一種氟唑菌酰胺殘留量的gc-ei-ms快速測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種氣挫菌酷胺殘留量的GC-EI-MS快速測定方法，更具體地說是采用 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性定量測定豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動(dòng)物肌 肉及制品等脂肪含量高的動(dòng)物源性食品中殘留的氣挫菌酷胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量 的測定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氣挫菌酷胺(fluxapyroxad)是由己斯夫公司開發(fā)的班巧酸脫氨酶抑制劑類殺菌 劑?；瘜W(xué)名稱:3-二氣甲基-1-甲基-N-(3'，4'，5'-S氣聯(lián)苯-2-基)-lH-化挫-4-甲酯胺;分 子式： C1細(xì)12F5N30;相對分子質(zhì)量:381.3;烙點(diǎn)：157 °C ;相對密度：1.42。溶劑中的溶解度(g/ L，20°C ):丙酬>250、乙臘168、乙酸乙醋123、甲醇53.4、甲苯20.0。氣挫菌酷胺的化學(xué)結(jié)構(gòu) 式如下：
[0003] 氣挫菌酷胺具有高效、廣譜、持效、優(yōu)異的內(nèi)吸傳導(dǎo)性、同時(shí)具有預(yù)防和治療作用 等優(yōu)點(diǎn)。它能抑制抱子發(fā)芽、芽抱管伸長、菌絲體生長和抱子形成，可有效防治谷物、大豆、 玉米、油菜和特種作物等的主要病害。該產(chǎn)品通過葉面和種子處理來防治一系列真菌病害， 如谷物、大豆、果樹和蔬菜上由殼針抱菌（Septoria)、灰葡萄抱菌（Bot巧tis)、白粉菌 化rysiphe)、尾抱菌（Cercospora)、柄誘菌（Puccinia)、絲核菌（Rhizoctonia)、核腔菌 (Pyreno曲ora spp.)等引起的病害。其特別適用于豆類植物，防治由鏈格抱菌(Alternaria spp.)引起的灰霉病(Bot巧tis cinerea)、誘病、白粉病和殼針抱菌引起的病害，大豆誘病 (化akopsora)，棉花上由立枯絲核菌(化izoctonia solani)引起的病害W及向日葵和油巧 菜上由鏈格抱菌引起的病害等。在所有試驗(yàn)劑量下，對所有作物非常安全。氣挫菌酷胺適配 性強(qiáng)，可與化挫酸菌醋、Ξ挫類殺菌劑和己斯夫其他產(chǎn)品復(fù)配使用。研究表明，氣挫菌酷胺 比市售的酷胺類殺菌劑具有更好的活性，該產(chǎn)品無論在活性、多功能性，還是在內(nèi)吸性和耐 雨水沖刷性等方面都為現(xiàn)代殺菌劑建立了新標(biāo)桿。己斯夫打算將氣挫菌酷胺引入世界上50 多個(gè)國家，用于100多種作物上。2011年，氣挫菌酷胺首先在英國登記和上市，現(xiàn)登記和上市 的國家包括澳大利亞、美國、加拿大、歐盟13國、己西和中國等。公司預(yù)測，該產(chǎn)品的年峰值 銷售額可達(dá)6億歐元。運(yùn)是所有SDHI類殺菌劑中，開發(fā)公司寄予的期望值最高的產(chǎn)品。
[0004] 隨著氣挫菌酷胺的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的美國、加拿大等國 家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(Μ化），如美國 規(guī)定氣挫菌酷胺在果蔬中的MRL為0.5~30mg/kg，在畜產(chǎn)品及水產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中MRL 為0 . Olmg/kg，在堅(jiān)果及糧谷中脈L為0.06~15mg/kg;加拿大規(guī)定氣挫菌酷胺在果蔬中的 Μ化為0.02~2mg/kg，在畜產(chǎn)品及水產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中脈L為0.01~0.05mg/kg，在堅(jiān)果 及糧谷中ML為0.01~3mg/kg;歐盟、日本等國家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒有在該國家登記， 沒有制定相應(yīng)的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性食品 中殘留限量均實(shí)行O.Olmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對氣挫菌酷胺殘留量測定方法的研究較少，報(bào)道的檢測方法主要為蔬菜 和水果中氣挫菌酷胺殘留檢測方法，運(yùn)些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測 定蔬菜和水果中氣挫菌酷胺殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MS測定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺(tái)數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時(shí)，需使用不同的流動(dòng) 相或色譜柱，運(yùn)樣需要不斷更換色譜柱、流動(dòng)相并耗費(fèi)比較長的時(shí)間對系統(tǒng)進(jìn)行平衡，運(yùn)一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質(zhì)譜(GC-EI-MS)分析食 品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有很大優(yōu)勢，由于電子轟擊電離源質(zhì)譜為通用性檢測器，可實(shí)現(xiàn)幾 百種農(nóng)藥的多殘留分析，可同時(shí)定性和定量，價(jià)格適中，因此現(xiàn)各種檢測機(jī)構(gòu)和企業(yè)均配備 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜儀(GC-EI-MS)對食品農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，但迄 今為止未見食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌酷胺殘留量的GC-EI-MS檢測方法的報(bào)道。另外，眾所周知， 如E化邸S前處理技術(shù)已成為農(nóng)藥殘留分析中應(yīng)用最廣的樣品前處理方法，但Q證化ERS方法 主要適用于低脂肪含量的高含水基質(zhì)，如大部分的水果蔬菜，在面對高脂肪含量基質(zhì)時(shí)能 力有限，一般需要增加正己燒除脂、冷凍樣品提取液去脂等步驟，但效果有限。近年來有些 公司推出了增強(qiáng)型脂質(zhì)去除專利產(chǎn)品-Enhanced Matrix Removal，EMR-lipid，主要用于去 除具有直鏈控類結(jié)構(gòu)的脂類干擾物，包括游離脂肪酸、膽固醇、甘油Ξ醋、憐脂等。該產(chǎn)品已 被制成基質(zhì)固相分散萃取劑，經(jīng)水活化后可直接通過分散固相萃取流程對提取液中的脂類 雜質(zhì)進(jìn)行去除，本發(fā)明應(yīng)用該前處理方法凈化動(dòng)物源性食品時(shí)發(fā)現(xiàn)，該方法簡單高效、對脂 類物質(zhì)去除效果好，建立EMR基質(zhì)分散凈化、氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定 性和定量分析動(dòng)物源性食品中氣挫菌酷胺殘留量的檢測方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種氣挫菌酷胺殘留量的GC-EI-MS快速測定方法，主要用于 測定動(dòng)物源性食品等脂肪含量高的食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌酷胺殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種氣挫菌酷胺殘留量的GC-EI- MS快速測定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取混勻樣品于具塞離屯、管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙臘溶液均質(zhì)提取，然后 加入氯化鋼和無水硫酸儀，劇烈滿旋Imin后離屯、。
[0009] 凈化 將增強(qiáng)型脂質(zhì)去除產(chǎn)品EMR用水活化，移取樣品提取液于活化好的EMR凈化管中，滿旋 Imin后，700化/min離屯、5min，轉(zhuǎn)移全部上清液至裝有無水硫酸儀和氯化鋼的離屯、管中進(jìn)行 鹽析，滿旋離屯、后，移取一定體積的上清液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混 合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)檢測。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氣挫菌酷胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，滿旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的氣挫菌酷胺系列標(biāo)準(zhǔn)工 作液。
[0011] (4)測定和結(jié)果計(jì)算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-EI-MS測定，W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-EI-MS進(jìn)行測定，測得樣品液中氣挫菌酷胺的色譜峰面積，代入基質(zhì)標(biāo) 準(zhǔn)工作曲線，得到樣品液中氣挫菌酷胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到 樣品中氣挫菌酷胺殘留量;若上機(jī)溶液中氣挫菌酷胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容 溶劑將上機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為動(dòng)物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0014] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式：選擇離子監(jiān)測（SIM)模式，監(jiān)測的離子為：159.0、 160.0、381.1、382.1。
[0015] 步驟(4)中測定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運(yùn)種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0016] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0017] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-EI-MS應(yīng)用于糧谷、動(dòng)物源性食品中氣挫菌酷 胺定性確證和定量檢測，平均回收率為92.2 %~94.9 %，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.4 % ~7.6%，檢出限低于1.13yg/kg，具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。 能滿足美國、歐盟、日本等國家對相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全 及對外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[001引圖巧添加在空白豬肉基質(zhì)中的氣挫菌酷胺的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0019] 圖2為不含氣挫菌酷胺的豬肉空白樣品的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0020] 圖3為W不含氣挫菌酷胺的豬肉空白樣