一種同時檢測尿液中鈉和肌酐的試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及酶法測定尿液中鈉和肌酐含量的方法，以及應用該方法配制而成的同 時檢測尿液鈉和肌酐的干化學試劑盒，屬于醫(yī)學檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 腎源性高血壓是因腎臟疾病引起的高血壓占成人高血壓的5% -10%，是老年人 群中最為常見的繼發(fā)性高血壓。作為危害老年人健康的殺手之一，腎源性高血壓可引起血 管硬化、心衰、腦溢血、腦栓塞、腦中風、腎衰等疾病，嚴重威脅到了老年人的生活和生存質(zhì) 量，正愈來愈受到廣大醫(yī)療部門的重視。
[0003]目前國內(nèi)對腎源性高血壓的檢測手段較為復雜，主要有：腎血管造影、靜脈腎盂造 影、穿刺采集靜脈血測腎素、超聲波顯影等技術(shù)，還未有專門檢測腎源性高血壓的系統(tǒng)性生 化指標。
[0004] 尿鈉檢測臨床意義：鈉的過度攝入可引起左室肥厚、蛋白尿、動脈硬化等，并對終 末期腎衰竭的進展，起著重要的作用。在降低鈉攝入的同時不但可以降低血壓，也可以減少 尿蛋白的排泌。臨床上通常收集24小時尿鈉測定，被認為是衡量個體鈉攝入的最好方法， 國際Intersalt研究將24小時尿鈉分為三等分，即24小時尿鈉在100mmol/day以下為低 尿鈉組，100~200mmol/day為中尿鈉組，200mmol/day以上為高尿鈉組，分別對應每日食鹽 量〈6克，6~12克以及>12克。
[0005] 目前電解質(zhì)鈉的測定有化學法、火焰光度法及離子選擇電極法，隨現(xiàn)代分析技術(shù) 的發(fā)展?；瘜W法已逐漸被靈敏、快速的儀器法所取代。目前大多數(shù)醫(yī)院用的是火焰光度法 和離子選擇電極法，后者又以其響應快（適合于急診）、靈敏、結(jié)果準確而越來越受化驗人 員的青睞。近幾年又出現(xiàn)了電解質(zhì)酶法測定方法，可以同其它常規(guī)檢測項目一起用全自動 分析儀進行檢測，準確方便，同時也降低了檢測成本。酶法測定鈉試劑盒國內(nèi)外已有產(chǎn)品上 市，主要是液體雙試劑，但僅有少數(shù)廠家能夠生產(chǎn)，液體試劑很不穩(wěn)定。
[0006] 肌酐（creatinine，Cre)是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，每20g肌肉代謝可產(chǎn)生lmg 肌酐。肌酐主要由腎小球濾過排出體外。血中肌酐來自外源性和內(nèi)源性兩種，外源性肌酐是 肉類食物在體內(nèi)代謝后的產(chǎn)物；內(nèi)源性肌酐是體內(nèi)肌肉組織代謝的產(chǎn)物。在肉類食物攝入 量穩(wěn)定時。身體的肌肉代謝又沒有大的變化，肌酐的生成就會比較恒定。尿肌酐主要來自 血液，經(jīng)腎小球過濾后隨尿液排出體外。尿肌酐檢查可以測定血液經(jīng)腎小球濾過排出的肌 酐含量。正常人尿肌酐的日排出量相當穩(wěn)定，基本不受食物蛋白質(zhì)含量和尿量的影響。當 尿液中肌酐含量顯著增高或降低時，則反映出腎功能受到一定程度的損傷。尿肌酐排泄量 增高：見于甲狀腺功能減退、某些消耗性疾病、肝臟疾患、糖尿病、肢端肥大癥、巨人癥、發(fā)熱 以及饑餓等。尿肌酐排泄量減少：見于腎臟功能不全、甲狀腺功能亢進、貧血、癱瘓、傷寒、破 傷風、結(jié)核等消耗性疾病及肌肉萎縮和肌肉營養(yǎng)不良等。因此，檢查尿肌酐含量的變化對腎 功能的變化及治療可起到重要的參考作用。
[0007] 肌酐常規(guī)生化檢測方法主要有兩大類，一是化學法一一堿性苦味酸終點法和堿 性苦味酸二點動力學法，因終點法受血清內(nèi)源性偽陽性和偽陰性干擾物的種類太多，這些 干擾物中有的與苦味酸反應比肌酐還快，稱為"快干擾物"，如乙酸、乙酰乙酸；有的比肌 酐反應慢，稱"慢干擾物"，如葡萄糖、某些蛋白質(zhì)殘基等。除了偽陽性干擾外，還存在偽 陰性干擾物，常見的是膽紅素。膽紅素會使肌酐測定結(jié)果偏低，當膽紅素濃度升至35mg/ dl (600 ymol/L)時干擾明顯。在全國三級甲等醫(yī)院現(xiàn)已有近半數(shù)臨床化學實驗室將肌酐酶 法應用于血/尿肌酐常規(guī)檢測中。在臨床化學方法學發(fā)展中酶學方法的運用，使臨床化學 測定技術(shù)有了一個質(zhì)的飛躍。其核心是酶作用特異性高，使測定的準確性、靈敏度、重復性、 線性測量范圍等都有了相應的大幅度提高，酶法的普及使采用強酸，強堿的化學方法漸被 淘汰。酶促反應條件溫和，隨著商品試劑盒的發(fā)展，再與半自動或全自動生化分析儀配套， 使檢測快速，簡易，高效。近年發(fā)展起來的肌酐酶法測定原理，均有商品試劑盒供應，其中有 單試劑也有雙試劑的不同劑型和規(guī)格。酶法提高了檢測的特異性，但并非絕對特異性。因 此，雖同屬酶法但因具體測定原理不同和同一測定原理而選用工具酶的來源、純度、比活、 特別是工具酶作用特異性的差異也存在不同類型和大小不一的干擾。肌酐酶法分析近年來 有了迅速發(fā)展，酶法測定肌酐試劑盒國內(nèi)外已有產(chǎn)品上市，主要是液體雙試劑，但僅有少數(shù) 廠家能夠生產(chǎn)，液體試劑很不穩(wěn)定。
[0008]目前還沒有能夠同時檢測尿液中鈉和肌酐的干化學試劑盒或類似方法的應用，為 了適應基層檢測機構(gòu)對尿液中鈉、肌酐的非定量檢測的需要以及檢測單位檢測硬件配備不 足的問題，迫切需要提供一種快速、簡便、半定量檢測尿液中鈉、肌酐的半定量檢測試劑盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的是提供一種同時檢測尿液鈉和肌酐的干化學試劑盒。本試劑盒中的 兩項指標中尿鈉、肌酐代表24小時鈉攝入量，肌酐是臨床上反映腎小球濾過率的指標，同 時測定可以作為參照指標使得尿鈉數(shù)值更準確。本試劑盒將兩項指標綜合在同時測定，是 高血壓病人的診斷、鑒別診斷和療效評價的輔助指標。
[0010] 本發(fā)明提供的一種同時檢測尿液中鈉和肌酐的試劑盒，包括：
[0011] (1)具有鈉反應孔和肌酐反應孔的反應基板；
[0012] (2)鈉稀釋液和肌酐稀釋液；
[0013] (3)具有不同濃度鈉離子標準顯色和不同濃度肌酐標準顯色的標準比色板。
[0014] 所述鈉反應孔從孔底部起依次放有底物墊和酶墊；
[0015] 所述底物墊由底物溶液滴加在載體上制備而成；底物溶液以100-1000mm〇l/L pH 7. 5-9. 0的緩沖液為溶劑，含有0. 001-0. 01g/mL的β -半乳糖苷酶底物、20-80mmol/L的穴 醚、0. 005% -50%的穩(wěn)定劑和0. 005% -50%的表面活性劑；
[0016] 所述酶墊由酶溶液滴加在載體上制備而成；酶溶液以100-1000mm〇l/L pH 7. 0-9. 0的緩沖液為溶劑，含有200-3000U/mL的β -半乳糖苷酶和0. 01-100g/L酶穩(wěn)定劑。
[0017] 優(yōu)選地，所述酶溶液以100-1000mmol/L pH 7. 0-9. 0的緩沖液為溶劑，含有 500-1500U/mL的β -半乳糖苷酶和10-20g/L穩(wěn)定劑。
[0018] 上述緩沖液均可選自磷酸鉀緩沖液、Tris-HCl緩沖液或PIPES緩沖液的一種或幾 種。
[0019] 優(yōu)選地，底物溶液的緩沖液為800-1000mmol/L pH8. 0-9. 0的Tris-HCl緩沖液；酶 溶液的緩沖液為100_200mmol/LpH7. 0-8. 0的Tris-HCl緩沖液。
[0020] 底物墊中含有的β-半乳糖苷酶底物為0-硝基-β-D-吡喃糖苷（ONPG)、 5_溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷（x-gal)、氯酚紅-β-D-吡喃半乳糖苷（CPRG)、 PNPG、IPTG。
[0021] 優(yōu)選地，半乳糖苷酶底物為5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 (x-gal)和氯酸紅-β-D-吡喃半乳糖苷（CPRG)。
[0022] 底物墊中含有的穴醚為4, 7, 13, 16, 21-五氧雜-1，10-二氮雜雙環(huán)[8. 8. 5]廿三 烷、18-Crown-8或者是15-Crown-5中的一種或幾種。優(yōu)選地，所述穴醚為4, 7, 13, 16, 21-五 氧雜-1，10-二氮雜雙環(huán)[8. 8. 5]廿三烷（Kryptofix)
[0023] 底物墊中含有的穩(wěn)定劑為D-海藻糖、蔗糖、葡聚糖T70、β-環(huán)糊精、牛血清白蛋 白、甘露醇、乳糖、聚乙二醇、明膠、肌醇、木糖或阿拉伯糖醇中的一種或幾種，優(yōu)選穩(wěn)定 劑為蔗糖和D-海藻糖；
[0024] 底物墊中含有的表面活性劑為吐溫80、吐溫20、TritonΧ-100、ΝΡ40或山梨醇中 的一種或多種，優(yōu)選表面活性劑為吐溫80。
[0025] 酶墊中含有的穩(wěn)定劑為D-海藻糖、蔗糖、葡聚糖T70、β-環(huán)糊精、牛血清白蛋白、 甘露醇、聚乙二醇、明膠、肌醇、木糖、阿拉伯糖醇、α-乳糖、馬來酸、酒石酸或者檸檬酸中的 一種或多種，優(yōu)選穩(wěn)定劑為α-乳糖和葡聚糖Τ70。
[0026] 本發(fā)明提供的一種同時檢測尿液中鈉和肌酐的試劑盒中的反應基板中的肌酐反 應孔從孔底部起依次放有下墊和上墊；
[0027] 所述下墊由下墊溶液滴加在載體上制備而成；下墊溶液以水為溶劑，含有 1