一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品檢驗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的 測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 食品添加劑靛藍(lán)在食品生產(chǎn)加工中作為食品著色劑被廣泛使用，產(chǎn)品中非色素有 機物的含量是該產(chǎn)品的重要質(zhì)量指標(biāo)，其含量多少直接體現(xiàn)了靛藍(lán)產(chǎn)品的品質(zhì)優(yōu)劣，因此， 國際上許多國家及組織均對靛藍(lán)中非色素有機物的含量進(jìn)行了嚴(yán)格的限制，其中，國際食 品法典委員會（FA0/WH0,1992)規(guī)定食品添加劑靛藍(lán)中靛紅-5-磺酸、5磺基鄰氨基苯甲酸、 鄰氨基苯甲酸總量不超過0.5% ;美國食品化學(xué)品法典（FCC V)中規(guī)定靛紅-5-磺酸不超 過0. 4 %，5-磺基鄰氨基苯甲酸不超過0. 2 %。
[0003] 但遺憾的是我國食品添加劑靛藍(lán)的國家安全標(biāo)準(zhǔn)尚未將非色素有機物限量指標(biāo) 列入。食品添加劑中非色素有機物的檢測方法主要為柱色譜法、紙色譜法和薄層色譜法以 及液相色譜法，但前三種方法因操作繁瑣，影響因素多，測定精密度較差，實際檢測工作中 很難被廣泛采用；尚未檢索到國內(nèi)用液相色譜法測定食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的報 道，國外液相色譜相關(guān)測定方法提取簡單且無凈化步驟，色素及可溶性有機物隨目標(biāo)檢測 物同時進(jìn)入色譜系統(tǒng)，造成了色譜圖干擾嚴(yán)重、洗脫駐留在色譜柱上色素及有機物時間過 長、色譜柱及檢測器壽命縮短等缺陷。為了彌補上述方法弊端與缺陷，經(jīng)過研究與試驗，制 定了一種專門針對食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的提取、凈化、濃縮以及高效液相色譜 測定分析方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于公開了一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
[0006] -種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法，包括以下步驟：
[0007] (1)、靛藍(lán)試樣溶液的提?。河脻舛葹?. 5%的氨水溶液溶解靛藍(lán)試樣并提取三種 非色素有機物；
[0008] (2)、靛藍(lán)試樣溶液的凈化和濃縮：用離子交換硅膠基SPE柱凈化、濃縮三種非色 素有機物；
[0009] (3)、靛藍(lán)試樣溶液測定：對凈化和濃縮后的試樣溶液用高效液相色譜儀進(jìn)行測 定，得到靛藍(lán)試樣中各成分的色譜圖，記錄色譜峰面積，并通過與標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)峰面積進(jìn)行 比較來測定含量；高效液相色譜儀的色譜條件為：
[0010] a、色譜柱選自柱長 250mm，內(nèi)徑 4. 6mm，填料 5 μπι 的 Agilent ZORBAX SB-C18 柱； 或性能相當(dāng)?shù)纳V柱；
[0011] b、保護(hù)柱選自柱長 15mm，內(nèi)徑 4. 6mm，填料 5 μπι 的 Agilent ZORBAX SB-C18 柱；或 性能相當(dāng)?shù)纳V柱；
[0012] c、柱溫：30 °C ;
[0013] d、流動相：A栗為0· 05mol/L醋酸銨溶液，B栗為甲醇；
[0014] e、檢測波長：245nm ;
[0015] f、進(jìn)樣體積：10 μ L。
[0016] 上述技術(shù)方案所述的一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法，其中，步 驟（1)的具體過程為：準(zhǔn)確稱取適量靛藍(lán)試樣，放入小燒杯中，用濃度為2. 5%的氨水溶液 溶解后，全部移入IOOmL容量瓶中，并用濃度為2. 5%的氨水溶液定容至刻度，搖勻，備用。
[0017] 上述技術(shù)方案所述的一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法，其中，準(zhǔn) 確稱取靛藍(lán)試樣〇. 5g，精確至0.0 Olg。本技術(shù)方案中0. 5g通常指0. 5g左右，精確至0.0 Olg 通常指單次稱量要精確到小數(shù)點后第三位。
[0018] 上述技術(shù)方案所述的一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法，其中，步 驟（2)的具體過程為：依次用甲醇5mL、水5mL活化SPE柱，準(zhǔn)確吸取步驟（1)獲得的試樣 溶液10.0 mL過此小柱；再依次用濃度為2. 5%的氨水溶液5mL和甲醇5mL淋洗，吹干小柱 后，用濃度為6 %甲酸甲醇溶液1.0 mL洗脫，洗脫液過0. 22 μ m濾膜后，供步驟（3)測定。
[0019] 上述技術(shù)方案所述的一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法，其中，步 驟（3)中高效液相色譜儀的梯度洗脫程序為：
[0021] 上述技術(shù)方案所述的一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法，其中，靛 藍(lán)試樣中非色素有機物的含量測定按式（一）計算。
[0023] 式中：
[0024] X一一試樣中非色素有機物的含量，單位為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)（％);
[0025] A一一樣液中非色素有機物峰面積；
[0026] Cs--標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中非色素有機物的濃度（g/mL);
[0027] V 樣液定容體積（mL);
[0028] As一一標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中非色素有機物峰面積；
[0029] m--稱取的試樣量（g)。
[0030] 10--樣液濃縮倍數(shù)
[0031] 上述技術(shù)方案所述的一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法，其中，所 述方法還包括標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖的建立，包括：
[0032] ( i )標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品館紅-5-橫酸納0· 2742g或館紅-5-橫 酸0. 2500g、5-磺基鄰氨基苯甲酸0. 2500g、鄰氨基苯甲酸0. 2500g，放入小燒杯中，用 0. 05mol/L醋酸銨溶液溶解后，全部移入IOOmL容量瓶中，并用0. 05mol/L醋酸銨溶液定容 至刻度，搖勻，備用；
[0033] 用移液槍準(zhǔn)確移取1.0 OmL上述溶液于另一 IOmL容量瓶中，并用0. 05mol/L醋酸 銨溶液定容至刻度，搖勻，備用；對應(yīng)靛紅-5-磺酸酸、5-磺基鄰氨基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸 標(biāo)準(zhǔn)使用溶液的濃度均為250 μ g/mL ;
[0034] ( ii )將標(biāo)準(zhǔn)品溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，得到標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖；高效液 相色譜儀的色譜條件為：
[0035] a、色譜柱選自柱長 250_，內(nèi)徑 4. 6_，填料 5 μπι 的 Agilent ZORBAX SB-C18 柱； 或性能相當(dāng)?shù)纳V柱；
[0036] b、保護(hù)柱選自柱長15_，內(nèi)徑4. 6_，填料5 μπι的Agilent ZORBAX SB-C18柱；或 性能相當(dāng)?shù)纳V柱；
[0037] c、柱溫：3(TC ;
[0038] d、流動相：A栗為0· 05mol/L醋酸銨溶液，B栗為甲醇；
[0039] e、檢測波長：245nm ;
[0040] f、進(jìn)樣體積：10 μ L ;
[0041] g、梯度洗脫程序為：
[0043] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0044] 1、本發(fā)明建立了一種有效的食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的提取、凈化和濃縮 的方法。
[0045] 2、本發(fā)明對試樣溶液進(jìn)行的凈化和濃縮，有效地避免了因色素及可溶性有機物隨 目標(biāo)檢測物同時進(jìn)入色譜系統(tǒng)造成的色譜圖干擾嚴(yán)重、洗脫駐留在色譜柱上色素及有機物 時間過長、色譜柱及檢測器壽命縮短等缺陷。
[0046] 3、本發(fā)明確立了一種食品添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的高效液相色譜測定分析 條件。
[0047] 4、本發(fā)明建立的液相色譜梯度洗脫程序可以有效分離三種非色素有機物。
【附圖說明】：
[0048] 1、圖1為非色素有機物標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖，其中1為5-磺基鄰氨基苯甲酸，2為靛 紅-5-磺酸，3為鄰氨基苯甲酸。
【具體實施方式】：
[0049] 為使本發(fā)明的技術(shù)方案便于理解，以下結(jié)合具體試驗例對本發(fā)明公開的一種食品 添加劑靛藍(lán)中非色素有機物的測定方法作進(jìn)一步的說明。
[0050] 本發(fā)明中所用試劑材料和儀器設(shè)備：
[0051] 1、高壓液相色譜分析用水指GB/T 6682中規(guī)定的一級水。
[0052] 2、醋酸銨：色譜純；甲醇：色譜純；甲酸：色譜純；氨水：優(yōu)級純；
[0053] 3、醋酸銨溶液（0. 05mol/L):稱取醋酸銨3. 8540g，溶于適量水中，稀釋至1L。
[0054] 4、2. 5%的氨水溶液：量取氨水2. 5mL，用水稀釋至100mL。
[0055] 5、6%甲酸甲醇溶液：量取甲酸6mL，用甲醇稀釋至100mL。
[0056] 6、標(biāo)準(zhǔn)品：純度彡96 %
[0057] a. 5-磺基鄰氨基苯甲酸（2-氨基-5-磺基苯甲酸）。
[0058] b.靛紅-5-磺酸或其鈉鹽。
[0059] c.鄰氨基苯甲酸。
[0060] 7、離子交換硅膠基SPE柱：Bond Elut SAX陰離子交換柱，100mg/3mL，或性能相當(dāng) 者。
[0061] 8、高效液相色譜儀：裝有梯度洗脫附件，配有紫外檢測器，配有自動進(jìn)樣器。
[0062] 9、分析天平：感量分別為0· OOlg和0· 000lg。
[0063] 10、正壓固相萃取裝置：帶有氮吹功能。
[0064] 實施例1 :
[0065] 一、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：
[0066] 準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品靛紅-5-磺酸鈉0. 2742g (或靛紅-5-磺酸0. 2500g)、5-磺基鄰氨 基苯甲酸0. 2500g、鄰氨基苯甲酸0