一種包覆有配體的納米顆粒表面配體層厚度的測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及納米顆粒檢測(cè)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種包覆有配體的納米顆粒表面配體層 厚度的測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] (PS離屯、粒度儀為圓盤離屯、式納米粒度分析儀，采用的是差示沉淀法進(jìn)行顆粒粒 度的測(cè)量和分析。CPS離屯、粒度儀在高速旋轉(zhuǎn)的離屯、轉(zhuǎn)盤中建立起梯度溶液，常用的梯度液 是庶糖的水溶液，測(cè)試步驟具體為：
[0003] (1)配制梯度溶液；準(zhǔn)備兩種不同濃度的梯度液，并按照不同比例混合兩種濃度 的溶液從而配制梯度溶液；
[0004] (2)建立梯度；先向旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)盤中注入高濃度溶液，并依次逐步降低注入溶液濃 度，最后注入最低濃度梯度液；在轉(zhuǎn)盤中外側(cè)溶液濃度高、內(nèi)側(cè)溶液濃度低，由于高速旋轉(zhuǎn)， 不同濃度溶液短時(shí)間（可維持8小時(shí)）內(nèi)可保持梯度而不會(huì)混合；
[0005] (3)上樣測(cè)試；待梯度液穩(wěn)定后用進(jìn)樣注射器將樣品從轉(zhuǎn)盤中間進(jìn)樣口加入，顆 粒由中屯、向周圍沉降；由于大顆粒沉降較快，小顆粒沉降較慢，通過檢測(cè)沉降速度，得到樣 品的粒度分布信息。
[0006] 根據(jù)斯多克斯定律（StokesLaw),如果顆粒在液體內(nèi)的一個(gè)重力場(chǎng)中沉淀，沉淀 速度與顆粒粒度直徑的平方成正比，粒度相差百分之幾的顆粒之間都會(huì)有非常顯著的沉淀 速度差。
[0007] (PS離屯、粒度儀測(cè)試系統(tǒng)在一般情況下可W分辨粒度差別小于5%的顆粒，最小 可分辨的粒度差為2%，該比同類其他分析方法的精度都要高很多。（PS標(biāo)定顆粒的大小是 通過直接物理測(cè)量方法校正過的，而且標(biāo)定顆粒都與美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)研究院NIST的其它 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行過交叉對(duì)比，確保均值、峰值寬度或者半峰寬度等方面的誤差在±2%之內(nèi)。
[000引尺寸在1~IOOnm范圍內(nèi)的納米顆粒在生物成像、藥物輸送、癌癥治療等重要領(lǐng)域 都有很重要的應(yīng)用前景。由于納米顆粒具有極高的比表面積，也具有非?；钴S的表面化學(xué) 性。故當(dāng)納米顆粒進(jìn)入到生物體液中就很容易被覆蓋一層復(fù)雜的生物分子（如蛋白質(zhì)，天 然有機(jī)高分子，表面活性劑，酶等），形成生物分子包覆層，即表面配體。具有表面配體的納 米顆粒在尺寸上發(fā)生變化，進(jìn)而改變納米顆粒的表面性質(zhì)，從而控制納米顆粒和細(xì)胞之間 的相互作用，決定著納米顆粒進(jìn)入生物環(huán)境中后續(xù)的細(xì)胞/組織反應(yīng)。因此，表面配體厚度 對(duì)納米顆粒在生物系統(tǒng)中的效應(yīng)有著至關(guān)重要的作用。
[0009] 由于在納米顆粒表面包覆配體層厚納米顆粒仍可W穩(wěn)定分散在溶劑中。目前多數(shù) 方法將樣品做成干態(tài)再測(cè)試粒徑，例如掃描電鏡和透射電鏡。而干態(tài)納米顆粒配體層與其 在溶劑中穩(wěn)定分散時(shí)的狀態(tài)有很大差別。故在干態(tài)下檢測(cè)得到的配體層厚度是不準(zhǔn)確的， 所W單純將包覆了配體層的粒徑與納米裸顆粒的粒徑相減，無(wú)法獲得配體層的厚度。
[0010] 因此，現(xiàn)有技術(shù)中還無(wú)法精確測(cè)量出納米顆粒表面包覆的配體層的厚度，而本領(lǐng) 域急需要開發(fā)一種能夠測(cè)量納米顆粒配體層厚度的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種能夠測(cè)量納米顆粒配體層 厚度的方法。所述方法能夠準(zhǔn)確測(cè)量出納米顆粒表面的配體厚度。
[0012] 本發(fā)明通過如下具體方案實(shí)現(xiàn)：
[0013] 一種包覆有配體的納米顆粒表面配體層厚度的測(cè)定方法，包括如下步驟：
[0014] (1)在梯度溶液中，采用CPS離屯、粒度儀測(cè)定未包覆配體的納米裸顆粒的粒徑d。；
[0015] (2)在相同的梯度溶液中，采用（PS離屯、粒度儀測(cè)定包覆了配體的納米顆粒的粒 徑d;
[0016] (3)根據(jù)式（I)計(jì)算配體層的厚度：
[0017]
[0018] 其中，d是包覆了配體的納米顆粒的粒徑；屯是未包覆配體的納米裸顆粒的粒徑； A1是配體層的厚度；P,是納米裸顆粒的材質(zhì)密度；PP為梯度溶液的平均密度。
[0019]其中，所述 0. 25PS，例如 0. 〇lPs、〇. 〇8Ps、〇.lPs、〇. 13Ps、〇. 16Ps、 0. 19Ps、0. 21Ps、0. 24Ps等，優(yōu)選P0.Ips。
[0020] 本發(fā)明步驟（I)和步驟（2)所述離屯、粒度儀的轉(zhuǎn)速為10000~20000轉(zhuǎn)/min,例 如 10200 轉(zhuǎn) /min、10900 轉(zhuǎn) /min、11500 轉(zhuǎn) /min、14600 轉(zhuǎn) /min、16000 轉(zhuǎn) /min、18500 轉(zhuǎn) / min、19000 轉(zhuǎn)/min等。
[002。 本發(fā)明步驟（1)和步驟（2)所述離屯、粒度儀的離屯、時(shí)間為5~lOmin，例如6min、 7min、8min、9min等。
[0022] 本發(fā)明步驟（1)離屯、粒度儀測(cè)定未包覆配體的納米裸顆粒的粒徑屯過程中，未包 覆配體的納米裸顆粒W溶液形式上樣，上樣量為90~110 優(yōu)選100UL;
[0023] 所述上樣的未包覆配體的納米裸顆粒的溶液濃度為9Xl〇w個(gè)納米顆粒/血。
[0024] 本發(fā)明步驟（2)離屯、粒度儀測(cè)定包覆了配體的納米顆粒的粒徑d過程中，包覆了 配體的納米顆粒W溶液形式上樣，上樣量為90~IlOuL優(yōu)選IOOyL;
[0025] 所述上樣的包覆了配體的納米顆粒的溶液濃度為9Xl〇w個(gè)納米顆粒/血。
[0026] 本發(fā)明步驟（1)和步驟（2)梯度溶液的梯度個(gè)數(shù)為6~12,例如7、8、9、10、11等， 優(yōu)選9。
[0027] 本發(fā)明所述包覆了配體的納米顆粒通過如下方法制備：
[002引 （r)W體積比1:1混合納米裸顆粒溶液和配體溶液，37°C下在100轉(zhuǎn)/min條件 下，震蕩解育0.化，得到包覆了配體的納米顆粒。
[0029] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述包覆有配體的納米顆粒表面配體層厚度的測(cè)定方 法包括如下步驟：
[0030] (1)利用離屯、粒度儀，在具有9個(gè)梯度的梯度溶液中，上樣未包覆配體的納米裸顆 粒的溶液，上樣量為90~110 測(cè)定未包覆配體的納米裸顆粒的粒徑屯；
[0031] (2)W體積比I:I混合納米裸顆粒溶液和配體溶液，37°C下在100轉(zhuǎn)/min條件下， 震蕩解育0.化，得到包覆了配體的納米顆粒；
[0032] (3)利用離屯、粒度儀，在具有9個(gè)梯度的梯度溶液中，上樣包覆了配體的納米顆粒 的溶液，上樣量為90~110yL測(cè)定包覆了配體的納米顆粒d;
[0033] (3)根據(jù)式（I)計(jì)算配體層的厚度：
[0034]
[0035] 其中，d是包覆了配體的納米顆粒的粒徑；屯是未包覆配體的納米裸顆粒的粒徑； A1是配體層的厚度；P,是納米裸顆粒的材質(zhì)密度；PP為梯度溶液的平均密度。
[0036] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果；
[0037] (1)首次測(cè)定了包覆有配體的納米顆粒表面配體層的厚度，為研究配體厚度對(duì)納 米顆粒在生物系統(tǒng)中的效應(yīng)的影響做了準(zhǔn)備；
[0038] (2)測(cè)試方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，偏差小。
【附圖說(shuō)明】
[0039] 圖1是實(shí)施例1~8提供的配體濃度與配體層厚度的關(guān)系圖。
【具體實(shí)施方式】
[0040] 為便于理解本發(fā)明，本發(fā)明列舉實(shí)施例如下。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明了，所述實(shí)施 例僅僅是幫助理解本發(fā)明，不應(yīng)視為對(duì)本發(fā)明的具體限制。
[00川實(shí)施例1
[0042] -種包覆有胎牛血清蛋白炬SA)配體的金納米顆粒（GN巧表面配體層厚度的測(cè)定 方法，所述方法包括如下步驟：
[004引 （1)配制梯度溶液，并建立梯度：
[0044] 配制16wt%的庶糖水溶液，密度為1. 06g/cm3;之后W該濃度為中間值配制9個(gè)梯 度的梯度溶液，濃度分別為8%、10%、12%、14%、16%、18%、20%、22%、24%;
[0045] 開啟CPS的轉(zhuǎn)盤旋轉(zhuǎn)，由高到低依次注入梯度溶液，從而建立梯度；
[0046] (2)制備納米金顆粒的水分散液；
[0047] 取500化的GNP，再加500化超