一種坤靈丸的質(zhì)量檢測(cè)方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種坤靈丸的質(zhì)量檢測(cè)方法，屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 坤靈丸是一種中藥復(fù)方制劑，其功能主治為調(diào)經(jīng)養(yǎng)血，逐癒生新。用于月經(jīng)不調(diào)， 或多或少，行經(jīng)腹痛，子宮寒冷，久不受孕，習(xí)慣性流產(chǎn)，赤白帶下，崩漏不止，病久氣虛，腎 虧腰痛。
[0003] 坤靈丸的處方如下：
[0004] 【處方】
[0005] ( -）香附（制）37g甘草7g白薇14g益母草14g黃茂14g雞冠花14g麥冬 14g北五味子14g地黃14g紅花14g木通lOg白術(shù)（炒）14g赤石脂14g巧冬14g厚樸 lOg肉巧蓉（制）14g白巧（酒炒）14g
[0006] (二）香附（制）37g荊芥lOg牡丹皮14g阿膠14g當(dāng)歸14g蔓本lOg紅參14g 鹿角膠14g川貝母14g沒(méi)藥（炒）14g砂仁14g延胡索14g小茵香（鹽制）14g龜甲膠 14g川寫14g
[0007] 【制法】W上處方（一）十走味，加水煎煮二次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并 煎液，濾過(guò)，濾液放置24小時(shí)，取上清液加入米醋280g，濃縮成稠膏。W上處方（二）十五 味，粉碎成中粉，加入上述稠膏中，混勻，干燥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，用黃酒泛丸，制成 1800丸，包糖衣或薄膜衣，打光，干燥，即得。
[0008] 由于中藥化學(xué)成分復(fù)雜，作用機(jī)制不明確，致使現(xiàn)有中藥制藥技術(shù)難W確保中藥 產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性，坤靈丸現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》 第十冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)中未涉及任何針對(duì)藥味的定性定量控制項(xiàng)目，發(fā)明人對(duì)坤靈丸的有效成分進(jìn) 行了研究。發(fā)現(xiàn)其中含有多種水溶性與醇溶性成分，本發(fā)明人有針對(duì)性的對(duì)送些成分進(jìn)行 了研究，建立了一種坤靈丸的檢測(cè)方法，對(duì)生產(chǎn)中的坤靈丸進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)督，W確保產(chǎn)品質(zhì) 量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明目的在于提供一種坤靈丸的質(zhì)量檢測(cè)方法，為該制劑的質(zhì)量控制提供更完 善的檢測(cè)方法。
[0010] 本發(fā)明所述的質(zhì)量檢測(cè)方法，包括鑒別方法和含量測(cè)定方法。
[0011] 本發(fā)明首先提供一種坤靈丸的鑒別方法，該方法包括對(duì)W下中藥的鑒別：
[0012] A牡丹皮鑒別
[0013] B當(dāng)歸-川寫-蔓本鑒別
[0014] C延胡索鑒別 [001引 D白巧鑒別 [0016] E紅參鑒別
[0017] F香附鑒別
[0018] 本發(fā)明的鑒別方法采用薄層色譜法，共有6項(xiàng)，可W使用其中一項(xiàng)作為對(duì)坤靈丸 的鑒別方法，也可W多項(xiàng)組合使用作為對(duì)坤靈丸的鑒別方法，優(yōu)選的是多項(xiàng)組合使用，最優(yōu) 選的是6項(xiàng)組合使用。
[0019] 其次，本發(fā)明還包括對(duì)坤靈丸中的有效成分丹皮酪進(jìn)行含量測(cè)定，含量測(cè)定方法 采用高效液相色譜法。
[0020] 本發(fā)明的鑒別方法，優(yōu)選采用W下方法：
[0021] A牡丹皮鑒別
[0022] 供試品溶液的制備；取坤靈丸薄膜衣丸8g~12g、糖衣丸12~18g，采用研細(xì)方 式，加稀鹽酸1~4ml，加己離20~50ml，加熱回流15~40min，濾過(guò)，濾液回收溶劑至干， 殘?jiān)蛹核峒捍?~3ml使溶解，作為供試品溶液。
[0023] 對(duì)照藥材溶液的制備：取牡丹皮對(duì)照藥材0. 8~1. 2g，加稀鹽酸1~4ml，加己離 20~50ml，加熱回流15~40min，濾過(guò)，濾液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹核峒捍?~3ml使溶 解，作為對(duì)照藥材溶液。
[0024] 對(duì)照品溶液的制備；取丹皮酪對(duì)照品適量，加己酸己醋制成每1ml含0. 8~1. 2mg 的溶液，搖勻，即得。
[00巧]陰性樣品溶液的制備；通過(guò)查詢文獻(xiàn)，白巧中也含有微量的丹皮酪，故按處方配 比，取除牡丹皮、白巧外的其他藥材，按制備工藝制備樣品，再按供試品溶液制備方法制成 陰性樣品溶液。
[002引鑒別；照薄層色譜法（附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5~10 μ 1、對(duì)照藥材 溶液、丹皮酪對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液各5~15 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，W石 油離化0~9(TC)-己酸己醋巧~3 : 1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，瞭干，噴W鹽酸酸性5% Η氯化鐵己醇溶液（每100ml 5%H氯化鐵己醇溶液中，加入鹽酸1~5滴，混勻，即得）。 供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú) 干擾。見(jiàn)附圖（1)。
[0027] B當(dāng)歸-川寫-蔓本鑒別
[002引供試品溶液的制備；同牡丹皮供試品溶液的制備。
[0029] 對(duì)照藥材溶液的制備；分別取當(dāng)歸對(duì)照藥材、川寫對(duì)照藥材、蔓本對(duì)照藥材各 0. 8~1. 2g，分別加己離20~50ml，水浴回流15~40min，取出，放冷，濾過(guò)，濾液回收己離 至干，殘?jiān)謩e加己酸己醋1~3ml使溶解，作為當(dāng)歸對(duì)照藥材溶液，川寫對(duì)照藥材溶液，蔓 本對(duì)照藥材溶液。
[0030] 陰性樣品溶液的制備：按處方配比，取除當(dāng)歸、川寫、蔓本外的其他藥材，按制備工 藝制備樣品，再按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。
[0031] 鑒別；照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液及 上述對(duì)照藥材與陰性樣品溶液各5~15 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，W正己焼-己 酸己醋-甲酸（95~70:5~30:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，瞭干，置紫外光燈（366nm)下檢 視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的英光斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú) 干擾。見(jiàn)附圖（2)。
[0032] C延胡索鑒別
[0033] 供試品溶液的制備；取坤靈丸適量，研成細(xì)粉，稱取1. 5~2. 5g，加0. 1~0. 3mol/ L的氨氧化鋼溶液5~15ml,超聲15~25min后，加入己酸己醋5~20ml,振搖萃取，2000~ 3000轉(zhuǎn)/min離必3~lOmin,取上清液，即得。
[0034] 對(duì)照藥材溶液的制備：取延胡索對(duì)照藥材0. 3~1. Og于20~100ml圓底燒瓶中， 加氨水0. 3~0. 8ml浸潤(rùn)，加二氯甲焼5~15ml，5(TC~7(TC水浴回流0. 5~比，濾過(guò)，揮 干，用甲醇1~3ml溶解，即得。
[0035] 對(duì)照品溶液的制備；取延胡索己素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0. 15~ 0. 25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0036] 陰性樣品溶液的制備：按處方配比，取除延胡索外的其他藥材，按制備工藝制備樣 品，再按供試品溶液制備方法，制成缺延胡索的陰性樣品溶液。
[0037] 鑒別；照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶 液、對(duì)照藥材溶液與陰性樣品溶液各5~10 μ 1、對(duì)照品溶液2~10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，W正己焼-二氯甲焼-甲醇-濃氨巧~8 : 2~5 : 0.5~1.5 : 0.1)為展 開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，瞭干，置賄蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰后取出，揮盡板上吸附的賄后，置紫 外光燈（366nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同 顏色的英光斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú)干擾。見(jiàn)附圖（3)。
[0038] D白巧鑒別
[0039] 供試品溶液的制備；取坤靈丸適量，研細(xì)，稱取薄膜衣丸12~18g(糖衣丸15~ 20g)，加甲醇30~70ml，加熱回流0. 5~比，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5~25ml使溶解， 用水飽和的正了醇振搖提取2~3次，每次15~25ml，合并正了醇提取液，用氨試液3~ 8ml洗涂，用正了醇飽和的水洗2~3次，每次10~20ml，棄去水洗液，正了醇液蒸干，殘?jiān)?加無(wú)水己醇1~3ml溶解，作為供試品溶液。
[0040] 對(duì)照品溶液的制備；取巧藥巧對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0. 8~1. 2mg的溶液， 作為對(duì)照品溶液。
[0041] 陰性樣品溶液的制備：通過(guò)文獻(xiàn)查閱發(fā)現(xiàn)，處方中牡丹皮與白巧同屬毛畏科植物， 其主要成分中亦含巧藥巧，故按處方配比，取除白巧、牡丹皮外的其他藥材，按制備工藝制 備樣品，再按供試品溶液制備方法制成白巧、牡丹皮雙陰性樣品溶液，結(jié)果陰性無(wú)干擾。
[0042] 鑒別；照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液及陰 性樣品溶液各10~20 μ 1、對(duì)照品溶液5~15 μ 1，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板上，W Η氯甲焼-己酸己醋-甲醇-甲酸（30~45:3~6:5~15:0.4)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，噴 W 1%~5%香草醒硫酸溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜圖中，在與對(duì)照品 色譜圖相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú)干擾。見(jiàn)附圖（4)。
[004引 E紅參鑒別
[0044] 供試品溶液的制備；用白巧供試品溶液。
[0045] 對(duì)照品溶液的制備；取人參皂巧Rgl、人參皂巧化1、人參皂巧Re對(duì)照品適量，加甲 醇制成每1ml分別含有人參皂巧Rgl、人參皂巧化1、人參皂巧Re各0. 8~1. 2mg的溶液， 作為對(duì)照品溶液。
[0046] 對(duì)照藥材溶液的制備：取紅參對(duì)照藥材0. 8~1. 2g，W下操作同供試品溶液處理 方法，作為對(duì)照藥材溶液。
[0047] 陰性樣品溶液的制備：按處方配比，取除紅參外的其他藥材，按制備工藝制備樣 品，再按供試品溶液制備方法制成紅參陰性樣品溶液。
[0048] 鑒別；照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液及陰 性樣品溶液各15~20 μ 1、對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液5~20 μ 1，分別點(diǎn)于同一高效硅膠 G薄層板（煙臺(tái)板）上，氯甲焼-甲醇-水巧0~70:20~40:5~20)5~1(TCW下 放置分層的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，噴W 5~10%硫酸己醇溶液，在105°C加熱至斑 點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜圖中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜圖相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色 的斑點(diǎn)。陰性樣品無(wú)干擾。見(jiàn)附圖巧）。
[004引 F香附鑒別
[0050] 供試品溶液的制備；用牡丹皮供試品溶液。
[0051] 對(duì)照品溶液的制備；取α -香附麗對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含有α -香附麗 0. 8~1. 2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0052] 對(duì)照藥材溶液的制備：取香附對(duì)照藥材0. 8~1. 2g，加入稀鹽酸1~3ml，加己離 20~40ml回流20~40min，放至室溫，濾過(guò)，回收溶劑至近干，W己醇1~3ml復(fù)溶，即得。
[0053] 陰性樣品溶液的制備：按處方配比，取除香附外的其他藥材，按制備工藝制備樣 品，再按供試品溶液制備方法制成香附陰性樣品溶液。
[0054] 鑒別；照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，取上述薄膜衣丸供 試品溶液10-20 μ 1、糖衣丸供試品溶液20-25 μ 1、對(duì)照品溶液1-10 μ 1和對(duì)照藥材溶液 10-20 μ 1點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板（Macher巧-Nagel F254高效薄層板）上，W甲苯-己 酸己醋-甲酸（85~95 ;3~8 ;3~8)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，瞭干，置紫外光燈（254nm)下 檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；噴W 二硝基苯阱試液，放置片刻，在日光下觀察。在供試品色譜中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品無(wú)干擾。見(jiàn)附圖化）。
[0055] 本發(fā)明的含量測(cè)定方法，所述的丹皮酪含量測(cè)定方法，步驟如下：
[0056] ①供試品溶液的制備：取坤靈丸，粉碎后加入50~70%甲醇溶液中，超聲處理后 加50~70%甲醇溶液定容至刻度，過(guò)微孔濾膜，即得；
[0057] ②對(duì)照品溶液的制備；取丹皮酪對(duì)照品適量，加50%~70%甲醇溶液制成每1ml 含14~18 μ g丹皮酪的溶液，即得；
[0058] ⑨含量測(cè)定；分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5~10 μ 1，注入高效液相色譜 儀，得到色譜圖，經(jīng)計(jì)算得到坤靈丸中丹皮酪的含量，必要時(shí)可W使用陰性對(duì)照品溶液W排 除干擾；
[0059] 其中色譜條件為：W十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑為W下填充劑的一種 Shima化U VP-0DS150X4. 6mm 色譜柱、Dikma Diamomsi]_-C185 μ m, 250 X 4. 6mm 色譜柱、 Agilent ZORBAX SB-C185 μ m, 250X4. 6mm，色譜柱及 Waters2695-2489、Waters 2695-PDA; W 30~60 : 70~40的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270~278皿；流速0. 6~1. 5ml/ min;柱溫25~35°C，進(jìn)樣量5~15