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      特定凝集素組合在制備用以鑒別肺癌類型及分期的測試載體方面的用圖

      文檔序號:9863681閱讀:442來源:國知局
      特定凝集素組合在制備用以鑒別肺癌類型及分期的測試載體方面的用圖
      【技術領域】
      [0001] 本發(fā)明設及一種基于血清糖蛋白糖型利用凝集素鑒別肺癌類型及病期的方案,具 體設及特定凝集素組合在制備用W鑒別肺癌類型及分期的測試載體方面的用途。
      【背景技術】
      [0002] 原發(fā)性支氣管肺癌,簡稱肺癌,是起源于支氣管粘膜或腺體的惡性腫瘤。目前在全 世界范圍內因惡性腫瘤引起的死亡中,肺癌最為常見。而且,它的發(fā)生率正在W約5%的速 度逐年增加,預計到2020年,因肺癌而死亡的人數(shù)將達到惡性腫瘤引起的總死亡人數(shù)的 50%。
      [0003] 肺癌已經(jīng)成為全世界各個國家亟待解決的重大健康問題和社會問題,在發(fā)展中國 家尤甚。在2010年進行的全國性抽樣調查顯示,肺癌的死亡率已升高為30.83/10萬,其中, 男性為41.34/10萬,女性為19.84/10萬,肺癌死亡人數(shù)占腫瘤相關的總死亡人數(shù)已達到 22.70%,居第1位,值得指出的是,在我國城市人口中,肺癌的死亡率為40.98/10萬,居首 位,且明顯高于農(nóng)村地區(qū)(26.93/10萬)。
      [0004] 根據(jù)肺癌的分化程度、形態(tài)特征和生物學特點,目前將大多數(shù)肺癌分成兩大類:非 小細胞肺癌(Non-Small-Cell Lung Cancer,NS化C)和小細胞肺癌(Small-Cell Lung Cancer,SCLC)。前者主要包括腺癌和鱗狀細胞癌(簡稱鱗癌)。其中,腺癌發(fā)病率最高,約占 肺癌的50 % ;鱗癌,曾經(jīng)最為常見的肺癌類型,現(xiàn)約占肺癌的1/3。而小細胞肺癌僅占肺癌 的 15%。
      [0005] 雖然,近年來肺癌的治療方面已取得了長足的進步,但從總體上來說,肺癌的預后 情況仍舊很不理想,非小細胞肺癌和小細胞肺癌的5年生存率僅分別為14%和4%。引起運 一情況的主要原因是由于肺癌起病隱匿,早期通常無明顯癥狀,大多數(shù)肺癌患者在確診時 已處于進展期,失去了手術治愈的機會。因此,肺癌的早期篩查和診斷對于提高肺癌患者的 生存率、延長患者的生存期,都是至關重要的。
      [0006] 糖基化是最普遍的蛋白質翻譯后修飾之一,研究發(fā)現(xiàn)約一半W上的哺乳動物蛋白 質都發(fā)生了糖基化。糖基化作為一種重要的翻譯后修飾,可W影響蛋白質的溶解度、折疊、 定位及構象的維持,調節(jié)蛋白質的功能和降解;還可W介導分子與分子之間、分子與細胞之 間、細胞與細胞之間的相互作用。大量研究表明,蛋白質糖基化,作為重要的翻譯后修飾,在 腫瘤發(fā)生、浸潤、轉移的過程中會發(fā)生改變并有相應的功能性作用。糖基化修飾的改變主要 包括兩個方面:1)多膚鏈上糖基化結合位點的改變;2)寡糖鏈結構的改變。因此,差異性表 達的蛋白質糖基化亞型可W成為新型腫瘤標記物,用于腫瘤的早期診斷,還可W成為腫瘤 生物祀向治療的新祀點。
      [0007] 70% W上的血清蛋白質是糖基化修飾的。研究發(fā)現(xiàn),在腫瘤細胞中,糖基化的加 工、合成機制發(fā)生了改變,運些改變導致了異常糖基化蛋白質的產(chǎn)生和釋放。雖然,目前糖 基化改變對腫瘤的發(fā)展關系還沒有一個完整的了解,但運些改變對早期診斷或作為預后的 指示總是有利無弊的。現(xiàn)在,已經(jīng)有一些研究者通過檢測運些外周血中的異常糖蛋白亞型, W期尋找到更理想的腫瘤標志物。
      [000引生物忍片現(xiàn)已成為快速、高效、高通量取得相關信息的重要手段。隨著糖生物學及 糖組學研究的進展,糖忍片正發(fā)展成為糖生物學及糖組學新興的檢測工具。凝集素忍片檢 測樣品用量少、高通量、靈敏度極高,并且可W與多種檢測手段整合使用,可W快速、準確檢 測出待測樣本中糖蛋白糖鏈的差異,因而可大大提生物忍片結果檢測、分析的速度和效率, 是一種新型的快速、高效的鑒別病癥的手段。
      [0009] 凝集素忍片是通過固定于忍片上的凝集素探針與樣品中糖蛋白糖鏈特異性結合, 可W高通量地檢測出樣品中糖蛋白糖鏈結構和連接方式的變化,是研究糖蛋白糖鏈結構變 化最有效的分析工具之一,其有助于發(fā)展新的診斷和監(jiān)測疾病的方法。

      【發(fā)明內容】

      [0010] 本發(fā)明通過大量的實驗和分析,最終確立了針對血清樣本的特定凝集素組合能夠 快速鑒別血清中糖蛋白糖鏈的變化,為快速、有效鑒別肺癌種類(小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗 癌)W及分期提供新的檢測方案,從而明確了特定凝集素組合在制備用W鑒別肺癌類型及 分期的測試載體方面的用途。
      [0011] 本發(fā)明的技術解決方案是:
      [001^ 針對血清樣本,凝集素 GSk巧日SNA的組合在制備用W鑒別小細胞肺癌的測試載體 方面的用途。
      [0013] 其中,測試載體上還可W設置凝集素 SBA和PNA作為內參。
      [0014] 另外,針對血清樣本,本發(fā)明還提出特定凝集素組合在制備用W鑒別小細胞肺癌 分期的測試載體方面的用途,所述特定凝集素組合是W下四種組合之一:
      [001引(1)凝集素 WFA和STL的組合;
      [0016] (2)凝集素 HHL、LCA、NPA和肥A-I的組合;
      [0017] (3)凝集素 LTL、LEL和DBA的組合;
      [0018] (4)單獨一種凝集素 PHA-E;
      [0019] 或者是再對W上(1)至(4)的任意組合。
      [0020] 針對血清樣本,凝集素皿1^、胖。4、胖64、?¥1、1^巧咖4心1中任意兩種^上的組合在制 備用W鑒別肺腺癌的測試載體方面的用途。
      [0021 ]其中,測試載體上還可W設置凝集素 SBA和PNA作為內參。
      [0022] 另外,針對血清樣本,本發(fā)明還提出特定凝集素組合在制備用W鑒別肺腺癌分期 的測試載體方面的用途,所述特定凝集素組合是W下四種組合之一:
      [0023] (1)凝集素 Ρ?1-Ι、ConA 和 Ρ?1-ΙΙ的組合;
      [0024] (2)凝集素 ConA和Ρ?1-ΙΙ的組合;
      [002引(3)凝集素14心1巧脂臟的組合;
      [0026] (4)凝集素 SNA、WFA和STL的組合;
      [0027] 或者是再對W上(1)至(4)的任意組合。
      [002引針對血清樣本,凝集素14心1、口化-11、8化和嫩心11中任意兩種^上的組合在特定 凝集素組合在制備用W鑒別肺鱗癌的測試載體方面的用途。
      [0029] 其中,測試載體上還可W設置凝集素 SBA和PM作為內參。
      [0030] 另外,針對血清樣本,本發(fā)明還提出特定凝集素組合在制備用W鑒別肺鱗癌分期 的測試載體方面的用途,所述特定凝集素組合是W下四種組合之一:
      [0031] (1)單獨一種凝集素 BPL
      [0032] (2)凝集素 RCA120、STL 和 BPL 的組合;
      [0033] (3)凝集素 SJA和PSA的組合;
      [0034] (4)凝集素 SJA和NPA的組合;
      [0035] 或者是再對W上(1)至(4)的任意組合。
      [0036] 上述測試載體可W是凝集素忍片、酶標板、磁粒、瓊脂糖等。
      [0037] W凝集素忍片的固定為例:
      [0038] 凝集素忍片是將各種不同來源的凝集素固定于醒基化、環(huán)氧化或經(jīng)其他方式修飾 后的玻璃片基上,再與標記后的糖蛋白、菌體、細胞等待檢測樣品反應,W檢測待檢測樣品 的糖鏈結構。
      [0039] W環(huán)氧化磁粒為例:
      [0040] 合成Fe3〇4磁性微粒,然后用硅烷化試劑修飾磁性微粒制備得到環(huán)氧化磁性微粒。 合成的環(huán)氧化磁性微粒被應用于凝集素等蛋白的固定化。
      [0041] 基于W上方案,還可上述特定凝集素組合為單元再進行組合,制備包含凝集 素種類更多的測試載體。例如,在一個凝集素忍片上固定W上所提到的所有凝集素,則能夠 一次確定肺癌類型及其分期。運類方案自然也是屬于本申請的保護范圍的。
      [0042] 本發(fā)明具有W下技術效
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