一種枸櫞酸西地那非有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種化學(xué)藥物枸櫞酸西地那非及其制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法，屬于藥 物分析領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 枸櫞酸西地那非是一種有效治療主觀和客觀原因引起的陰莖勃起功能障礙病癥 的藥物，是選擇性磷酸二酯酶5型（PDE-5)的抑制劑，1997年3月經(jīng)FDA批準(zhǔn)作為處方藥在 美國(guó)上市。枸櫞酸西地那非的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] 陰莖勃起功能障礙的主要原因是陰莖海綿體供血不足，可能與缺少一氧化氮有 關(guān)。N0可使鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶（GC)活化，在活化的GC作用下，鳥(niǎo)苷酸（GTP)轉(zhuǎn)變成環(huán)鳥(niǎo)苷酸 (cGMP) ;cGMP可被磷酸二脂酶5型（PDE-5)降解為cGMP-5^，后者無(wú)生物學(xué)效應(yīng)，而cGMP 則可引起陰莖海綿體平滑肌血管舒張，使陰莖迅速充血而勃起。研究表明，枸櫞酸西地那非 可通過(guò)抑制海綿體內(nèi)分解cGMP的TOE-5,來(lái)增強(qiáng)N0的作用，從而發(fā)揮其治療作用。
[0005] 藥品中的有關(guān)物質(zhì)是指藥品中除主要成分之外的其他物質(zhì)，它既可能是按既定工 藝生產(chǎn)過(guò)程中帶入的其他原料、試劑及生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的中間體、副產(chǎn)物和立體異構(gòu)體等， 也可能是在正常貯存和運(yùn)輸過(guò)程中，由于環(huán)境條件的影響而產(chǎn)生的降解產(chǎn)物、聚合物等。藥 物中含有的有關(guān)物質(zhì)不但會(huì)降低藥物療效，還與人們的健康和生命安危有極其密切的關(guān) 系。藥物安全性評(píng)價(jià)的一個(gè)重要內(nèi)容就是藥物中有關(guān)物質(zhì)的含量控制。
[0006] 為了嚴(yán)格控制枸櫞酸西地那非原料藥及其制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥的安全有 效，需要建立其有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。然而，枸櫞酸西地那非合成路線較多，不同生產(chǎn)路線 及制劑工藝所帶來(lái)的有關(guān)物質(zhì)也不完全相同。常見(jiàn)的有關(guān)物質(zhì)有以下7種（有關(guān)物質(zhì)A~ G)，具體名稱和結(jié)構(gòu)見(jiàn)下表。
[0007]
[0009] 如何在同一色譜條件下對(duì)上表中的7種有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)與分析，是枸櫞酸 西地那非原料藥及其制劑產(chǎn)品質(zhì)量控制中的一個(gè)重要問(wèn)題。
[0010] 現(xiàn)有技術(shù)中，USP35及EP8. 0對(duì)上表中枸櫞酸西地那非中的有關(guān)物質(zhì)D、E、G，以及 1-咪唑和5- [2-羥基-5- [ (4-甲基哌嗪-1-基）磺?；鵠-苯基]-1-甲基-3-丙基-1，6-二 氫-7H-吡唑并-[4, 3-d]嘧啶-7酮，共5個(gè)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了質(zhì)量控制。色譜條件為：采 用C18色譜柱；流動(dòng)相為水相（0. 7%三乙胺的水溶液，用磷酸調(diào)pH至3. 0):甲醇：乙腈= 58:25:17 ;洗脫方式為等度洗脫。而采用該方法對(duì)上表中7個(gè)有關(guān)物質(zhì)A~G進(jìn)行分析檢 測(cè)時(shí)，有關(guān)物質(zhì)C與E重合，有關(guān)物質(zhì)D與F重合，專屬性差，有關(guān)物質(zhì)A出峰時(shí)間太早，主 成分峰的理論塔板數(shù)低，僅為1441。
[0011] 文獻(xiàn)（AnalyticalSciences, 2003, 19, 1007 ~1011.)報(bào)道了對(duì)上表中枸櫞酸 西地那非的有關(guān)物質(zhì)A，以及5-(5-氯-2-乙氧基）-1-甲基-3-丙基-6, 7-1H-吡唑并 [4, 3-d]嘧啶-7酮、1-甲基-4-硝基-3-丙基吡唑-5-羧酸、1-甲基-4-硝基-3-丙基 咪唑-5-甲酰胺和5-(2-乙氧基）-1-甲基-3-丙基-6, 7-二氫-1H-吡唑并-[4, 3-d]嘧 啶-7-酮，共5個(gè)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量分析的方法。色譜條件為：采用C18色譜柱；流動(dòng)相為 含0. 05mol/ml磷酸二氫鉀的水溶液：乙腈=30:70 ;洗脫方式為等度洗脫。而采用該方法 對(duì)上表中7個(gè)有關(guān)物質(zhì)A~G進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，有關(guān)物質(zhì)A與E重合，有關(guān)物質(zhì)B未檢出，專屬 性差，主成分峰理論塔板數(shù)低，僅為1477。
[0012] 文獻(xiàn)（InternationalJournalofComprehensivePharmacy, 2011，7, 1 ~6.)報(bào) 道了一種枸櫞酸西地那非有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。該方法采用C18色譜柱；流動(dòng)相為水相（含 0. 05mol/ml磷酸二氫鉀的水溶液，用氫氧化鉀溶液調(diào)pH至5. 8):乙腈：甲醇=30:50:20， 洗脫方式為等度洗脫。采用該方法對(duì)上表中7個(gè)有關(guān)物質(zhì)A~G進(jìn)行分析檢測(cè)時(shí)，有關(guān)物 質(zhì)A與有關(guān)物質(zhì)D重合，專屬性差。
[0013] 文獻(xiàn)（中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32, 429~431.)對(duì)枸櫞酸西地那非的4個(gè)中間 體的分離檢測(cè)進(jìn)行了研究。該方法采用C18色譜柱；流動(dòng)相為水相（0. 015mol/ml三乙胺的 水溶液，用磷酸調(diào)pH至6.0):乙腈= 42:58,洗脫方式為等度洗脫。采用該方法對(duì)上表中7 個(gè)有關(guān)物質(zhì)A~G進(jìn)行分析檢測(cè)時(shí)，有關(guān)物質(zhì)D未檢出，有關(guān)物質(zhì)A、E分離度不好，理論塔 板數(shù)低。
[0014] 綜上所述，現(xiàn)有方法均不能同時(shí)檢測(cè)上表中枸櫞酸西地那非的7個(gè)有關(guān)物質(zhì)，且 色譜條件中的流動(dòng)相含有不揮發(fā)性鹽或三乙胺，不能用于液質(zhì)聯(lián)用分析，影響后續(xù)研究工 作的開(kāi)展。
[0015] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)和方法無(wú)法同時(shí)檢測(cè)上表中枸櫞酸西地那非的7種有關(guān)物質(zhì)，給枸 櫞酸西地那非原料藥及其制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制帶來(lái)困難。本發(fā)明通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，建 立了同時(shí)檢測(cè)枸櫞酸西地那非中7種有關(guān)物質(zhì)的方法，可用于枸櫞酸西地那非原料藥及其 制劑產(chǎn)品的質(zhì)量研究和質(zhì)量控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 本發(fā)明的目的在于提供一種同時(shí)檢測(cè)枸櫞酸西地那非中7種有關(guān)物質(zhì)的高效液 相色譜方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案，該方案包括以下步驟：
[0017] 步驟1:制備系統(tǒng)適用性溶液：
[0018] 取有關(guān)物質(zhì)A、B、C、D、E、F、G和枸櫞酸西地那非對(duì)照品，精密稱定，加流動(dòng)相配制 成混合對(duì)照溶液，其中有關(guān)物質(zhì)A~G的濃度為1~10μg/ml，枸櫞酸西地那非的濃度為 100 ~300μg/ml〇
[0019] 步驟2 :按以下高效液相色譜條件進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測(cè)定：
[0020] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以含1~10mm〇l/ml醋酸銨的水溶液，用氨 水調(diào)pH至5. 0~8. 0為流動(dòng)相A相，以乙腈：甲醇=1 :1~10為流動(dòng)相B相，柱溫25~ 35°C，流速為0. 5~2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm，用HPLC進(jìn)行梯度洗脫。
[0021] 優(yōu)選的，步驟2中以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以含2~8mmol/ml醋酸銨 的水溶液，用氨水調(diào)pH至6. 5~7. 5為流動(dòng)相A相，以乙腈：甲醇=1 :1~5為流動(dòng)相B 相，柱溫27~32°C，流速為0. 8~1. 2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm，用HPLC進(jìn)行梯度洗脫。
[0022] 更為優(yōu)選的，步驟2中以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以含5~6mmol/ml醋 酸銨的水溶液，用氨水調(diào)pH至6. 8~7. 2為流動(dòng)相A相，以乙腈：甲醇=1 :1~3為流動(dòng)相 B相，柱溫29~31°C，流速為0. 9~1.lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm，用HPLC進(jìn)行梯度洗脫， 流動(dòng)相梯度如下：
[0023]
[0024] 主成分的理論塔板數(shù)大于70000,所有峰之間的分離度大于3. 5。
[0025] 本發(fā)明提供的方法與現(xiàn)有已知方法的對(duì)比及實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
[0026]
L0027」 本友明提供的萬(wàn)法簡(jiǎn)使、高效、分離度高，η」以問(wèn)時(shí)分離檢測(cè)枸櫞酸曲地那非中的 7種有關(guān)物質(zhì)，且流動(dòng)相可適用于質(zhì)譜檢測(cè)，方便通過(guò)質(zhì)譜分析未知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)，可用于枸 櫞酸西地那非原料藥及其制劑產(chǎn)品的質(zhì)量研究和質(zhì)量控制。
[0028] 下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù) 知識(shí)和常用手段做出各種替換和變更，均包括在本發(fā)明所保護(hù)的技術(shù)方案之內(nèi)。
【附圖說(shuō)明】
[0029] 圖1:USP35和EP8.0方法的系統(tǒng)適用性色譜圖；
[0030] 圖 2 :文獻(xiàn)（AnalyticScience, 2003, 19, 1007 ~1011.)方法的系統(tǒng)適用性色譜 圖；
[0031] 圖 3:文獻(xiàn)（InternationalJournalofComprehensivePharmacy, 2011，7, 1 ~ 6.)方法的系統(tǒng)適用性色譜圖；
[0032] 圖4:文獻(xiàn)（中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32, 429~431.)的系統(tǒng)適用性色譜圖；
[0033] 圖5 :實(shí)施例1的系統(tǒng)適用性色譜圖；
[0034] 圖6 :實(shí)施例2的系統(tǒng)適用性色譜圖。
【具體實(shí)施方式】 [0035]實(shí)施例1
[0036] 步驟1:制備系統(tǒng)適用性溶液：
[0037] 取有關(guān)物質(zhì)A、B、C、D、E、F、G和枸櫞酸西地那非對(duì)照品，精密稱定，加流動(dòng)相配制 成混合對(duì)照溶液，其中有關(guān)物質(zhì)A~G的濃度為5μg/ml，枸櫞酸西地那非濃度為200μg/ ml〇
[0038] 步驟2 :按以下高效液相色譜條件進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測(cè)定：
[0039] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以含5mmol/ml的醋酸銨，用氨水調(diào)pH至7. 0 為流動(dòng)相A相，以乙腈：甲醇=1 :1為流動(dòng)相B相，柱溫30°C，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 292nm，用HPLC進(jìn)行梯度洗脫，流動(dòng)相梯度如下：
[0040]
[0041] 主成分的理論塔板數(shù)為73453,所有峰之間的分離度達(dá)到3. 85以上。
[0042] 系統(tǒng)適用性色譜圖見(jiàn)圖5。
[0043] 實(shí)施例2
[0044] 步驟1:制備系統(tǒng)適用性溶液：
[0045] 取有關(guān)物質(zhì)A、B、C、D、E、F、G和枸櫞酸西地那非對(duì)照品，精密稱定，加流動(dòng)相配制 成混合對(duì)照溶液，其中有關(guān)物質(zhì)A~G的濃度為5μg/ml，枸櫞酸西地那非濃度為200μg/ ml〇
[0046] 步驟2 :按以下高效液相色譜條件進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測(cè)定：
[0047] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以含6mmol/ml的醋酸銨，用氨水調(diào)pH至7.0 為流動(dòng)相A相，以乙腈：甲醇=1 :1為流動(dòng)相B相，柱溫30°C，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 292nm，用HPLC進(jìn)行梯度洗脫，流動(dòng)相梯度如下：
[0048]
[0049] 主成分的理論塔板數(shù)為89369,所有峰之間的分離度達(dá)到3. 59以上。
[0050] 系統(tǒng)適用性色譜圖見(jiàn)圖6。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種枸櫞酸西地那非有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，包括以下幾個(gè)步驟： 步驟1 :制備系統(tǒng)適用性溶液：取有關(guān)物質(zhì)A、B、C、D、E、F、G和枸櫞酸西地那非對(duì)照品， 精密稱定，加流動(dòng)相配制成混合對(duì)照溶液，其中有關(guān)物質(zhì)A~G的濃度為1~10 μ g/ml，枸 橡酸西地那非濃度的為100~300 μ g/ml ; 步驟2 :按以下高效液相色譜條件進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測(cè)定：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填 充劑，以含1~10mm〇l/ml醋酸銨的水溶液，用氨水調(diào)pH至5. 0~8. 0為流動(dòng)相A相，以乙 腈：甲醇=1 :1~10為流動(dòng)相B相，柱溫25~35°C，流速為0. 5~2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 292nm，用HPLC進(jìn)行梯度洗脫。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于，步驟2中以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以 含2~8mmol/ml醋酸銨的水溶液，用氨水調(diào)pH至6. 5~7. 5為流動(dòng)相A相，以乙腈：甲醇 =1 :1~5為流動(dòng)相B相，柱溫27~32°C，流速為0· 8~1. 2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm， 用HPLC進(jìn)行梯度洗脫。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于，步驟2中以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以 含5~6mmol/ml醋酸銨的水溶液，用氨水調(diào)pH至6. 8~7. 2為流動(dòng)相A相，以乙腈：甲醇 =1 :1~3為流動(dòng)相B相，柱溫29~31°C，流速為0. 9~1. lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm， 用HPLC進(jìn)行梯度洗脫，流動(dòng)相梯度如下：主成分的理論塔板數(shù)大于70000,所有峰之間的分離度大于3. 5。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種枸櫞酸西地那非有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。該方法采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，醋酸銨水溶液為流動(dòng)相A，乙腈-甲醇為流動(dòng)相B，檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm，梯度洗脫。該方法簡(jiǎn)便、高效、分離度高，可以同時(shí)分離檢測(cè)枸櫞酸西地那非中的7種有關(guān)物質(zhì)，且流動(dòng)相可適用于質(zhì)譜檢測(cè)，可用于枸櫞酸西地那非原料藥及其制劑產(chǎn)品的質(zhì)量研究和質(zhì)量控制。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開(kāi)號(hào)】CN105334275
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510888927
【發(fā)明人】陳再新, 王璠, 王勇軍, 黃靜, 周慧琴
【申請(qǐng)人】常州亞邦制藥有限公司, 江蘇亞邦愛(ài)普森藥業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2016年2月17日
【申請(qǐng)日】2015年12月5日