適應(yīng)大規(guī)模人群的健康篩查。
[0003] 人體唾液?jiǎn)瘟u酚類代謝物水平的顯著提高，可以提示惡性疾病的發(fā)生。通過(guò)檢測(cè) 唾液中的單羥酚類代謝物含量，可以用于提前判斷惡性腫瘤發(fā)生的可能性，發(fā)現(xiàn)臨床前的 惡性腫瘤對(duì)于腫瘤細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)和治愈具有重要的意義，目前尚沒有發(fā)現(xiàn)此領(lǐng)域的研宄。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種生產(chǎn)成本低的唾液?jiǎn)瘟u酚 類代謝物檢測(cè)試劑的制備方法。
[0005] 本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，該唾液檢測(cè)試劑是將Hg2+、Hg2+、Ni2+分別溶解于相應(yīng) 的酸溶液中，然后按比例混合后制得的。
[0006] 本發(fā)明的人體唾液?jiǎn)瘟u酚類代謝物檢測(cè)試劑的制備方法，包括以下步驟： A溶液制備：濃度為0. 4~0. 8g/ml的硝酸亞汞溶液，其制備方法為，稱取硝酸亞汞 加入到12mol/L的硝酸溶液中，溶解后用12mol/L硝酸溶液定容至硝酸鎳溶液的濃度為 0? 4 ~0? 8g/ml; B溶液制備：濃度為0. 2g/ml~0. 3g/ml的硝酸鎳溶液，其制備方法為，稱取6水硝酸 鎳，溶解于適量的6mol/L的硝酸溶液中，再加6mol/L的硝酸溶液定容至硝酸鎳溶液的濃度 為 0? 2g/ml~0? 3g/ml; C溶液制備：0.lg/ml~0. 2g/ml的硫酸采溶液，按濃度計(jì)算要求，稱取分析純硫酸采 試劑的量，溶解于6mol/L的硫酸溶液中，再加6mol/L的硫酸溶液定容至硫酸汞溶液的濃度 為 0?lg/ml~0? 2g/ml; 將A溶液、B溶液和C溶液按體積比1 : 1.0~2.0 : 1.0~1.5混合，攪拌均勻而成。
[0007] 本發(fā)明的制備方法所得的人體唾液?jiǎn)瘟u酚類代謝物檢測(cè)試劑，使用方法： ① 被檢者唾液采集，在采樣之前指導(dǎo)供體用自來(lái)水漱口，采集持續(xù)時(shí)間為5分鐘； ② 取被檢者唾液3ml，滴入0. 5ml的本試劑中，搖勻，靜置3-5分鐘； ③ 檢測(cè)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)是，出現(xiàn)白色/黃色沉淀或無(wú)沉淀者為陰性，出現(xiàn)紅色/深紅沉淀 者為陽(yáng)性。
[0008]本發(fā)明依據(jù)的理論基礎(chǔ)是： 癌癥患者唾液中單羥酚類代謝物的含量異常升高，這些物質(zhì)與唾液?jiǎn)瘟u酚類代謝物檢 測(cè)試劑發(fā)生特異性的桃紅色沉淀反應(yīng)，而與正常人唾液反應(yīng)無(wú)沉淀或沉淀為黃色，通過(guò)沉 淀物及其顏色來(lái)判定被測(cè)試者體內(nèi)是否有癌癥細(xì)胞的代謝活動(dòng)，達(dá)到早期診斷效果。
[0009] 本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)便、快速、試劑成本低廉，適用于大規(guī)模人群普查的癌瘤初篩及 作為臨床對(duì)癌癥患者療效判斷和復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)的參考指標(biāo)，也適用于基層醫(yī)院。
[0010] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和積極效果： 1、 本試劑原料價(jià)格非常便宜容易獲得，成本低； 2、 使用簡(jiǎn)單，結(jié)果觀察不需要任何儀器，肉眼就可觀察，非常直觀，易于推廣，適合于作 普查或篩查，真正做到早檢查、早預(yù)防、早診斷、早治療； 3、 不受場(chǎng)地、性別的限制，不需任何儀器、設(shè)備，能快速、靈敏地檢測(cè)，尤其適用于癌癥 的普查和篩查； 4、 樣本干凈、取樣方便、體面，消除了取尿時(shí)的尷尬，性隱私不受侵犯，杜絕了其間許多 作弊環(huán)節(jié)； 5、 用唾液作檢測(cè)標(biāo)本對(duì)人無(wú)損害，切斷了傳染病經(jīng)血液傳播的途徑，減輕了收檢者身 心壓力，安全無(wú)毒； 4、 不僅用于癌癥檢測(cè)診斷，也可用于療效判斷和癌癥患者病情監(jiān)督，有助于腫瘤患者 治療前后的療效監(jiān)測(cè)以及癌癥復(fù)發(fā)的判斷； 5、 試劑成本低，價(jià)格便宜，適合于作普查或篩查，真正做到早檢查、早預(yù)防、早診斷、早 治療。
[0011] 針對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品的有關(guān)臨床研宄的具體情況報(bào)告如下： 1、材料和方法 I. 1實(shí)驗(yàn)對(duì)象①腫瘤組：全部為江津中心醫(yī)院住院的腫瘤患者300人（肝癌97人，胃 癌56人，食道癌38人，結(jié)腸癌48人，鼻咽癌2人，皮膚癌27人，乳腺癌4人，肺癌7人），其 中男性120人，女性180人，平均年齡43歲，所有的惡性腫瘤均經(jīng)病理檢驗(yàn)確診。②正常 對(duì)照組：標(biāo)本取自江津中心醫(yī)院健康體檢人員350人，其中男性179人，女性171人，平均年 齡36歲，所有人員均經(jīng)證實(shí)為非腫瘤的健康體檢者。
[0012] 1. 2儀器與試劑本發(fā)明試劑-唾液?jiǎn)瘟u酚類代謝物檢測(cè)試劑（STK)，AFP檢測(cè)則 是采用Beckman公司的化學(xué)發(fā)光分析儀（Access)及其配套試劑（批號(hào)：641071) 1. 3檢測(cè)方法 1. 3. 1標(biāo)本采集：收集正常對(duì)照組和腫瘤患者組的唾液10ml，樣本采集后立即送檢。 隨后采集肝癌患者術(shù)前全血3ml，分離血清進(jìn)行AFP檢測(cè)。
[0013] 1. 3. 2取唾液3ml加入到裝有STK試劑0. 5ml的安瓿中，混合后5min觀察。 將反應(yīng)后的溶液及沉淀物顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色板進(jìn)行比較。
[0014]判斷標(biāo)準(zhǔn)：陰性：溶液或沉淀物呈無(wú)色或黃色；陽(yáng)性：液體或沉淀物呈紅色或褐 色。陽(yáng)性界線全部以標(biāo)準(zhǔn)色板5號(hào)色塊為界線判定其結(jié)果，弱陽(yáng)性以3號(hào)色塊為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)。
[0015] 1. 3. 3肝癌患者手術(shù)前結(jié)果采用住院期間的檢測(cè)結(jié)果，手術(shù)后結(jié)果則采用術(shù)后 隨訪半年再行檢測(cè)。
[0016]I. 3. 4對(duì)肝癌患者血清采用化學(xué)發(fā)光方法檢測(cè)AFP。其結(jié)果用陰陽(yáng)性表示。判 斷標(biāo)準(zhǔn)為：〈20ng/ml為陰性，>20ng/ml為陽(yáng)性。
[0017] 1. 4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。腫瘤組與對(duì)照組 檢測(cè)試劑陽(yáng)性率比較，不同腫瘤組的STK結(jié)果比較，肝癌患者手術(shù)前后比較用。檢驗(yàn)：對(duì) AFP與STK同時(shí)檢測(cè)肝癌患者標(biāo)本結(jié)果的一致性比較用Kappa檢驗(yàn)。
[0018] 2結(jié)果 2. 1腫瘤組與對(duì)照組進(jìn)行測(cè)試后的結(jié)果腫瘤組中有286例陽(yáng)性（其中強(qiáng)陽(yáng)性215例， 弱陽(yáng)性71例），陰性14例；正常對(duì)照組中有10例陽(yáng)性（其中強(qiáng)陽(yáng)性2例，弱陽(yáng)性8例）， 陰性340例。經(jīng)X2檢驗(yàn)，對(duì)照組與腫瘤組的代謝物檢測(cè)結(jié)果的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性意 義，腫瘤組顯著高于正常對(duì)照組（X2=595. 17,P〈0. 01)。該方法的靈敏度為：（215+71) / 300=95. 33%，特異度為：340 / 350=97. 14%。說(shuō)明唾液中單羥酚類代謝物含量測(cè)定是良惡 性腫瘤鑒別的可靠指標(biāo)，已能滿足臨床檢測(cè)的需要。
[0019] 2. 2不同腫瘤組間進(jìn)行測(cè)試的結(jié)果見表1。肝癌、胃癌、食道癌和結(jié)腸癌等消化道 惡性腫瘤的平均陽(yáng)性檢出率達(dá)98. 82% ;而鼻咽癌、皮膚癌、乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤的檢出 率略低，平均為77. 63%。表明該試劑具備瘤譜和瘤種的廣泛性。在消化道腫瘤的檢出率高 于其他系統(tǒng)的腫瘤檢出率，可能是由于消化道內(nèi)病變更能夠促進(jìn)氨基酸的代謝，因而本方 法更適合消化系統(tǒng)惡性腫瘤的篩查。
[0020] 表1不同腫瘤患者STK檢測(cè)陽(yáng)性率
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種人體唾液?jiǎn)瘟u酚類代謝物檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于：它包括以下步 驟： A溶液制備：濃度為0. 4~0. 8g/ml的硝酸亞汞溶液，其制備方法為，稱取硝酸亞汞 加入到12mol/L的硝酸溶液中，溶解后用12mol/L硝酸溶液定容至硝酸鎳溶液的濃度為 0? 4 ~0? 8g/ml ; B溶液制備：濃度為0. 2g/ml~0. 3g/ml的硝酸鎳溶液，其制備方法為，稱取6水硝酸 鎳，溶解于適量的6mol/L的硝酸溶液中，再加6mol/L的硝酸溶液定容至硝酸鎳溶液的濃度 為 0? 2g/ml ~0? 3 g/ml ; C溶液制備：0. lg/ml~0. 2g/ml的硫酸采溶液，按濃度計(jì)算要求，稱取分析純硫酸采 試劑的量，溶解于6mol/L的硫酸溶液中，再加6mol/L的硫酸溶液定容至硫酸汞溶液的濃度 為 0? lg/ml ~0? 2g/ml ; 將A溶液、B溶液和C溶液按體積比1 : 1.0~2.0 : 1.0~1.5混合，攪拌均勻而成。
【專利摘要】一種人體唾液?jiǎn)瘟u酚類代謝物檢測(cè)試劑的制備方法。該唾液檢測(cè)試劑是將Hg2+、Hg2+、Ni2+分別溶解于相應(yīng)的酸溶液中，然后按比例混合后制得的。本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，是一種新配方的代謝異?？焖偻僖簷z測(cè)試劑，具有高的穩(wěn)定性和靈敏度、假陽(yáng)性率和假陰性率低，生產(chǎn)成本低，適合于人群篩查和臨床檢驗(yàn)的要求。
【IPC分類】G01N21-82
【公開號(hào)】CN104655624
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510022893
【發(fā)明人】寧發(fā)子, 羅勇軍
【申請(qǐng)人】重慶都好生物科技有限公司, 成都?jí)褖焉锟萍加邢薰?br>【公開日】2015年5月27日
【申請(qǐng)日】2015年1月17日