一種龍虎人丹植物藥中的6種揮發(fā)性成分的含量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥成分的含量測(cè)定方法及其質(zhì)量控制方法，具體涉及龍虎人丹植物 藥的含量檢測(cè)法及其質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 龍虎人丹（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20025168)創(chuàng)制于1909年，由黃楚九先生根據(jù)古方"諸葛行 軍散"化裁而來(lái)，主要由薄荷腦、下香、肉桂、兒茶、甘草等十一味中藥構(gòu)成，其功能主治為清 暑開(kāi)菌，辟穢排濁，驅(qū)風(fēng)健胃。1923年"龍虎牌"和"人丹及圖案"商標(biāo)向政府申請(qǐng)并獲核 準(zhǔn)，成為國(guó)內(nèi)第一個(gè)規(guī)范的醫(yī)藥注冊(cè)商標(biāo)，是上海乃至中國(guó)的民族制藥工業(yè)發(fā)端的標(biāo)志。百 年來(lái)龍虎人丹產(chǎn)品銷(xiāo)售經(jīng)久不衰，成為銷(xiāo)售過(guò)億的獨(dú)家傳統(tǒng)中藥品種。
[0003] 由于龍虎人丹由中藥制成，受到藥物產(chǎn)地、采收季節(jié)及制備工藝等多種因素的影 響，制成的制劑在確保療效一致性上具有較大難度。因此，有必要對(duì)龍虎人丹植物藥的成分 的組成和含量進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。目前，關(guān)于龍虎人丹的質(zhì)量控制方法主要有顯微鑒別、 薄層鑒別、高效液相色譜法和氣相色譜法，張玉杰等利用氣相色譜法測(cè)定其中冰片、薄荷腦 的含量，上述方法只針對(duì)龍虎人丹中的單個(gè)成分，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，樣品檢測(cè)前處理步驟復(fù)雜 等。到目前為止，未見(jiàn)有關(guān)龍虎人丹中同時(shí)檢測(cè)多種成分的研究報(bào)道，無(wú)該復(fù)方中（1)薄荷 醇、（2)異龍腦、（3)冰片、（4)茵香腦、（5)下香酷、（6)己醜下香酷6種揮發(fā)性成分的同時(shí) 測(cè)定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的主要目的是利用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，對(duì)龍虎人丹植物藥中6種揮發(fā)性成分進(jìn) 行定性定量分析，確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
[0005] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案：
[0006] 一種龍虎人丹植物藥中6種揮發(fā)性成分含量的檢測(cè)方法，該方法由W下步驟組 成：
[0007] (1)配制供試品溶液；取龍虎人丹植物藥用溶劑配制成0. 5~5mg/ml的供試品溶 液；
[0008] 配制對(duì)照品溶液；精密稱取對(duì)照品適量，置于10血容量瓶中，用溶劑溶解并稀釋 至刻度。搖勻，得各對(duì)照品儲(chǔ)備液，置于4C冰箱保存。
[0009] 精密量取各儲(chǔ)備液適量，用己酸己醋稀釋，得各對(duì)照品的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。向混合對(duì) 照品溶液中加入內(nèi)標(biāo)物蔡10-20yL內(nèi)標(biāo)物的終濃度為25-50yg/mL。
[0010] 按進(jìn)樣量為1~lOuL對(duì)VF-WAXms毛細(xì)管色譜柱進(jìn)樣，載氣為氮?dú)?，采用?度升溫方法；初始溫度為60-9(TC，維持1-2分鐘，W25-50°C每分鐘的升溫速率升至 240-26(TC，維持1分鐘，進(jìn)樣口溫度；240-26(TC，不分流，流速為2. 5血.min-l，溶劑延遲： 4min,進(jìn)樣 2yL。
[0011] 獲得供試品藥物及對(duì)照品藥物的離子色譜圖；
[0012] (2)所得對(duì)照品溶液的離子色譜圖從左至右分別為薄荷醇、異龍腦、冰片、蔡（內(nèi) 標(biāo)物）、茵香腦、下香酷、己醜下香酷。
[0013] 供試品的離子色譜圖與對(duì)照品溶液的圖譜比較，相應(yīng)成分的保留時(shí)間相同的峰即 是與該成分相同物質(zhì)的特征峰，6種成分分別按照表1中回歸方程1-6的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含 量：
[0014]表 1
[0015]
[0016] 上述步驟中，
[0017] 配制供試品溶液或?qū)φ掌啡芤核玫娜軇榧核峒捍?，或者是與之流動(dòng)性相似的 溶劑；
[001引實(shí)驗(yàn)中質(zhì)譜條件為：離子源為EI，碰撞氣為氮?dú)饧暗獨(dú)猓魉俜謩e為 2. 25血?min-l流速為1. 5血*min-l，EI源溫度為250。電離能量為70Ev，分析時(shí)間為8. 6 分鐘。
[0019] 本發(fā)明中優(yōu)選的程度升溫方法為：
[0020] 初始溫度為70-8(TC，維持1分鐘，W25-4(TC每分鐘的升溫速率升至245-26(TC， 維持1分鐘，進(jìn)樣口溫度；240-25(TC，不分流，流速為2. 5血.min-l，溶劑延遲；4分鐘，進(jìn)樣 2yL。
[0021] 本發(fā)明中最優(yōu)選的程度升溫方法為：
[0022] 初始溫度為8(TC，維持1分鐘，W25°C每分鐘的升溫速率升至245°C，維持1分鐘， 進(jìn)樣口溫度；25(TC，不分流，流速為2. 5血?min-1，溶劑延遲；4min，進(jìn)樣2yL。
[0023] 本發(fā)明中供試品配制過(guò)程中的稀釋溶劑為己酸己醋。
[0024]本發(fā)明中所述龍虎人丹植物藥為固態(tài)時(shí)，其供試品溶液的制作方法可W為：龍虎 人丹粉碎成細(xì)粉，稱取粉末30mg，加己酸己醋6mU超聲處理20-30分鐘，稱定重量，補(bǔ)足所 失重量，10000-15000rpm離也lOmin后取上清，加入內(nèi)標(biāo)物蔡20yL，進(jìn)樣。
[0025] 本發(fā)明中所述龍虎人丹植物藥為固態(tài)時(shí)，其供試品溶液的制作方法可W為索氏提 取法；即龍虎人丹粉碎成細(xì)粉，稱取龍虎人丹粉末30mg，加lOmL己酸己醋，索式提取20-30 分鐘，10000-15000巧m離也10分鐘后取上清，加入內(nèi)標(biāo)物蔡20y以進(jìn)樣。
[0026] 本發(fā)明中所述龍虎人丹植物藥為固態(tài)時(shí)，其供試品溶液的制作方法可W為加熱回 流法；即龍虎人丹粉碎成細(xì)粉，稱取龍虎人丹粉末30mg，加lOmL己酸己醋，加熱回流20-30 分鐘，10000-15000巧m離也10分鐘后取上清，加入內(nèi)標(biāo)物蔡20y以進(jìn)樣。
[0027] 本發(fā)明中龍虎人丹植物藥為固態(tài)時(shí)，超聲處理優(yōu)選為30分鐘，12000rpm離也。
[0028] 本發(fā)明中可W使用己酸下醋、異丙醇或氯仿來(lái)代替供試品溶液的制作過(guò)程中所使 用的己酸己醋。
[0029] 本發(fā)明中可W使用己酸下醋、異丙醇或氯仿來(lái)代替供試品溶液的索氏提取法制作 過(guò)程中所使用的己酸己醋。
[0030] 本發(fā)明中可W使用己酸下醋、異丙醇或氯仿來(lái)代替供試品溶液的加熱回流法制作 過(guò)程中所使用的己酸己醋。
[0031] 本發(fā)明中可W使用異丙醇來(lái)替代對(duì)照品溶液配制過(guò)程中己酸己醋溶劑。
[0032] 本發(fā)明中可使用氯仿來(lái)替代對(duì)照品溶液配制過(guò)程中己酸己醋溶劑
[0033] 本發(fā)明中精密度結(jié)果見(jiàn)表2,RSD< 4. 32%，表明精密度良好。準(zhǔn)確度考察結(jié)果見(jiàn) 表3,回收率在92. 44-103. 64%之間，RSD< 4. 10%，表明準(zhǔn)確度良好。
[0034] 表 2
[00 巧]
[0036] 本發(fā)明的重現(xiàn)性結(jié)果見(jiàn)表3,RSD在0. 16-1. 2%之間，結(jié)果表明樣品重現(xiàn)性良好。
[0037] 表 3
[003引
[0039] (1)薄荷醇、似異龍腦、（3)冰片、（4)茵香腦、妨了香酷、做己醜了香酷
[0040] 此外，本發(fā)明的穩(wěn)定性考察顯示，室溫條件下，龍虎人丹樣品溶液至少12h內(nèi)穩(wěn)定 巧SD< 4. 33% )。
[0041] 方法學(xué)考察結(jié)果顯示，本方法準(zhǔn)確可靠，符合含量測(cè)定方法學(xué)要求。
【附圖說(shuō)明】
[004引圖1為總離子色譜圖，其中A為對(duì)照品溶液；B為龍虎人丹樣品，從左到右色譜峰 分別表示（1)薄荷醇、（2)異龍腦、（3)冰片、（4)茵香腦、（5)下香酷、（6)己醜下香酷。
[0043] 圖2為對(duì)照品A和樣品B中的提取離子色譜圖：從左到右色譜峰分別表示（1)薄 荷醇、（2)異龍腦、（3)冰片、（4)茵香腦、（5) 了香酷、（6)己醜了香酷。
【具體實(shí)施方式】
[0044]W下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本方面做進(jìn)一步的描述。
[004引實(shí)施例一：
[0046] 1，儀器與試藥
[0047] 儀器；Agilent7890A氣相-Agilent7000BH重四級(jí)桿質(zhì)譜（美國(guó)安捷倫科技公 司）
[0048] 試藥；龍虎人丹植物藥
[0049] 其他試劑：己酸己醋、己酸下醋、異丙醇、氯仿。
[0050] 2,方法
[0051] (1)配制供試品溶液；取龍虎人丹植物藥用溶劑配制成0. 5~5mg/ml的供試品溶 液；
[0052] 配制對(duì)照品溶液；精密稱取對(duì)照品適量，置于lOmL容量瓶中，用溶劑溶解并稀釋 至刻度。搖勻，得各對(duì)照品儲(chǔ)備液，置于4C冰箱保存。
[0053] 精密量取各儲(chǔ)備液適量，用己酸己醋稀釋，得各對(duì)照品的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。向混合對(duì) 照品溶液中加入內(nèi)標(biāo)物蔡10-20yL內(nèi)標(biāo)物的終濃度為25-50yg/mL。
[0054] 所述龍虎人丹植物藥為固態(tài)時(shí)，其供試品溶液的制作方法為：龍虎人丹粉碎成 細(xì)粉，稱取粉末30mg，加己酸己醋6mU超聲處理20-30分鐘，稱定重量，補(bǔ)足所失重量， 10000-15000巧111離也lOmin后取上清，加入內(nèi)標(biāo)物蔡20y以進(jìn)樣。
[0055] 按進(jìn)樣量為1~lOuL對(duì)VF-WAXms毛細(xì)管色譜柱進(jìn)樣，載氣為氮?dú)猓捎贸?度升溫方法；初始溫度為60-9(TC，維持1-2分鐘，W25-50°C每分鐘的升溫速率升至 240-26(TC，維持1分鐘，進(jìn)樣口溫度；240-26(TC，不分流，流速為2. 5血.min-l，溶劑延遲： 4min,進(jìn)樣 2yL。
[0056] 獲得供試品藥物及對(duì)照品藥物的離子色譜圖；
[0057] (2)所得對(duì)照品溶液的離子色譜圖從左至右分別為薄荷醇、異龍腦、冰片、蔡（內(nèi) 標(biāo)物）、茵香腦、下香酷、己醜下香酷。
[0058] 供試品的離子色譜圖與對(duì)照品溶液的圖譜比較，相應(yīng)成分的保留時(shí)間相同的峰即 是與該成分相同物質(zhì)的特征峰，6種成分分別按照表1中回歸方程1-6的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含 量：
[0059] 表1
[0060]
[0061] 上述步驟中，
[0062] 配制供試品溶液或?qū)φ掌啡芤核玫娜軇榧核峒捍?，或者是與之流動(dòng)性相似的 溶劑；
[0063] 實(shí)驗(yàn)中質(zhì)譜條件為：離子源為EI，碰撞氣為氮?dú)饧暗獨(dú)猓魉俜謩e為 2. 25血?min-l流速為1. 5血*min-l，EI源溫度為250。電離能量為70Ev，分析時(shí)間為8. 6 分鐘。
[0064] 3、結(jié)果：
[0065] (1)供試品及對(duì)照品的總離子色譜圖如圖1及提取離子色譜圖如圖2,由左至右的 特征峰分別代表薄荷醇、異龍腦、冰片、蔡（內(nèi)標(biāo)物）、茵香腦、下香酷、己醜下香酷。
[0066] (2)每個(gè)成分按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量結(jié)果見(jiàn)表4。
[0067]表 4
[0068]
[0069] 實(shí)施例二：
[0070] 1，儀器與試藥
[0071] 儀器；Agilent7890A氣相-Agilent7000BH重四級(jí)桿質(zhì)譜（美國(guó)安捷倫科技公 司）
[0072] 試藥；龍虎人丹植物藥
[0073] 其他試劑：己酸己醋、己酸下醋、異丙醇、氯仿。
[0074] 2,方法
[00巧](1)配制供試品溶液；取龍虎人丹植物藥用溶劑配制成0. 5~5mg/ml的供試品溶 液；
[0076] 配制對(duì)照品溶液；精密稱取對(duì)照品適量，置于lOmL容量瓶中，用溶劑溶解并稀釋 至刻度