預測孕婦分娩時間的方法
【專利說明】
[0001] 本申請要求2013年1月2日提交的61/748, 310號和2013年11月26日提交的 61/909, 238號美國臨時專利申請的優(yōu)先權，通過引用將二者全部并入本文。
技術領域
[0002] 本申請內容涉及預測妊娠患者中分娩時間（time-to-delivery, TTD)和/或確定 患者早產（preterm labor)和/或絨毛膜自發(fā)破裂的風險的方法。
【背景技術】
[0003] 在面臨早娩風險的妊娠中，分娩時間（TTD)的預測在臨床上是很重要的，特別是 對于皮質激素的給藥（在給藥的24小時至7天內效果最佳）。此外，早生風險高的患者應 在三級護理病房中分娩。特別是考慮到類固醇的重復使用尚有爭議，產科醫(yī)師就擔負著在 面臨早娩風險的患者中預測TTD的任務。
[0004] 美國產科和婦科醫(yī)師學會（AC0G)在其最近的早產處置規(guī)范公報中指出，雖然已 提出并評估了很多鑒別面臨早生風險的婦女的方法，但只有超聲波檢查（用以確定宮頸 長度）和胚胎纖粘連蛋白（fibronectin)試驗顯示出有效。超聲波檢查或胚胎纖粘連蛋 白試驗或二者的組合在鑒別早娩風險高的婦女時可能有用，但其臨床用處可能主要取決 限于其鑒別最不傾向分娩的婦女的能力（即，試驗的陰性預測值（negative predictive value, NPV))，而不是鑒別最傾向分娩的婦女（即，陽性預測值（positive predictive value，PPV)高的試驗）的能力。因而，迫切需要具有高PPV的試驗以便準確地預測臨近的 分娩，并允許有利健康的干預。

【發(fā)明內容】

[0005] 如上文所討論的，技術領域中需要的是用于準確診斷有臨近分娩（例如14天內、 7天內或48小時內）風險的患者的改進的裝置和方法，特別是出現了提示早產（preterm labor, PTL)的跡象、征兆或不適，但是沒有胎膜破裂（rupture of fetal membranes, ROM) 臨床證據的患者的改進的裝置和方法。對于醫(yī)護人員而言，此類改進的裝置和方法對決定 如何管理其患者有重要價值：例如，決定是否給予安胎藥來延長妊娠、給予皮質激素來改善 胎兒的呼吸發(fā)育、給予抗生素降低感染風險（產時和產后）、建議臥床休息和/或增加觀察 和胎兒監(jiān)測等。
[0006] 因而，在某些方面，本
【發(fā)明內容】
提供預測分娩時間（TTD)的方法，其包括（例如，包 含、本質上由下列構成、由下列構成）：(a)使取自孕婦的陰道液樣品與至少兩種PAMG-1特 異性單克隆抗體接觸，其中所述抗體的至少一種與在樣品中存在時的PAMG-1結合，從而形 成PAMG-1/單克隆抗體復合物；(b)只有當樣品中PAMG-1的濃度超過預定的檢測閾值時， 檢測樣品中PAMG-1/單克隆抗體復合物的存在；和（c)如果檢測到PAMG-1，則預測該孕婦 將在預定的時間框架內分娩。在另一方面，預測TTD的方法包括（a)使取自孕婦的陰道液 樣品與至少兩種PAMG-1特異性單克隆抗體接觸，其中所述抗體的至少一種與在樣品中存 在時的PAMG-1結合，從而形成PAMG-1/單克隆抗體復合物；(b)只有當樣品中PAMG-1的濃 度超過預定的檢測閾值時，檢測樣品中PAMG-1/單克隆抗體復合物的存在；和（c)如果檢測 到PAMG-1，則預測該孕婦將在預定的時間框架內分娩；或（d)如果沒有檢測到PAMG-1，則預 測該孕婦將不會在預定的時間框架內分娩。在某些實施方案中，步驟（d)包含在從孕婦獲 得陰道液樣品時預測該孕婦將不會在預定的時間框架內分娩。預測分娩時間的預定的時間 框架可以是例如約48小時以內；約7小時以內；和/或（iii)約14天以內。在某些方面， 預測TTD的方法具有下列陽性預測值（PPVs)的一個或多個：（i)對于預測48小時以內的 TTD，至少約39% ; (ii)對于預測7天以內的TTD，至少約64% ;和（iii)對于預測約14天 以內的TTD，至少約77%。在某些方面，預測TTD的方法具有下列PPVs的一個或多個：（i) 對于預測約48小時以內的TTD，約45. 5% ; (ii)對于預測約7天以內的TTD，約81. 8% ;和 (iii)對于預測14天以內的TTD，約90. 9%。在某些方面，本方法具有大于約90%的陰性 預測值（NPV)。在某些方面，預測TTD的方法具有下列PPVs的一個或多個：（i)對于預測 48小時以內的TTD，約45. 5% ;和/或（ii)對于預測7天以內的TTD，約78. 3% (例如約 78% );和/或（iii)對于預測14天以內的TTD，約87 %。在某些方面，本方法具有87 %以 上的陰性預測值（NPV)。還在其它方面，本方法具有下列NPVs的一個或多個：（i)對于預 測48小時以內的TTD，約100%;和/或（ii)對于預測7天以內的TTD，約97. 4% (例如約 87%);和/或（iii)對于預測14天以內的TTD，約93. 6% (例如約84%)。
[0007] 在其它方面，本
【發(fā)明內容】
提供確定早娩風險的方法，其中所述方法包括（例如，包 含、本質上由下列構成、由下列構成）：(a)使取自孕婦的陰道液樣品與至少兩種PAMG-1特 異性單克隆抗體接觸，其中所述抗體的至少一種與在樣品中存在時的PAMG-1結合，從而形 成PAMG-1/單克隆抗體復合物；(b)只有當樣品中PAMG-1的濃度超過預定的檢測閾值時， 檢測樣品中PAMG-1/單克隆抗體復合物的存在；和（c)如果檢測到PAMG-1，則預測該孕 婦面臨早娩風險。在其它方面，本
【發(fā)明內容】
提供確定早娩風險的方法，其中所述方法包括 (例如，包含、本質上由下列構成、由下列構成）：（a)使取自孕婦的陰道液樣品與至少兩種 PAMG-1特異性單克隆抗體接觸，其中所述抗體的至少一種與在樣品中存在時的PAMG-1結 合，從而形成PAMG-1/單克隆抗體復合物；(b)只有當樣品中PAMG-1的濃度超過預定的檢 測閾值時，檢測樣品中PAMG-1/單克隆抗體復合物的存在；和（c)如果檢測到PAMG-1，則預 測該孕婦面臨早娩風險；或（d)如果沒有檢測到PAMG-1，則預測該孕婦沒有面臨早娩風險。 在某些實施方案中，步驟（d)包含在從孕婦獲得陰道液樣品時預測該孕婦沒有面臨早娩風 險。
[0008] 還在其它方面，本
【發(fā)明內容】
提供確定孕婦的絨毛膜自發(fā)破裂風險的方法，其中所 述方法包括（例如，包含、本質上由下列構成、由下列構成）：（a)使取自孕婦的陰道液樣品 與至少兩種PAMG-1特異性單克隆抗體接觸，其中所述抗體的至少一種與在樣品中存在時 的PAMG-1結合，從而形成PAMG-1/單克隆抗體復合物；(b)只有當樣品中PAMG-1的濃度 超過預定的檢測閾值時，檢測樣品中PAMG-1/單克隆抗體復合物的存在；和（c)如果檢測 到PAMG-1，則確定該孕婦面臨絨毛膜自發(fā)破裂的風險。在另一方面，本
【發(fā)明內容】
提供確定 孕婦的絨毛膜自發(fā)破裂風險的方法，其中所述方法包括：(a)使取自孕婦的陰道液樣品與 至少兩種PAMG-1特異性單克隆抗體接觸，其中所述抗體的至少一種與在樣品中存在時的 PAMG-1結合，從而形成PAMG-1/單克隆抗體復合物；(b)只有當樣品中PAMG-1的濃度超 過預定的檢測閾值時，檢測樣品中PAMG-1/單克隆抗體復合物的存在；和（c)如果檢測到 PAMG-1，則確定該孕婦面臨絨毛膜自發(fā)破裂的風險；或（d)如果沒有檢測到PAMG-1，則確定 該孕婦沒有面臨絨毛膜自發(fā)破裂的風險。在某些實施方案中，步驟（d)包含在從孕婦獲得 陰道液樣品時預測該孕婦沒有面臨絨毛膜自發(fā)破裂的風險。
[0009] 在某些方面，本方法用于確定自發(fā)的預產期前過早絨毛膜破裂的風險。
[0010] 另一方面，本文提供的是排除（預測為高度不可能）孕婦在預定的時間框架內自 發(fā)預產期前過早（preterm premature) ROM或早娩的方法。該方法包括：（a)使取自疑似有 早娩風險的孕婦的陰道液樣品與至少兩種PAMG-1特異性單克隆抗體接觸，其中所述抗體 的至少一種與在樣品中存在時的PAMG-1結合，從而形成PAMG-1/單克隆抗體復合物；(b) 只有當樣品中PAMG-1的濃度超過預定的檢測閾值時，檢測樣品中任何PAMG-1/單克隆抗體 復合物的存在；和（c)如果沒有檢測到PAMG-1，則排除（預測為高度不可能）在預定的時間 框架內的自發(fā)預產期前過早ROM或早娩。預定的時間框架可為例如約48小時以內；約7天 以內；和/或（iii)約14天以內。在某些方面，排除（預測為高度不可能）自發(fā)的預產期 前過早ROM或早娩的方法具有大于約90%的陰性預測值（NPV)。在某些方面，排除（預測為 高度不可能）自發(fā)的預產期前過早ROM或早娩的方法具有87%以上的陰性預測值（NPV)。 還在其它方面，該方法具有下列NPVs的一個或多個：（i)對于排除（預測為高度不可能）48 小時以內的自發(fā)預產期前過早ROM或早娩，約100%;和/或（ii)對于排除（預測為高度不 可能）7天以內的自發(fā)預產期前過早ROM或早娩，約97. 4% (例如約87%);和/或（iii) 對于排除（預測為高度不可能）14天以內的自發(fā)預產期前過早ROM或早娩，約93. 6 % (例 如約84% )。
[0011] 在以上公開的任何方面，該方法可進一步包括確定孕婦的胎膜是完整的。該方法 也可包括只有當孕婦出現下列一項以上、兩項以上、三項以上或所有四項時，才選擇該孕婦 進行該方法的分析：（i)提示早產的跡象、征兆或不適；（ii) 20周與36周6天之間的妊齡； (iii) 25mm以上的宮頸長度；和（iv) 3cm以下的宮頸擴張。該方法也可包括用采集器具（例 如植絨拭子（flocked swab))從孕婦采集陰道液樣品。在某些方面，植絨陰道拭子使存在于 陰道液樣品中的任何PAMG-1以1:4稀釋。在某些方面，植絨拭子使存在于陰道液樣品中的 任何PAMG-1在1:1至1:10的范圍內稀釋。該方法也可包括下列步驟的任何一個或多個：使 采集器具與溶劑接觸而釋放采集的陰道液樣品；在約30秒的時間框架上采集陰道液樣品； 采集陰道液樣品之后，使采集器具與溶劑接觸約30秒；使陰道液樣品與至少兩種PAMG-1特 異性單克隆抗體接觸5分鐘。
[0012] 在任何上述方面中，預定的PAMG-1檢測閾值水平可為4ng/ml。
[0013] 在任何上述方面中，在側流裝置（lateral flow device)中可使用至少兩種 PAMG-1特異性單克隆抗體。所述側流裝置可包括襯墊區(qū)和試驗區(qū)。試驗裝置的襯墊區(qū)可 包括所述至少兩種PAMG-1特異性單克隆抗體的一種，且試驗區(qū)可包括所述兩種的另一種。 在某些方面，襯墊區(qū)中的PAMG-1特異性單克隆抗體是可移動的且試驗區(qū)的PAMG-1特異性 單克隆抗體是固定化的。在某些方面，試驗裝置的試驗區(qū)進一步包括對照區(qū)。在某些方面， 所述至少兩種PAMG-1-特異性單克隆抗體為各自選自由下列抗體組成的組的抗體：雜交瘤 N271產生的M271，由俄羅斯國家工業(yè)微生物保藏中心（VKPM)保藏機構保藏并分配登錄號 VKPM-93 ;雜交瘤N52產生的M52,由VKPM保藏并分配登錄號VKPM-92 ;和雜交瘤N42產生的 M42,由VKPM保藏并分配登錄號VKPM-94。
[0014] 在任何上述方面中，襯墊區(qū)中可移動的抗體可以是雜交瘤N271產生的M271，由俄 羅斯國家工業(yè)微生物保藏中心（VKPM)保藏機構保藏并分配登錄號VKPM-93,且試驗區(qū)中固 定化的抗體可以是雜交瘤N52產生的M52,由VKPM保藏并分配登錄號VKPM-92。
[0015] 在上述使用裝置的某些方法中，裝置可以是圖1和2中說明的裝置。
[0016] 在某些方面，本
【發(fā)明內容】
提供試劑盒，其包括（例如，包含、本質上由下列構成、由 下列構成）：(a)當陰道液樣品中存在超出閾值水平的PAMG-1時檢測PAMG-1存在的裝置； 和陰道拭子。在某些方面，陰道拭子可以是植絨的。在某些方面，試劑盒進一步包括藥瓶和/ 或使用說明書。在某些方面，預定的閾值為4ng/ml。還在其它方面，裝置包括對PAMG-1特異 的第一和第二單克隆抗體。第一和第二PAMG-1-特異性單克隆抗體可具有不同的對PAMG-1 的結合特異性和親和力。在某些方面，第一和第二PAMG-1-特異性單克隆抗體各自可選自 由下列抗體組成的組：雜交瘤N271產生的M271，由俄羅斯國家工業(yè)微生物保藏中心（VKPM) 保藏機構保藏并分配登錄號VKPM-93 ;雜交瘤N52產生的M52,由VKPM保藏并分配登錄號 VKPM-92 ;和雜交瘤N42產生的M42,由VKPM保藏并分配登錄號VKPM-94。還在其它方面，試 驗裝置為側流裝置。試驗裝置可包括襯墊區(qū)和試驗區(qū)。試驗裝置的襯墊區(qū)可包括所述第一 和第二PAMG-1-特異性單克隆抗體之一，且試驗區(qū)可包括另一所述第一和第二PAMG-1-特 異性單克隆抗體。在某些方面，襯墊和試驗區(qū)之一或二者可含有附加的PAMG-1-特異性單 克隆抗體和/或所述前兩種PAMG-1-特異性單克隆抗體的混合物。在某些方面，襯墊區(qū)中 的PAMG-1-特異性單克隆抗體可以是可移動的，且試驗區(qū)中的PAMG-1-特異性單克隆抗體 可以是固定化的。還在另一方面，襯墊區(qū)中可移動的抗體為雜交瘤N271產生的M271，由俄 羅斯國家工業(yè)微生物保藏中心（VKPM)保藏機構保藏并分配登錄號VKPM-93 ;雜交瘤N52產 生的M52,由VKPM保藏并分配登錄號VKPM-92。在某些方面，試驗裝置的試驗區(qū)進一步包括 對照區(qū)。在某些方面，試劑盒可用于預測TTD的方法。另一方面，試劑盒可用于預測早娩風 險的方法。還在另一方面，試劑盒可用于預測孕婦絨毛膜自發(fā)破裂（ROM)(例如預產期前過 早ROM)的風險的方法。在某些方面，試劑盒中的裝置是圖1和2中說明的裝置。
[0017]宙義：
[0018] 如在本文中使用，"分娩時間（TTD) "是從預定的起始時間點（例如患者出現早產 的潛在跡象的時間）開始，直至妊娠的患者分娩其胎兒的時間總長度（例如若干小時、天、 周）。TTD可規(guī)定為"在預定的時間框架內"，例如從作出預測的時間起約14天以內（或約 7天以內，或約48小時以內）。如在本文中使用，"預測TTD"意指確定在預定的時間框架內 (例如2、7或14天以內）分娩的可能性。在某些方面，預測TTD包括確定在預定的時間點 以內自發(fā)的預產期前過早ROM或早娩為高度可能。在某些方面，預測TTD包括排除預定的 時間點以內的自發(fā)預產期前過早ROM或早娩（即確定在預定的時間框架內自發(fā)的預產期前 過早ROM或早娩為高度不可能）。
[0019] 如在本文中使用，"早娩"定義為在37周妊齡之前分娩。
[0020] 如在本文中使用，確定為"面臨早娩風險"的孕婦是出現了提示早產的跡象、征兆 或不適的孕婦。
[0021] 如在本文中使用，對于本文公開的試驗，"預定的檢測閾值"是以下水平（例如濃度 或量）：多肽或其它物質必須以該水平或高于該水平存在于樣品（例如未稀釋的陰道或宮 頸-陰道液樣品）中以便被檢測到（例如在本文公開的試驗（例如TTD試驗）中給出陽性 結果）。
[0022] 如在本文中使用，術語"抗體"表示對如本文所述的抗原（例如PAMG-1)有結合親 和力、不依賴于獲得多肽所使用的方法的任何多肽。例如，多肽可以是單克隆抗體或其片 段、多克隆抗體或其抗原結合片段，或如本文所述的對靶抗原有結合特異性的任何分子。
[0023] "抗原"是一種實體（例如蛋白質實體或肽），結合分子特異性的與其結合。
[0024] 術語"表位"或"抗原決定簇"是指與結合分子（例如抗體）特異性結合的抗原位 點。
[0025] 如在本文中使用的，對抗原（例如PAMG-1) "特異"的抗體結合至該抗原。
[0026] 如在本文中使用的，如果孕婦滿足如本文所公開的預定的標準，包括但不限于例 如：具有提示分娩的跡象、征兆或不適，但沒有臨床可檢測的破膜（ROM)(例如液體從宮頸 口泄漏、液體在陰道后穹窿中淤積），則該孕婦"適合于"或"需要"根據本文公開的方法預 測 ITD。
[0027] 如在本文中使用的術語"約"意指在如本領域技術人員確定的特定值的可接受誤 差范圍之內，其將部分取決于該值是如何測定或確定的，即測定體系制約。例如，按照技術 實踐"約"可表示1倍標準差以內或多于1倍標準差?？蛇x地，"約"可意指給定值的上至 20%、優(yōu)選上至10%、更優(yōu)選上至5%、且還更優(yōu)選上至1%的范圍?？蛇x地，特別是關于生 物體系或過程，該術語可表示數值的一個數量級以內，優(yōu)選5倍以內，更優(yōu)選2倍以內。特 定值記載在申請和權利要求書中時，除非另有聲明，術語"約"意指應當認為該特定值在可 接受的誤差范圍之內。
[0028] 除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語的含義與本
【發(fā)明內容】
所屬技術領 域普通技術人員通常的理解相同。在沖突的情況下，以本文件，包括定義為準。
[0029] 本文提及的所有出版物、專利申請、專利和其它參考文獻通過引用將其全部并入。 本文公開的材料、方法和實施例僅為說明性的，且并非旨在限制。
[0030] 本
【發(fā)明內容】
一個或多個實施方案的細節(jié)在下面的附圖和說明書中闡述。優(yōu)選的方 法和材料記述如下，但與本文的記載相似或等同的方法和材料也可用于本
【發(fā)明內容】
的實踐 或測試。本文所公開方法的其它特征、目標和優(yōu)點將從說明書、附圖和權利要求中清楚得 出。
【附圖說明】
[0031] 圖1為可用于檢測陰道液樣品中PAMG-1的存在（例如用于診斷分娩時間（TTD)) 的示例性裝置的示意性縱截面圖，圖2為該裝置的俯視圖。附圖標記表示示例性裝置的下 列組件：10 -M271抗體區(qū)；12 -襯墊；14 -試驗區(qū)；16 -對照區(qū)；18 -箭頭；22 -硝化纖維 素膜；24 -濾紙膜；26 -粘性硬塑料基材；28 -帶箭頭的半透明保護膜；和30 -不透明保 護膜。
【具體實施方式】

【發(fā)明內容】
[0032] 的各方面記述如下。
[0033]
[0034] 本
【發(fā)明內容】
提供用于預測預定的時間框架內（例如約14天、7天或48小時以內） 的TTD的改進方法。還提供用于確定早娩（例如在37周妊齡之前分娩）風險的方法，和用 于確定孕婦自發(fā)絨毛膜破裂（ROM)風險的方法。通常，本文公開的方法包括當PAMG-1以超 出預定的檢測閾值的水平存在時檢測PAMG-1的存在。本公開方法能以高PPV和高NPV預 測TTD和/或排除自發(fā)早娩。根據本文公開方法的陽性的試驗可指示分娩臨近（例如約14 天、7天或48小時以內）。陰性的試驗（沒有檢測到PAMG-1)指示分娩不太可能在14天、7 天或48小時以內發(fā)生。陽性的試驗也可指示孕婦面臨自發(fā)預產期前過早ROM和/或早娩 的風險，而陰性的試驗指示孕婦沒有面臨自發(fā)預產期前過早ROM或早娩的風險。于是，還提 供用于排除（預測為高度不可能）自發(fā)預產期前過早ROM或早娩的方法。
[0035] PAMG-1是在羊水中發(fā)現濃度高但在宮頸-陰道排出物中為低濃度背景水平的蛋 白質。近年來，醫(yī)學界日益接受了將PAMG-1的檢測廣泛地用于輔助醫(yī)護人員確認或排除 自發(fā)胎膜破裂（ROM)。