一種快速多點(diǎn)定標(biāo)定量檢測(cè)血液多種分析物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及檢測(cè)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種非診斷性地多點(diǎn)定標(biāo)定量檢測(cè)血 液多種分析物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 免疫金標(biāo)記技術(shù)是特異、快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確率高的體外診斷方法，其廣泛應(yīng)用于醫(yī) 療診斷領(lǐng)域，如國內(nèi)廠家艾博的血篩項(xiàng)目、萬孚的毒品、熱帶病項(xiàng)目、康華的優(yōu)生優(yōu)育不孕 不育產(chǎn)品，艾德藍(lán)十字大衛(wèi)的早孕排卵項(xiàng)目、南京基蛋的心肌類項(xiàng)目、奧普的結(jié)核項(xiàng)目。但 是各個(gè)廠家在精確定量的應(yīng)用上卻面臨背景干擾大、檢測(cè)指標(biāo)少的缺陷。
[0003] 試紙的反射測(cè)光方法常應(yīng)用于尿、血液樣本的測(cè)定當(dāng)中。目前這種試紙及測(cè)定儀 器和日常的尿試紙等廣泛使用于居民健康診斷及醫(yī)院的篩查當(dāng)中。應(yīng)用上，一種吸收墊含 有一種檢查項(xiàng)目，例如糖、蛋白、膽紅素、血紅蛋白、尿膽素等常見項(xiàng)目。這種試紙的讀取方 式是通過固定儀器的光學(xué)測(cè)定部分依次移動(dòng)試紙上的反應(yīng)部分，利用反射測(cè)光來測(cè)取濃 度。另外，一種做法則是固定試紙位置，通過移動(dòng)光學(xué)測(cè)定部分來測(cè)取濃度。
[0004] 但是，目前技術(shù)只可以檢測(cè)一種分析物，并且使用一點(diǎn)定標(biāo)技術(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差較 大，測(cè)定結(jié)果的可信度較低。
[0005] 因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種快速高效、多點(diǎn)定標(biāo)定量地精確檢測(cè)血液多種分 析物的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種非診斷性地多點(diǎn)定標(biāo)定量檢測(cè)血液多種分析物的方 法及裝置。
[0007] 在本發(fā)明的第一方面，提供了一種非診斷性地用于檢測(cè)樣品中的多種分析物的方 法，所述分析物為η種，η為2 2的正整數(shù)，所述方法包括以下步驟：
[0008] (1)提供一待測(cè)樣品和一測(cè)試片，其中所述測(cè)試片包括:樣品墊、結(jié)合區(qū)、第一質(zhì)控 區(qū)、檢測(cè)區(qū)、第二質(zhì)控區(qū)、和吸收墊；
[0009] 其中，所述結(jié)合區(qū)包含用于檢測(cè)所述多種分析物的檢測(cè)抗體，所述檢測(cè)抗體包括η 種特異性抗體，每種特異性抗體分別針對(duì)所述多種分析物中每種分析物，并且所述的檢測(cè) 抗體標(biāo)記有可檢測(cè)的標(biāo)記物；
[0010] 并且所述的檢測(cè)區(qū)含有m條檢測(cè)線，其中m為正整數(shù)且m2 η，各檢測(cè)線分別用于捕 獲一種所述分析物與其特異性抗體結(jié)合所形成的復(fù)合物；
[0011] 所述的第一質(zhì)控區(qū)含有至少一條第一質(zhì)控線，所述第一質(zhì)控線用于捕獲所述第一 質(zhì)控物與其特異性抗體結(jié)合所形成的復(fù)合物；
[0012] 所述的第二質(zhì)控區(qū)含有至少一條第二質(zhì)控線，所述第二質(zhì)控線用于捕獲所述第二 質(zhì)控物與其特異性抗體結(jié)合所形成的復(fù)合物；
[0013] (2)將所述待測(cè)樣品滴加于所述測(cè)試片的樣品墊上，使得所述待測(cè)樣品向所述吸 收墊方向流動(dòng)，并流經(jīng)所述的結(jié)合區(qū)、第一質(zhì)控區(qū)、檢測(cè)區(qū)和第二質(zhì)控區(qū)；
[0014] (3)分別讀取第一質(zhì)控區(qū)中的第一質(zhì)控線的光學(xué)強(qiáng)度A1和第二質(zhì)控區(qū)中所述第二 質(zhì)控線的光學(xué)強(qiáng)度A2;以及讀取所述檢測(cè)區(qū)中各檢測(cè)線的光學(xué)強(qiáng)度Pi，其中i = l到η;以及
[0015] ⑷將所述光學(xué)強(qiáng)度Pi與所述光學(xué)強(qiáng)度Α1和Α2進(jìn)行比較，從而分別得出η種分析物 中各種分析物的存在與否和/或定量檢測(cè)結(jié)果。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述的光學(xué)強(qiáng)度包括:顏色信號(hào)強(qiáng)度。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述光學(xué)強(qiáng)度與所述檢測(cè)線上形成的復(fù)合物濃度為二次函數(shù)關(guān) 系。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟(4)中，按下式計(jì)算質(zhì)控物的濃度：
[0019] Cl = (Al-b)/a
[0020] C2 = (A2-b)/a
[0021]式中，a與b分別為一常數(shù)。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，a和b分別為"濃度一信號(hào)強(qiáng)度"標(biāo)準(zhǔn)曲線(擬合的直線）的斜率和 截距。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，在所述步驟(4)中，按下式計(jì)算各分析物的濃度:Ci = (C1+C2) (Pi-PblanlO/^Al+AS-SPblank)，式中，
[0024] Ci為第i個(gè)檢測(cè)區(qū)檢測(cè)物濃度，
[0025] C1與C2為質(zhì)控物濃度，
[0026] Pi為檢測(cè)區(qū)第i個(gè)檢測(cè)區(qū)的信號(hào)強(qiáng)度，
[0027] Pblank為光學(xué)背景的信號(hào)強(qiáng)度，
[0028] A1與A2為質(zhì)控區(qū)的信號(hào)強(qiáng)度。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，所述的信號(hào)強(qiáng)度包括光學(xué)強(qiáng)度。
[0030] 在另一優(yōu)選例中，所述的第一質(zhì)控物和第二質(zhì)控物是相同的，或不同的。
[0031] 在另一優(yōu)選例中，所述的第一質(zhì)控物和第二質(zhì)控物選自下組:抗兔多克隆抗體、抗 羊多克隆抗體、抗驢多克隆抗體、或其組合。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述的可檢測(cè)標(biāo)記物包括金納米顆粒。
[0033] 在另一優(yōu)選例中，所述樣品墊區(qū)域?yàn)闇y(cè)試片近端，所述吸收區(qū)為測(cè)試片遠(yuǎn)端，所述 第一質(zhì)控線位于近端，所述第二質(zhì)控線位于遠(yuǎn)端，所述第一質(zhì)控線與所述第一檢測(cè)線的距 離為1 -10mm，較佳地為2-8mm，更佳地為3-6mm，所述第二質(zhì)控線與所述第m條檢測(cè)線之間的 距離為1 _1 〇mm，較佳地為2_8mm，更佳地為3_6mm。
[0034] 在另一優(yōu)選例中，所述m條檢測(cè)線之間的距離為0.5-10mm，較佳地為l-8mm，更佳地 為2_6mm〇
[0035] 在另一優(yōu)選例中，所述檢測(cè)抗體數(shù)目為2 1的整數(shù)。
[0036] 在另一優(yōu)選例中，所述質(zhì)控線數(shù)目為2 1的整數(shù)，優(yōu)選地為1-3。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述檢測(cè)線數(shù)目為2 4的整數(shù)。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，所述分析物的數(shù)量為1-10,優(yōu)選地為2-6。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述分析物選自下組:血降鈣素原、C反應(yīng)蛋白、肌鈣蛋白、肌球 素、肌紅蛋白、肌酸激酶MB同工酶、B型尿鈉肽、D-二聚體、N-端腦利鈉肽前體、心型脂肪酸結(jié) 合蛋白、微量白蛋白、中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白、β2_微球蛋白、淀粉樣蛋白、胱 抑素 c。
[0040] 在本發(fā)明第二方面，提供一種檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括：
[0041] (a)測(cè)試片，所述測(cè)試片包括樣品墊、結(jié)合區(qū)、第一質(zhì)控區(qū)、檢測(cè)區(qū)、第二質(zhì)控區(qū)、和 吸收墊；
[0042] (b)第一容器，以及位于所述第一容器中的、用于與待測(cè)樣品進(jìn)行混合的第一測(cè)試 試劑。
[0043]本發(fā)明第三方面，提供一種如本發(fā)明第一方面所述的測(cè)試片的用途，用于制備檢 測(cè)生物樣本中分析物濃度的制劑盒。
[0044]應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0045]圖1顯示了本發(fā)明檢測(cè)試紙外殼。
[0046] 圖2顯示了本發(fā)明檢測(cè)試紙，其上包被有各種單克隆抗體，從左至右依次為：1為樣 品墊，2為結(jié)合墊，3為層析反應(yīng)膜，4為吸收墊，5為包被抗體，6為底部背襯。
[0047] 圖3顯示了同時(shí)測(cè)定心肌梗塞標(biāo)志物肌鈣蛋白T和肌球素的試紙條，其中7為樣品 墊，8為結(jié)合墊，9為層析反應(yīng)膜，10為吸收墊，11為底部背襯，12為抗兔包被抗體，13為心肌 梗塞標(biāo)志物肌鈣蛋白T包被抗體，14為肌球素包被抗體，15為抗兔包被抗體。
[0048]圖4顯示了定標(biāo)線檢測(cè)原理。
[0049]圖5顯示了測(cè)試線檢測(cè)原理。
[0050]圖6顯示了本發(fā)明的光學(xué)測(cè)試原理，其中，1為凸透鏡，2為試劑條放置部位，3為CCD 攝像機(jī)，5為L(zhǎng)ED光源。
【具體實(shí)施方式】
[0051 ]本發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，獲得一種快速高效、多點(diǎn)定標(biāo)定量檢測(cè)血液多 種分析物的方法，其中引入多條定標(biāo)曲線并結(jié)合新型的數(shù)據(jù)處理方法，從而能夠更準(zhǔn)確地 同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)。本發(fā)明的多指標(biāo)檢測(cè)方案，不僅提尚臨床應(yīng)用的范圍，提供準(zhǔn)確的檢測(cè) 結(jié)果，而且可以減少測(cè)定的時(shí)間或次數(shù)，降低患者的診斷成本。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。 [0052] 術(shù)語說明
[0053]除非另外定義，否則本文中所用的全部技術(shù)與科學(xué)術(shù)語均具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。
[0054] 如本文所用，在提到具體列舉的數(shù)值中使用時(shí)，術(shù)語"約"意指該值可以從列舉的 值變動(dòng)不多于1 %。例如，如本文所用，表述"約1 〇〇"包括99和101和之間的全部值（例如， 99.1、99.2、99.3、99.4等）。
[0055] 免疫層析技術(shù)
[0056] 免疫層析技術(shù)（immunochromatography)是20世紀(jì)80年代末90年代初建立的一種 快速檢測(cè)技術(shù)。由于免疫層析技術(shù)不須進(jìn)行結(jié)合標(biāo)記物與自由標(biāo)記物的分離，因而操作簡(jiǎn) 單、快速，非常適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)之用。
[0057]免疫層析側(cè)流片(或試紙條、或試紙片）
[0058]在本發(fā)明中，提供一測(cè)試片，所述測(cè)試片包括:樣品墊、檢測(cè)區(qū)、質(zhì)控區(qū)、和吸收墊。
[0059] 在本發(fā)明中，術(shù)語"測(cè)流片"、"試紙片"、"試紙條"、"試紙板"、"層析條"、"測(cè)試條" 具有相同的含義，可以互換使用。
[0060] 本發(fā)明優(yōu)選的免疫層析試劑條的結(jié)構(gòu)如圖1所示，其中包括：
[0061] 塑料件ABS殼體，其內(nèi)部可以放置圖2所示檢測(cè)試紙，上部為兩個(gè)窗口（樣品口、層 析窗口），其中樣品口為滴加樣品位置，層析窗口為樣品層析以及觀察檢測(cè)位置