一種血液前處理液的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及用于血液處理的處理液，具體涉及一種血液前處理液。
【背景技術(shù)】
[0002]血液中包括血清、白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板等，但是很多疾患因子首先影響血液成分的變化，例如循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell，CTC)，通常把進(jìn)入人體外周血的腫瘤細(xì)胞稱為循環(huán)腫瘤細(xì)胞。血液成份分析，主要是對(duì)血液中白血球、紅血球等分析計(jì)數(shù)，要分析這些成份，需要對(duì)血液進(jìn)行前處理，防止血液凝固、物質(zhì)分解和細(xì)胞死亡等，如專利公開(kāi)號(hào)為CN103743616的發(fā)明專利申請(qǐng)，就公開(kāi)了血液分析儀用稀釋液，其成份包括氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉、乙二胺四乙酸鹽、咪唑、嘌呤、防腐劑等，其作用是使血樣物質(zhì)穩(wěn)定，防止血液凝固、物質(zhì)分解和細(xì)胞死亡等。專利公開(kāi)號(hào)為CN103323582的發(fā)明專利申請(qǐng)，則公開(kāi)了針對(duì)白細(xì)胞分類的試劑盒，包括溶血?jiǎng)?、稀釋液和抑制劑，其溶血?jiǎng)┛梢匀芑t細(xì)胞和血小板，抑制劑可以抑制試劑對(duì)白細(xì)胞的損傷，用于白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)。但上述二種發(fā)明，針對(duì)血液中數(shù)量較多的白細(xì)胞、紅細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，但對(duì)血液中數(shù)量少的疾患因子，如循環(huán)腫瘤細(xì)胞的計(jì)數(shù)，尤如大海撈針，很難計(jì)算清楚，因此需要針對(duì)少數(shù)物質(zhì)計(jì)數(shù)專門(mén)設(shè)計(jì)一種血液前處理液。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種白細(xì)胞、疾患因子與靶細(xì)胞等得到濃縮與純化，且不會(huì)損傷細(xì)胞的表面生物活性的血液前處理液。
[0004]本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為:一種血液前處理液，其成份及濃度如下:氯化納濃度為3?8g/L,磷酸二氫鉀濃度為0.1?0.2g/L,磷酸氫二納濃度為I?2g/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為3?5%，離子去污劑質(zhì)量百分濃度為0.1?1%，蛋白保護(hù)劑質(zhì)量百分濃度為0.5?3%，Procl in-300質(zhì)量百分濃度為0.01?0.05%，余量為純化水，所述離子去污劑為高碳醇、脂肪酸、高碳脂肪胺、脂肪酰胺、環(huán)氧乙烷或聚乙二醇，所述蛋白保護(hù)劑為甘油或多糖。
[0005]所述多糖為半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和麥芽糖的至少其中一種。
[0006]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于一種血液前處理液，其由氯化納、磷酸二氫鉀、磷酸氫二納、小牛血清白蛋白、離子去污劑、蛋白保護(hù)劑、Proclin-300及水組成，其中離子去污劑可以降低界面自由能，改變欲除去物與基質(zhì)的界面性質(zhì)，通過(guò)吸附層的電荷相斥，過(guò)濾或磁力吸附，使欲除去物，例如血清，血紅蛋白從基質(zhì)上移去，再經(jīng)卷離，乳化，分散，增溶等作用，隨溶液去除。甘油或活性多糖與小牛血清白蛋白的生物活性相融合增強(qiáng)作用，不但可以防止血液凝固、物質(zhì)分解和細(xì)胞死亡等，還可以除去從全血中血清與血紅蛋白等組分，保護(hù)靶細(xì)胞，例如循環(huán)腫瘤細(xì)胞，未分化或分化型白細(xì)胞的生物活性。因此利用本發(fā)明的血液前處理液，血液離心后，白細(xì)胞、疾患因子與靶細(xì)胞等得到濃縮與純化，且不會(huì)損傷細(xì)胞的表面生物活性；可直接用于細(xì)胞計(jì)數(shù)或細(xì)胞培養(yǎng)后的免疫熒光、熒光定量或定性檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞等疾患因子。
【具體實(shí)施方式】
[0007]以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0008]實(shí)施例1
一種血液前處理液，其成份及濃度如下:氯化納濃度為3g/L，磷酸二氫鉀濃度為0.2g/L,磷酸氫二納濃度為2g/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為3%，離子去污劑高碳醇質(zhì)量百分濃度為0.1%，蛋白保護(hù)劑甘油質(zhì)量百分濃度為0.5%，Proclin-300質(zhì)量百分濃度為0.01%，余量為純化水。處理時(shí)取7.5ml新鮮血液加入血液前處理液4.4ml，上下跌倒四五次放入離心機(jī)中離心10分鐘棄去上清液，保留細(xì)胞。
[0009]實(shí)施例2
一種血液前處理液，其成份及濃度如下:氯化納濃度為5g/L，磷酸二氫鉀濃度為0.lg/L,磷酸氫二納濃度為lg/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為4%，離子去污劑脂肪酸或高碳脂肪胺質(zhì)量百分濃度為0.5%，蛋白保護(hù)劑半乳糖(或阿拉伯糖或葡萄糖或麥芽糖)質(zhì)量百分濃度為1.5%，Proclin-300質(zhì)量百分濃度為0.03%，余量為純化水。
[0010]實(shí)施例3
一種血液前處理液，其成份及濃度如下:氯化納濃度為8g/L，磷酸二氫鉀濃度為0.15g/L,磷酸氫二納濃度為1.5g/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為5%，離子去污劑環(huán)氧乙烷或聚乙二醇質(zhì)量百分濃度為1%，蛋白保護(hù)劑為半乳糖和阿拉伯糖配制的混合多糖(或葡萄糖和麥芽糖、半乳糖和麥芽糖、葡萄糖和阿拉伯糖等配制)，其質(zhì)量百分濃度為3%，Proclin-300質(zhì)量百分濃度為0.05%，余量為純化水，混合多糖配制的比例以與小牛血清白蛋白的生物活性相融合效果好為佳，可以是1:0.1?10，以質(zhì)量比1:1為好。
[0011]實(shí)施例4
一種血液前處理液，其成份及濃度如下:氯化納濃度為8g/L，磷酸二氫鉀濃度為
0.15g/L,磷酸氫二納濃度為1.5g/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為5%，離子去污劑環(huán)氧乙烷或聚乙二醇質(zhì)量百分濃度為1%，蛋白保護(hù)劑為半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和麥芽糖配制混合多糖，其質(zhì)量百分濃度為2%，Proclin-300質(zhì)量百分濃度為0.05%，余量為純化水，混合多糖配制的比例以與小牛血清白蛋白的生物活性相融合效果好為佳，可以是1:0.1?10:0.1?10:0.I?10，以質(zhì)量比I:1:1:1為好。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種血液前處理液，其特征在于成份及濃度如下:氯化納濃度為3?8g/L，磷酸二氫鉀濃度為0.1?0.2g/L,磷酸氫二納濃度為I?2g/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為3?5%，離子去污劑質(zhì)量百分濃度為0.1?1%，蛋白保護(hù)劑質(zhì)量百分濃度為0.5?3%，Proclin-300質(zhì)量百分濃度為0.01?0.05%，余量為純化水，所述離子去污劑為高碳醇、月旨肪酸、高碳脂肪胺、脂肪酰胺、環(huán)氧乙烷或聚乙二醇，所述蛋白保護(hù)劑為甘油或多糖。2.如權(quán)利要求1所述的血液前處理液，其特征在于所述多糖為半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和麥芽糖的至少其中一種。3.如權(quán)利要求1所述的血液前處理液，其特征在于成份及濃度如下:氯化納濃度為3g/L,磷酸二氫鉀濃度為0.2g/L，磷酸氫二納濃度為2g/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為3%，離子去污劑高碳醇質(zhì)量百分濃度為0.1%，蛋白保護(hù)劑甘油質(zhì)量百分濃度為0.5%，Proclin-300質(zhì)量百分濃度為0.01%，余量為純化水。4.如權(quán)利要求2所述的血液前處理液，其特征在于成份及濃度如下:氯化納濃度為5g/L,磷酸二氫鉀濃度為0.lg/L，磷酸氫二納濃度為lg/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為4%，離子去污劑脂肪酸或高碳脂肪胺質(zhì)量百分濃度為0.5%，蛋白保護(hù)劑半乳糖質(zhì)量百分濃度為1.5%，Proclin-300質(zhì)量百分濃度為0.03%，余量為純化水。5.如權(quán)利要求2所述的血液前處理液，其特征在于成份及濃度如下:氯化納濃度為Sg/L,磷酸二氫鉀濃度為0.15g/L，磷酸氫二納濃度為1.5g/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為5%，離子去污劑環(huán)氧乙烷或聚乙二醇質(zhì)量百分濃度為1%，蛋白保護(hù)劑為半乳糖和阿拉伯糖按質(zhì)量比1:1配制的混合多糖，其質(zhì)量百分濃度為3%，Proclin-300質(zhì)量百分濃度為0.05%，余量為純化水。6.如權(quán)利要求2所述的血液前處理液，其特征在于成份及濃度如下:氯化納濃度為8g/L,磷酸二氫鉀濃度為0.15g/L，磷酸氫二納濃度為1.5g/L，小牛血清白蛋白質(zhì)量百分濃度為5%，離子去污劑環(huán)氧乙烷或聚乙二醇質(zhì)量百分濃度為1%，蛋白保護(hù)劑為半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和麥芽糖按質(zhì)量比1:1:1:1配制混合多糖，其質(zhì)量百分濃度為2%，Proclin-300質(zhì)量百分濃度為0.05%，余量為純化水。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種血液前處理液，其由氯化納、磷酸二氫鉀、磷酸氫二納、小牛血清白蛋白、離子去污劑、蛋白保護(hù)劑、Proclin-300及水組成，其中離子去污劑可以降低界面自由能，改變欲除去物與基質(zhì)的界面性質(zhì)，通過(guò)吸附層的電荷相斥，過(guò)濾或磁力吸附，油或活性多糖與小牛血清白蛋白的生物活性相融合增強(qiáng)作用；因此利用本發(fā)明的血液前處理液，血液離心后，白細(xì)胞、疾患因子與靶細(xì)胞等得到濃縮與純化，且不會(huì)損傷細(xì)胞的表面生物活性。
【IPC分類】G01N1/34, G01N1/28, G01N1/40
【公開(kāi)號(hào)】CN104931317
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510316586
【發(fā)明人】張曉晶, 沈挺, 樂(lè)飚
【申請(qǐng)人】寧波美晶醫(yī)療技術(shù)有限公司
【公開(kāi)日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年6月11日