032]與現(xiàn)有技術(shù)相比，上述技術(shù)方案中的一個(gè)技術(shù)方案具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0033] a)本文針對(duì)煙草中常施用的五種殺菌劑霜霉威、多菌靈、稻瘟靈、三唑醇和三唑酮 中的任意一種或多種，利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(UPLC-MS/MS)，建立UPLC-MS/MS同 時(shí)快速分析煙蒂濾嘴、煙蒂中殘留煙絲(煙蒂煙絲）中所述殺菌劑截留量的方法，可以應(yīng)用 此方法研究所述五種殺菌劑在標(biāo)準(zhǔn)卷煙添加農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)煙加標(biāo)樣品）和挑選高殺菌劑 高煙葉利用小型卷煙機(jī)卷制的卷煙樣品（自制卷煙樣品）中的濾嘴轉(zhuǎn)移率，為濾嘴風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià) 提供數(shù)據(jù)支撐。
[0034] b)發(fā)明人在實(shí)施本發(fā)明的過(guò)程中，嘗試了多種提取溶劑對(duì)濾嘴中殺菌劑截留量的 提取方式，最終選擇甲醇作為提取溶劑，既保留了較好的提取效果，又不會(huì)將濾嘴中聚丙烯 纖維或醋酸纖維溶解，從而降低了從提取溶劑中提取所述殺菌劑的難度。
[0035] c)發(fā)明人在實(shí)施本發(fā)明的過(guò)程中，嘗試了多種UPLC色譜柱，包括UPLC HSS T3， UPLC BEH Shield RP18和Atlantis dC18等，最終選擇了UPLC HSS T3柱，配合本發(fā)明的流 動(dòng)相體系，能夠獲得更好的分離度與峰形。
[0036] d)發(fā)明人嘗試了多種不同的流動(dòng)相體系，最終確定了0.1%甲酸水和0.1%甲酸甲 醇體系與UPLC HSS T3柱配合，能夠獲得更好的分離度與峰形。
[0037] e)發(fā)明人選用了適當(dāng)?shù)奶荻认疵摮绦蚴沟盟鑫宸N殺菌劑完全分離，整個(gè)梯度洗 脫時(shí)間為12min。
[0038] f)發(fā)明人采用針栗注射(5iiL/min)對(duì)目標(biāo)物單獨(dú)進(jìn)樣，將五種農(nóng)藥及內(nèi)標(biāo)(0.5iig/ mL)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全掃，得到最大響應(yīng)值的準(zhǔn)分子離子[M+H]+為母離子，通過(guò)優(yōu)化噴霧電 壓、錐孔電壓、碰撞能等參數(shù)使得母離子強(qiáng)度最大。
【附圖說(shuō)明】
[0039] 圖1是本發(fā)明加標(biāo)樣品的選擇離子流色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0040] 下面結(jié)合一個(gè)具體實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明。
[0041] 為使本發(fā)明實(shí)施方式的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，本實(shí)施例同時(shí)還對(duì)捕集 過(guò)煙氣總粒相物的濾片、煙蒂(包括濾嘴和煙蒂煙絲）、煙灰和主流煙氣氣相物中的殺菌劑 殘留進(jìn)行同時(shí)分析，對(duì)本發(fā)明實(shí)施方式中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述 的實(shí)施方式是本發(fā)明一部分實(shí)施方式，而不是全部的實(shí)施方式?；诒景l(fā)明中的實(shí)施方式， 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施方式，都屬于本 發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0042]本實(shí)施例對(duì)煙草中常施用的五種殺菌劑，利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀 (UPLC-MS/MS)，同時(shí)快速分析主流煙氣總粒相物、氣相物、濾嘴、煙蒂中殘留煙絲（煙蒂煙 絲)和煙灰中霜霉威、多菌靈、稻瘟靈、三唑醇和三唑酮五種農(nóng)藥截留量。應(yīng)用此方法研究五 種殺菌劑在標(biāo)準(zhǔn)卷煙添加農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)煙加標(biāo)樣品）和挑選尚殺菌劑尚殘留煙葉利用小 型卷煙機(jī)卷制的卷煙樣品（自制卷煙樣品）中的煙氣及濾嘴轉(zhuǎn)移率，為煙氣及煙氣的風(fēng)險(xiǎn)評(píng) 價(jià)提供數(shù)據(jù)支撐。需要指出的是，利用本實(shí)施例的方法，可以僅對(duì)霜霉威、多菌靈、稻瘟靈、 三唑醇和三唑酮中的任意一種殺菌劑進(jìn)行測(cè)定，也可以對(duì)所述殺菌劑中的多種進(jìn)行同步測(cè) 定。本實(shí)施例是對(duì)所述五種殺菌劑進(jìn)行同步測(cè)定。
[0043] 霜霉威、多菌靈、稻瘟靈、三唑醇和三唑酮標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)自于Labor Dr. Ehrenstorfer-Schafers(化學(xué)純度：2 98 ? 5 %，Augsburg，德國(guó)），內(nèi)標(biāo)磷酸三苯酯（TPP)來(lái)自于Labor Dr ? Ehrenstorfer-Schafers(化學(xué)純度：2 98 ? 5%，Augsburg，德國(guó)），甲酸（HPLC級(jí)，德國(guó) Sigma公司）；甲醇，乙腈（色譜純，美國(guó)Thermo-Fisher公司）；試劑包（內(nèi)含lg梓檬酸鈉和 〇.5g檸檬酸二氫鈉，4g無(wú)水硫酸鎂和lg氯化鈉)和N-丙基乙二胺(PSA)購(gòu)自安捷倫公司（美 國(guó)），水為超純水。標(biāo)準(zhǔn)卷煙由國(guó)家煙草標(biāo)準(zhǔn)化中心提供，63個(gè)煙葉樣品選自國(guó)內(nèi)外農(nóng)殘普 查分析樣品。
[0044] 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(Xevo TQ，美國(guó)Waters公司），配備電噴霧電離源 (ESI);渦旋振蕩器(VtexMixer 230VeU，美國(guó)Labnet公司）；斯茹林直線型吸煙機(jī)(SM450，英 國(guó)斯節(jié)林公司），離心機(jī)(Sigma 3K15,德國(guó)Sigma公司）。
[0045] 1、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
[0046]分別準(zhǔn)確稱(chēng)取10mg的殺菌劑標(biāo)準(zhǔn)品，精確至O.OOOlg，用乙腈溶解定容至10mL，制 得1.0mg/mL的單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用乙腈準(zhǔn)確配制混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，其中，霜霉威：0.20mg/ mL;多菌靈和稻瘟靈:0.04mg/mL;三唑醇和三唑酮:0.10mg/mL，所述混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液儲(chǔ)存于 棕色玻璃瓶中，-20°C保存。稀釋所述混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液得到混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度分別為霜 霉威：0 ? 020mg/mL;多菌靈和稻瘟靈：0 ? 004mg/mL;三唑醇和三唑酮：0 ? 010mg/mL，所述混合 標(biāo)準(zhǔn)工作液儲(chǔ)存于棕色玻璃瓶中，-20 °C保存。
[0047] 準(zhǔn)確配置0.99mg/mLTPP內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，儲(chǔ)存于棕色玻璃瓶中，-20°C保存。取一 定量的所述內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用乙腈稀釋定容，制得l〇yg/mL內(nèi)標(biāo)工作液。所有的儲(chǔ)備液和工作 液于冰箱-20°C保存，使用前將其恢復(fù)到室溫。
[0048] 2、樣品的提取和凈化
[0049]按照GB/T 16447-2004平衡煙支，ISO標(biāo)準(zhǔn)抽吸模式（ISO 3308:2000/GB/T 19609-2004)來(lái)捕集轉(zhuǎn)移到主流煙氣中的農(nóng)藥，每個(gè)濾片抽吸5支煙。捕集煙氣后的捕集過(guò)煙氣總 粒相物的濾片放入50mL具蓋離心管中，并用空白濾片擦干凈捕集器上的煙氣總粒相物，一 并加入具蓋離心管;分別收集每個(gè)孔道的濾嘴、煙蒂中殘留煙絲(煙蒂煙絲）、煙灰于不同的 5〇mL具蓋離心管;在每個(gè)捕集器后接100mL吸收瓶，吸收瓶預(yù)先加入20mL乙腈和100此內(nèi)標(biāo)， 用于捕集煙氣氣相物中的殺菌劑。
[0050] 煙蒂中煙絲的處理方法按照以下步驟順序進(jìn)行：將煙蒂中的煙絲剝離，合并放入 50mL第一旋蓋離心管中，加入10mL超純水震蕩直至煙絲充分浸潤(rùn)，靜置lOmin，向第一旋蓋 離心管中加入l〇ml乙腈和200yL內(nèi)標(biāo)，第一渦旋震蕩lmin，速率2000r/min。，隨后放入-20°C 冰箱中冷凍保存。
[0051] 捕集過(guò)煙氣總粒相物的濾片和煙灰的處理方法與煙絲的處理方法相同。
[0052] 樣品經(jīng)乙腈提取，基質(zhì)分散固相萃取，過(guò)濾后用LC-MS/MS分析測(cè)定。
[0053]濾嘴的處理方法按照以下步驟順序進(jìn)行：取剔除煙絲濾嘴，每個(gè)濾嘴用剪刀剪成 四瓣，加入50mL第二旋蓋離心管。每個(gè)所述第二旋蓋離心管中放入5個(gè)濾嘴。向所述第二離 心管中加入20mL甲醇，振蕩到樣品被甲醇充分浸潤(rùn)，靜置lOmin。隨后向所述第二離心管中 加入200yL、10yg/mL內(nèi)標(biāo)，第二渦漩振蕩5min，2000r/m，振蕩完成后放入-20°C冰箱中冷凍 保存。
[0054]向經(jīng)過(guò)渦漩振蕩冷凍后的所述第一旋蓋離心管和所述第二旋蓋離心管中分別然 后依次加入4g無(wú)水硫酸鎂、lg氯化鈉、lg檸檬酸鈉和0.5g檸檬酸二氫鈉，第三渦漩振蕩 5min，2000r/m〇
[0055]在第一旋蓋離心管中移取其上清液于容積為1.8mL的第三旋蓋離心管中，在第二 旋蓋離心管中移取其上清液于容積為1.8mL的第四旋蓋離心管中。分別向第三旋蓋離心管 和第四旋蓋離心管中加入150mg無(wú)水硫酸鎂及25mgPSA吸附劑，所述第三旋蓋離心管和所述 第四旋蓋離心管經(jīng)過(guò)第四漩渦振蕩混合2min，2000r/m，然后6000r/m高速離心2min;吸取上 清液經(jīng)有機(jī)