心外膜脂肪組織的生物標(biāo)志物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了用于預(yù)測受試對象心外膜脂肪組織(EAT)水平的方法，包括：(a)測定取自所述受試對象的樣品中的一種或多種脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平，其中所述生物標(biāo)志物選自以下物質(zhì)：(i)磷脂酰膽堿(PC)[16:1/16:1]，(ii)甘油二酯(DAG)[42:8]，(iii)磷脂酰乙醇胺?醚(PE?O)[32:5]，(iv)磷脂酰膽堿(PC)[18:0/22:5]，(v)磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1]，(vi)磷脂酰甘油(PG)[20:3/20:3]，(vii)磷脂酰甘油(PG)[22:5/18:1]；(b)將所述樣品中的所述生物標(biāo)志物的水平與參考值比較；其中所述樣品中的所述生物標(biāo)志物的水平與所述參考值相比，指示了所述受試對象中EAT脂肪的水平。
【專利說明】
心外膜脂肪組織的生物標(biāo)志物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明提供了可用于預(yù)測受試對象心外膜脂肪組織水平的多種脂質(zhì)生物標(biāo)志物 和生物標(biāo)志物的組合。
【背景技術(shù)】
[0002] 內(nèi)臟脂肪組織是預(yù)示心臟代謝性疾病的重要結(jié)構(gòu)，相比一般脂肪堆積，引起的風(fēng) 險更尚。
[0003] 有損代謝和危及生命程度的肥胖與脂肪堆積于內(nèi)臟脂肪組織和器官的異位脂肪 沉積相關(guān)聯(lián)(Graner et al · (2013)，98:1189-1197(Graner等人，2013年，第98卷，第1189-1197頁）；Donahue and Abbott，（1987)，Lancet 2:1215(Donahue和Abbott，1987年，《柳葉 刀》第2卷，第 1215頁）；Kalkhoff et al.(1983)，J Lab Clin Med 102:621-627(Kalkhoff 等人，1983年，《實驗室與臨床醫(yī)學(xué)雜志》第102卷，第621-627頁））。具體地講，內(nèi)臟脂肪含量 (VA)越高，發(fā)展動脈粥樣硬化心血管疾病的可能性越高，這類疾病是由與內(nèi)分泌和免疫系 統(tǒng)相互影響的復(fù)雜信號傳導(dǎo)代謝功能介導(dǎo)的（Batra and Siegmund，（2012)，Dig Dis 30: 70-74(Batra和Siegmund，2012年，《消化性疾病》第30卷，第70-74頁）；Fox et al. (2007)， Circulation 116:39-48(Fox等人，2007年，《循環(huán)》第 116卷，第39-48頁））。
[0004] 內(nèi)臟脂肪包括外形復(fù)雜的脂肪沉積，即腸系膜和心外膜脂肪組織，以及圍繞其他 器官的外圍脂肪庫（Dulloo et al.(2010)，Int J 0bes(Lond)34 Suppl 2:Sl_S3(Dulloo 等人，2010年，倫敦《國際肥胖期刊》第34卷，增刊第2期，第S1-S3頁））。這些內(nèi)臟組織明顯不 同的代謝差異以特殊的方式造就疾病病因。
[0005] 心外膜脂肪組織(EAT)是沉積在心臟周圍的特殊形式的內(nèi)臟脂肪。EAT出現(xiàn)在心臟 的表面，位于心肌和心外膜之間，并覆蓋了心臟表面的一大部分。
[0006] EAT數(shù)量增加與冠狀動脈疾病事件和主要的心臟不良事件相關(guān)聯(lián)(Mahabadi et al.，2013，J Am Coll Cardiol.2013Apr 2;61(13):1388-95(Mahabadi等人，《美國心臟病 學(xué)會雜志》，2013年4月2日，第61卷第13期，第1388-1395頁））。具體地講，心外膜脂肪組織與 動脈粥樣硬化、代謝綜合征、空腹血糖受損、胰島素抵抗、高血壓和糖尿病密切相關(guān)。
[0007] 事實上，在健康方面，公眾越來越關(guān)注兒童成長和兒童肥胖，其中EAT被認為是預(yù) 測代謝是否健康的重要指標(biāo)。
[0008] 也有研究證實，銀肩病患者與對照組相比，心外膜脂肪水平更高（Balci et al. (2013)，0ct 25，CED,12216)。
[0009] 心外膜脂肪組織可由多種成像技術(shù)測量，包括超聲波心動描記術(shù)、計算機斷層掃 描術(shù)(CT)和磁共振成像術(shù)(MRI)。然而，這些方法可能耗時較長、價格昂貴，因而不適宜常規(guī) 使用。
[0010]最近的應(yīng)用已證明，將特定代謝物譜與體脂分布建立關(guān)聯(lián)是可行的（Szymanska et al· (2012)0MICS 16:652-667(Szymanska等人，2012年，0MICS第 16卷，第652-667頁）； Yamakado et al.(2012),Clinical Obesity 2:29_40(Yamakado等人，2012年，《臨床肥胖 癥》第2卷，第29-40頁）），其中代謝物包括氨基酸和各種脂質(zhì)種類(甘油三酯、甘油二酯、溶 血磷脂、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺）。但與心外膜脂肪相關(guān)的標(biāo)志物尚未鑒別出來。
[0011] 因此，本發(fā)明的目的是提供既容易檢測、又便于預(yù)測EAT的脂質(zhì)生物標(biāo)志物。利用 此類脂質(zhì)生物標(biāo)志物可識別需要降低EAT水平的受試對象，據(jù)此改變這類受試對象的生活 方式，從而促進其以健康的方式生活。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明研究了特定內(nèi)臟脂肪庫中的血漿脂質(zhì)組，及其內(nèi)部容納的信息。鳥槍脂質(zhì) 組學(xué)方法已被用于量化血漿脂質(zhì)的分布，并評估與特定體脂沉積相關(guān)的復(fù)合代謝特征，尤 其注重心外膜脂肪組織(EAT)。
[0013] 因此，本發(fā)明一方面提供了一種用于預(yù)測受試對象中EAT水平的方法，包括：
[0014] (a)測定取自受試對象的樣品中的一種或多種脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平，其中所述 生物標(biāo)志物選自以下物質(zhì)：
[0015] ⑴磷脂酰膽堿(PC)[16:1/16:1]
[0016] (ii)甘油二酯(DAG)[42:8]
[0017] (iii)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0)[32:5]
[0018] (iv)磷脂酰膽堿(PC) [ 18:0/22:5]
[0019] (v)磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1]
[0020] (vi)磷脂酰甘油(PG) [20:3/20:3]
[0021] (vii)磷脂酰甘油(PG) [22:5/18:1]
[0022] (b)將樣品中的生物標(biāo)志物水平與參考值比較；
[0023] 其中樣品中的生物標(biāo)志物水平與參考值相比，指示了受試對象中EAT的水平。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種用于預(yù)測受試對象心外膜脂肪組織(EAT)水平的方法， 包括：
[0025] (a)使用檢測裝置測定取自受試對象的樣品中的一種或多種脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水 平，其中所述生物標(biāo)志物選自以下物質(zhì)：
[0026] (i)磷脂酰膽堿(PC) [ 16:1/16:1 ]
[0027] (ii)甘油二酯（DAG)[42:8]
[0028] (iii)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0)[32:5]
[0029] (iv)磷脂酰膽堿(PC) [ 18:0/22:5]
[0030] (v)磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1]
[0031 ] (vi)磷脂酰甘油（PG) [20:3/20:3]
[0032] (vii)磷脂酰甘油(PG)[22:5/18:1]
[0033] 然后根據(jù)樣品中的生物標(biāo)志物相對參考值的水平，預(yù)測受試對象中EAT的水平。 [0034]檢測裝置優(yōu)選為質(zhì)譜儀。
[0035] 優(yōu)選的是，該方法包括測定取自所述受試對象的樣品中的一種或多種脂質(zhì)生物標(biāo) 志物的水平，所述脂質(zhì)生物標(biāo)志物選自PC[ 16:1 /16:1 ]、DAG[42:8]和ΡΕ-0[ 32:5]。
[0036] 在一個實施方案中，該方法包括測定取自所述受試對象的樣品中的兩種或更多種 脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平，所述脂質(zhì)生物標(biāo)志物選自PC[ 16:1/16:1 ]、DAG[42:8]和PE-0[32: 5]〇
[0037] 在另一個實施方案中，該方法包括測定取自所述受試對象的樣品中的PC[ 16 :1/ 16:1]、DAG[42:8]和 PE-0[32:5]每一種的水平。
[0038] 在一個實施方案中，測定了PC[ 16 :1/16 :1 ]的水平，取自受試對象的樣品中的PC [16:1/16:1 ]水平相比參考樣品降低，指示EAT水平較高。
[0039] 在另一個實施方案中，測定了DAG[42 : 8]的水平，取自受試對象的樣品中的DAG [42:8 ]水平相比參考樣品升高，指示EAT水平較高。
[0040] 在另一個實施方案中，測定了PE-0[32 :5]的水平，取自受試對象的樣品中的ΡΕ-0 [32:5]水平相比參考樣品升高，指示EAT水平較高。
[0041 ]在另一個實施方案中，測定了PC[ 18:0/22:5]的水平，取自受試對象的樣品中的PC [18:0/22:5]水平相比參考樣品升高，指示EAT水平較高。
[0042]在另一個實施方案中，測定了PI[18:0/16:1]的水平，取自受試對象的樣品中的PI [18:0/16:1 ]水平相比參考樣品升高，指示EAT水平較高。
[0043]在另一個實施方案中，測定了PG[20:3/20:3]的水平，取自受試對象的樣品中的PG [20:3/20:3 ]水平相比參考樣品升高，指示EAT水平較高。
[0044]在另一個實施方案中，測定了PG[22:5/18:1 ]的水平，取自受試對象的樣品中的PG [22:5/18:1 ]水平相比參考樣品升高，指示EAT水平較高。
[0045] 在另一個實施方案中，該方法包括測定取自受試對象的樣品中的下列兩種、三種、 四種、五種、六種或全部脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平:PC[16 :l/16:l]、DAG[42:8]、PE-0[32:5]、 PC[18:0/22:5]、PI[18:0/16:1]、PG[20:3/20:3]、PG[22:5/18:1]。
[0046] 在一個實施方案中，樣品包括取自受試對象的血清或血漿。
[0047] 在另一個實施方案中，參考值以受試對象對照群體的生物標(biāo)志物平均水平為基 礎(chǔ)。
[0048] 在另一個實施方案中，采用脂質(zhì)組學(xué)分析法測定生物標(biāo)志物的水平。
[0049] 目前使用的大多數(shù)脂質(zhì)組學(xué)分析平臺以電噴霧電離(ESI)結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS) 為基礎(chǔ)進行分析。基于ESI-MS的方法可分為兩類，分類依據(jù)是在注入質(zhì)譜儀之前，是否進行 液相色譜(LC)。
[0050] 液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)或者HPLC-MS是一項把液相色譜(或HPLC)的物理分離能力 與質(zhì)譜(MS)的質(zhì)量分析能力結(jié)合起來的分析化學(xué)技術(shù)。
[0051] 將樣品（如有機提取物)直接注入離子源的方法被統(tǒng)稱為鳥槍脂質(zhì)組學(xué)。
[0052]鳥槍脂質(zhì)組學(xué)采用直接注入的辦法，避免了因濃度變化、色譜異常和離子配對變 化帶來的分析困難。
[0053]在另一個實施方案中，采用非靶向鳥槍脂質(zhì)組學(xué)分析法測定生物標(biāo)志物的水平。 [0054]鳥槍分析法用于快速定量地提供給定生物基質(zhì)分子組成的快照。通常情況下，月旨 質(zhì)從細胞、體液或組織中提取后被直接注入質(zhì)譜儀，完全不必進行色譜預(yù)分離。超過1〇〇， 〇〇〇的質(zhì)量分辨率與混合型Orbitrap儀器的亞ppm級質(zhì)量精度相結(jié)合，使得能夠從MS全譜圖 和脂質(zhì)種類各自的MS/MS譜圖中識別出各脂質(zhì)種類并加以量化。
[0055]這種方法與傳統(tǒng)的三重四極桿質(zhì)譜靶向分析相比，主要優(yōu)點是可在不對分子組成 施加任何限制的情況下從多個脂質(zhì)類別中非靶向、快速并可靠地識別出單獨脂質(zhì)種類并加 以量化。
[0056]在一個實施方案中，所述樣品中生物標(biāo)志物的水平與參考值相比，指示與EAT水平 升高相關(guān)聯(lián)的患病風(fēng)險，所述疾病例如心血管障礙或代謝障礙。
[0057]在另一個實施方案中，所述樣品中生物標(biāo)志物的水平與參考值相比，指示與EAT水 平升高相關(guān)聯(lián)的患病風(fēng)險，所述疾病例如動脈粥樣硬化、冠心病、代謝綜合征、空腹血糖受 損、胰島素抵抗、高血壓和糖尿病。
[0058]在另一個實施方案中，所述樣品中生物標(biāo)志物的水平與參考值相比，指示心血管 障礙或代謝障礙正在發(fā)展。
[0059] 在另一個實施方案中，所述樣品中生物標(biāo)志物的水平與參考值相比，指示動脈粥 樣硬化、冠心病、代謝綜合征、空腹血糖受損、胰島素抵抗、高血壓和糖尿病正在發(fā)展。
[0060] 在另一個實施方案中，所述樣品中生物標(biāo)志物的水平與參考值相比，指示健康受 試對象中的EAT水平降低，有失去心肌保護作用的風(fēng)險;或指示含有過多EAT的不健康受試 對象有恢復(fù)心肌保護作用的可能。
[0061] 在本發(fā)明另一方面，提供了一種調(diào)節(jié)受試對象心外膜脂肪組織(EAT)水平的方法， 包括:如果此前使用上述方法已確定受試對象具有指示EAT水平不健康的生物標(biāo)志物水平， 則改變受試對象的生活方式，從而調(diào)節(jié)EAT水平。
[0062] 在又一方面，本發(fā)明提供了一種調(diào)節(jié)受試對象中EAT水平的方法，包括：
[0063] (a)采用上述方法測定生物標(biāo)志物的水平，
[0064] (b)如果受試對象具有指示EAT水平不健康的生物標(biāo)志物水平，則改變受試對象的 生活方式，從而調(diào)節(jié)EAT水平。
[0065] 在再一方面，本發(fā)明提供了一種選擇改變受試對象的生活方式，從而調(diào)節(jié)所述受 試對象的心外膜脂肪組織(EAT)水平的方法，該方法包括：
[0066] (a)采用上述方法測定生物標(biāo)志物的水平，
[0067] (b)根據(jù)步驟(a)測定的生物標(biāo)志物水平，選擇生活方式的適當(dāng)改變。
[0068] 優(yōu)選的是，"調(diào)節(jié)EAT水平"包括減少EAT或防止EAT增多。
[0069] 在一個實施方案中，改變受試對象的生活方式包括改變飲食。改變飲食優(yōu)選地包 括向所述受試對象施用至少一種營養(yǎng)產(chǎn)品，構(gòu)成飲食的一部分，所述營養(yǎng)產(chǎn)品用于調(diào)節(jié)EAT 水平，例如促使EAT減少或防止EAT增多。
[0070] 例如，改變飲食可包括減少脂肪攝入和/或增加低脂食物攝入。
[0071 ]僅舉例來說，低脂食物可包括全麥面粉和面包、燕麥粥、高纖維早餐谷類食物、全 粒大米和全麥面食、蔬菜和水果、干制豆類和扁豆、烤馬鈴薯、干果、核桃、白魚、鯡魚、鯖魚、 沙丁魚、腌魚、皮爾徹德魚、鮭魚和瘦白肉。
[0072] 在一個實施方案中，該方法還包括在改變受試對象的生活方式之后，重復(fù)預(yù)測受 試對象中EAT水平的步驟。
[0073] 根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種預(yù)測受試對象發(fā)展心血管障礙或代謝障礙的 風(fēng)險的方法，包括：
[0074] (a)測定取自受試對象的樣品中的一種或多種脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平，其中所述 生物標(biāo)志物選自以下物質(zhì)：
[0075] (i)磷脂酰膽堿(PC) [ 16:1/16:1 ]
[0076] (ii)甘油二酯（DAG)[42:8]
[0077] (iii)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0)[32:5]
[0078] (iv)磷脂酰膽堿(PC) [ 18:0/22:5]
[0079] (v)磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1]
[0080] (vi)磷脂酰甘油（PG) [20:3/20:3]
[0081] (vii)磷脂酰甘油(PG) [22:5/18:1]
[0082 ] (b)將樣品中的生物標(biāo)志物水平與參考值比較；
[0083] 其中樣品中的生物標(biāo)志物水平與參考值相比，指示發(fā)展代謝障礙或心血管障礙的 風(fēng)險。
[0084] 在一個實施方案中，心血管障礙是動脈粥樣硬化或冠心病。
[0085] 在另一個實施方案中，代謝障礙是空腹血糖受損、胰島素抵抗或糖尿病。
【附圖說明】
[0086] 圖1是用于預(yù)測心外膜脂肪、胰島素抵抗和內(nèi)臟脂肪含量的相關(guān)變量的匯總。圖 例:EF為心外膜脂肪;Η0ΜΑ為H0MA-IR; R2為內(nèi)臟脂肪含量。表中列出了代謝物在預(yù)測心外膜 脂肪、內(nèi)臟脂肪和H0MA-IR方面的重要性和穩(wěn)健性(采用隨機森林分析法評估）。11=10000之 后隨機森林分析法產(chǎn)生的合并平均值的精度降低。
【具體實施方式】
[0087] 預(yù)測受試對象中EAT水平
[0088] 本發(fā)明一方面涉及預(yù)測受試對象心外膜脂肪組織(EAT)水平的方法。在特定實施 方案中，該方法可用于診斷不健康的EAT水平、監(jiān)測一段時間內(nèi)EAT的水平，或識別有患上與 EAT相關(guān)疾病的風(fēng)險的受試對象。
[0089] 例如，該方法可用于預(yù)測受試對象患有或染上與EAT相關(guān)疾病的可能性，或評估受 試對象當(dāng)前的EAT水平。該方法也可用于評估干預(yù)方案促進調(diào)節(jié)(特別是降低)EAT水平的功 效。例如，本發(fā)明可用于監(jiān)測改變生活方式或改變飲食的效果。
[0090] 與EAT水平升高相關(guān)聯(lián)的典型疾病是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，包括心血管障礙和 代謝障礙。
[0091] 與EAT相關(guān)聯(lián)的典型障礙包括動脈粥樣硬化、冠心病、代謝綜合征、空腹血糖受損、 胰島素抵抗、高血壓和糖尿病。
[0092] 受試對象
[0093] 本發(fā)明的方法可應(yīng)用于任何受試對象，包括非人類或人類受試對象。在一個實施 方案中，受試對象是哺乳動物，優(yōu)選人。或者，受試對象可以是非人類的哺乳動物，包括例如 馬、牛、羊或豬。在一個實施方案中，受試對象是伴侶動物如狗或貓。
[0094] 晝顯
[0095] 本發(fā)明的方法包括測定取自受試對象的樣品中的一種或多種脂質(zhì)生物標(biāo)志物的 水平這一步驟。因此，本發(fā)明的方法通常在人或動物的身體外部實施，例如，使用先前從待 檢測受試對象取得的體液樣品實施。樣品優(yōu)選地來源于血液，也就是說，樣品包括全血或血 液的成分。最優(yōu)選地，樣品包含血漿或血清。
[0096]收集血液樣品和分離血液成分的技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，可使用針從患 者采集靜脈血液樣品并收集入塑料管。收集管可(例如)包含噴涂的硅膠和聚合物凝膠，用 于分離血清?？稍谑覝叵乱?300RCF離心分離血清10分鐘，然后存放在小塑料管內(nèi)，-80 °C保 存。 _7] 測定樣品中脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平
[0098] 樣品中單獨脂質(zhì)種類的水平可通過任何合適的方法測量或測定。例如，可使用質(zhì) 譜法(MS)?？稍谔娲鷮嵤┓桨钢惺褂闷渌墓庾V方法、色譜方法、標(biāo)記技術(shù)或定量化學(xué)方 法。最優(yōu)選的是，用質(zhì)譜法(特別是鳥槍質(zhì)譜法)測量樣品中的脂質(zhì)水平。通常使用同一種分 析方法測定樣品中的脂質(zhì)水平和參考值。
[0099] ||M
[0100] 本發(fā)明的方法包括測定脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平，所述脂質(zhì)生物標(biāo)志物選自磷脂酰 膽堿(PC)、甘油二酯(DAG)、磷脂酰乙醇胺-醚(ΡΕ-0)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰甘油(PG)。 [0101 ]所述方法包括測量至少一種生物標(biāo)志物的水平。通過合并測量生物標(biāo)志物，可用 脂質(zhì)生物標(biāo)志物更好地表征EAT。
[0102] 磷脂酰膽堿
[0103] 在一個實施方案中，測定了結(jié)構(gòu)為PC[ 16:1/16:1 ]和/或PC[ 18:0/22: 5]的磷脂酰 膽堿(PC)的水平。在命名法(X:Y)中，X指分子中脂肪酸部分的碳原子總數(shù)，Y指分子中脂肪 酸部分的雙鍵總數(shù)。命名法(XI :Υ1/Χ2:Υ2)指的是PC種類的第一（1)脂肪酸鏈和第二(2)月旨 肪酸鏈中的碳原子數(shù)(X)和雙鍵數(shù)(Y)。因此，PC(18:0/22:5)的第一脂肪酸鏈包含18個碳原 子且不含雙鍵，第二脂肪酸鏈包含22個碳原子和5個雙鍵。
[0104] 甘油二酯
[0105] 在一個實施方案中，測定了結(jié)構(gòu)為[42:8](使用上文定義的(X:Y)命名法）的甘油 二酯(DAG)的水平。
[0106] 磷脂酰乙醇胺-醚
[0107] 在一個實施方案中，測定了結(jié)構(gòu)為[32:5](用上文定義的(Χ:Υ)命名法）的磷脂酰 乙醇胺-醚(PE-Ο)的水平。
[0108] 磷脂酰肌醇
[0109] 在一個實施方案中，測定了結(jié)構(gòu)為[18:0/16:1](用上文定義的(Χ:Υ)命名法)的磷 脂酰肌醇(ΡΙ)的水平。
[0110] 磷脂酰甘油 在一個實施方案中，測定了結(jié)構(gòu)為[20:3/20:3]和/或[22:5/18:1](用上文定義的 (Χ:Υ)命名法）的磷脂酰甘油(PG)的水平。
[0112] 生物標(biāo)志物的組合
[0113] 雖然各種脂質(zhì)生物標(biāo)志物在本發(fā)明的方法中可具有預(yù)測值，但可通過合并多個脂 質(zhì)生物標(biāo)志物的值來提高本發(fā)明方法的質(zhì)量和/或預(yù)測能力。
[0114] 因此，本發(fā)明的方法可包括測定至少兩種上文定義的脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平。例 如，本發(fā)明的方法可包括測定上述2、3、4、5、6或7種脂質(zhì)種類的水平。
[0115] 特別優(yōu)選的是檢測包括PC[16:l/16:l]、DAG[42 :8]和PE-0[32:5]的組合的方法。
[0116] 同對照比較
[0117] 本發(fā)明的方法還包括將試驗樣品中單獨脂質(zhì)種類的水平與一個或多個參考值或 對照值比較這一步驟。通常對于本發(fā)明方法所測定的每個單獨的脂質(zhì)種類使用一個特定的 參考值。參考值可以是某脂質(zhì)種類的正常水平，例如，取自正常受試對象的同一類型樣品 (如血清或血漿)的脂質(zhì)水平。參考值可(例如)基于受試對象對照群體中某脂質(zhì)種類的平均 值或中值水平，所述受試對象對照群體包含(例如）5、10、100、1000個或更多個正常受試對 象(可與試驗受試對象的年齡和/或性別匹配或不匹配）。
[0118] 受試對象的脂質(zhì)生物標(biāo)志物水平與相應(yīng)參考值的差異程度，也有助于確定哪類受 試對象將從特定干預(yù)方案受益最多。試驗樣品中脂質(zhì)的水平與參考值相比，可增大或減小 (例如）至少1 %、至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少50%或至少100%。
[0119] 在某些實施方案中，參考值是先前從同一受試對象獲得的值。這允許直接比較受 試對象當(dāng)前生活方式與之前生活方式對與EAT相關(guān)聯(lián)的脂質(zhì)生物標(biāo)志物水平的影響，所以 可直接評估多方面的改善。
[0120] 參考值可通過使用相應(yīng)的方法測定試驗樣品（例如，一個或多個取自正常受試對 象的樣品）中的脂質(zhì)水平來測定。例如，在某些實施方案中，對照樣品中的脂質(zhì)水平可在與 試驗樣品平行的測定法中確定?；蛘撸谀承嵤┓桨钢?，特定類型樣品（如血清或血漿）中 單獨脂質(zhì)種類的水平的參考值可能是現(xiàn)成的，例如可從已公布的研究數(shù)據(jù)獲得。因此在某 些實施方案中，參考值可能已預(yù)先確定，或可計算得出或外推得到，不必通過對與每一個試 驗樣品相關(guān)的對照樣品執(zhí)行對應(yīng)的測定來獲得。
[0121] 將脂質(zhì)水平與EAT關(guān)聯(lián)
[0122] 通常情況下，試驗樣品中上述脂質(zhì)種類的水平相比參考值增大或減小，可指示EAT 水平較高或較低。EAT的總體水平和/或與EAT相關(guān)聯(lián)的疾病的風(fēng)險可通過測定上述不同脂 質(zhì)生物標(biāo)志物的水平來評估。例如，受試對象可依據(jù)單獨脂質(zhì)種類的數(shù)量，按EAT水平預(yù)測 值被劃分為低、中、高和/或非常高這些級別，其中單獨脂質(zhì)種類被相對于對照值和/或其升 高的程度進行調(diào)節(jié)。
[0123] 或者，受試對象可依據(jù)單獨脂質(zhì)種類的數(shù)量，按患上與EAT相關(guān)聯(lián)疾病的風(fēng)險被劃 分為低、中、高和/或非常高這些組，其中單獨脂質(zhì)種類被相對于對照值和/或其升高的程度 進行調(diào)節(jié)。
[0124] 促進EAT保持健康水平的方法
[0125] 在一方面，本發(fā)明提供了一種調(diào)節(jié)受試對象中EAT水平的方法。該方法尤其可用于 降低受試對象患上EAT相關(guān)病癥或疾病的風(fēng)險，或延長受試對象的壽命。
[0126] 該方法的第一步為通過上述方法確定受試對象中EAT水平不健康的可能性。確定 受試對象中EAT水平不健康的可能性之后，可基于評估的風(fēng)險水平，為受試對象選擇適當(dāng)?shù)?干預(yù)策略(例如改變生活方式和/或飲食）。
[0127] 通常情況下，如果預(yù)測受試對象的EAT水平低，則可能不必要加以干預(yù)。例如，如果 受試對象的預(yù)測EAT水平等于或低于閾值水平，則可能不需要藥物或營養(yǎng)治療。閾值水平可 對應(yīng)(例如)普通群體的正常或平均EAT水平。
[0128] 或者，如果預(yù)測受試對象的EAT水平高，該方法還可包括改變受試對象的生活方式 這一步驟。受試對象生活方式的改變可以是本文描述的任何變化，例如，飲食改變、運動量 增大、工作和/或生活環(huán)境改變，等等。
[0129] 優(yōu)選地，所述改變是使用至少一種營養(yǎng)產(chǎn)品實現(xiàn)的，受試對象之前未攝入過該營 養(yǎng)產(chǎn)品或之前攝入該營養(yǎng)產(chǎn)品的量與當(dāng)前不同，所述營養(yǎng)產(chǎn)品例如有影響EAT水平的效果 并且/或者有避免EAT相關(guān)障礙的效果(包括食物產(chǎn)品、飲品、寵物食物產(chǎn)品、食物補充劑、保 健營養(yǎng)品、食物添加劑或營養(yǎng)配方產(chǎn)品）。在特別優(yōu)選的實施方案中，飲食改變包括脂肪攝 入水平降低。
[0130] 改變受試對象的生活方式還包括向受試對象指明其需要改變生活方式，例如，囑 咐、督促和/或建議受試對象作出上述的生活方式改變。例如，該方法可包括向受試對象施 用或提供至少一種上述營養(yǎng)產(chǎn)品的步驟。
[0131] 選擇的生活方式改變要能有效調(diào)節(jié)與EAT相關(guān)聯(lián)的特定脂質(zhì)種類的水平。一般情 況下，由于各種各樣的因素比如遺傳變異和環(huán)境因素，不同的生活方式改變(例如服用個人 營養(yǎng)產(chǎn)品）可能對受試對象個體的單獨脂質(zhì)種類的分布產(chǎn)生不同影響。
[0132] 生活方式的改變可為受試對象量身定制，從而將監(jiān)測脂質(zhì)水平與有針對性地調(diào)節(jié) 受試對象中單獨脂質(zhì)種類的特定方案結(jié)合起來。例如，該方法可包括進一步(重新)測定受 試對象中的脂質(zhì)水平(也就是在最初的生活方式或飲食調(diào)節(jié)干預(yù)之后），以評估治療方案的 效果。例如，如果受試對象在初步干預(yù)階段之后顯示EAT水平降低，則可繼續(xù)干預(yù)，以保持這 種降低的趨勢。
[0133] 然而，如果受試對象未能充分響應(yīng)初始干預(yù)(例如，特定的脂質(zhì)水平未出現(xiàn)明顯變 化），則可為該受試對象選擇替代方案，例如不同的生活方式改變、飲食或營養(yǎng)制劑。例如， 如果受試對象對最初的營養(yǎng)療法響應(yīng)不佳，則可向該受試對象施用替代的營養(yǎng)產(chǎn)品?？芍?復(fù)該方法，包括選擇不同劑量的各種制劑，直到EAT水平發(fā)生期望的改變?yōu)橹埂ＭǔＧ闆r下， 可用特定的療法(如上文定義的營養(yǎng)制劑)持續(xù)治療受試對象至少一周、兩周、一個月或三 個月，再重復(fù)測定脂質(zhì)水平。該方法可用于監(jiān)測生活方式改變(例如飲食、運動量、吸煙、飲 酒等方面的改變)對與EAT相關(guān)聯(lián)的脂質(zhì)水平的影響，還可用于識別可有效調(diào)節(jié)EAT水平的 因素組合。
[0134] 在另一方面，本發(fā)明提供了一種如上文所定義的營養(yǎng)制劑(例如，選自食物產(chǎn)品、 飲品、寵物食物產(chǎn)品、食物、保健營養(yǎng)品、食物添加劑或營養(yǎng)配方產(chǎn)品），該營養(yǎng)制劑用于調(diào) 節(jié)受試對象中EAT水平(或預(yù)防或治療與EAT相關(guān)聯(lián)的疾病），其中受試對象中不健康的EAT 水平已由上述方法預(yù)測。
[0135] 在另一方面，本發(fā)明涉及使用如上文所定義的營養(yǎng)制劑，來制造用于調(diào)節(jié)受試對 象中EAT水平(或預(yù)防或治療與EAT相關(guān)聯(lián)的疾?。┑乃幬?，其中受試對象中不健康的EAT水 平已由上述方法預(yù)測。
[0136] 試劑盒
[0137] 在另一方面，本發(fā)明提供了一種預(yù)測受試對象中EAT水平的試劑盒。該試劑盒可 (例如)包含一種或多種試劑、標(biāo)準(zhǔn)品和/或?qū)φ諛悠?，以用于本文所述的方法。舉例來說，在 一個實施方案中，該試劑盒包含一種或多種參考樣品和試劑盒使用說明，所述參考樣品包 含預(yù)定水平的（i)PC[16:l/16:l]、（ii)DAG[42:8]、（iii)PE-0[32:5]、（iv)PPC[18:0/22: 5]、（￥汗1[18 :0/16:1]、（￥1汗6[20:3/20:3]和/或(￥^汗6[22 :5/18:1]，使用說明指示了預(yù) 測受試對象中EAT的方法，即把參考樣品的預(yù)定水平與取自受試對象的樣品的脂質(zhì)水平比 較。
[0138] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在不脫離本文所公開的本發(fā)明范圍的前提下，他們可以 自由地組合本文所述的本發(fā)明的所有特征?，F(xiàn)在結(jié)合下列具體實施方案，僅以舉例的方式 對本發(fā)明進行描述。
[0139] 實施例
[0140] 實施例1-材料和方法
[0141] 參與者和實驗設(shè)計。
[0142] 在收到瑞士洛桑大學(xué)醫(yī)學(xué)院(CHUV)適當(dāng)倫理審查委員會的知情同意書之后，我們 觀察研究了CHUV肥胖門診的40名健康的肥胖白人婦女。參與者的BMI (身體質(zhì)量指數(shù))在28 至40之間，年齡在25歲至45歲之間，未表現(xiàn)代謝疾病特征。額外的排除標(biāo)準(zhǔn)是患有糖尿病、 懷孕、開始研究前一個月內(nèi)接受過抗生素治療、在訪視日前一周的磨合期內(nèi)接受過任何治 療(避孕除外），以及進食障礙。在過去3個月內(nèi)減重超過3公斤的受試對象也被排除。受試對 象都未患有下列疾病：高血壓、葡萄糖耐受不良、多囊卵巢綜合征、甲狀腺功能不全和腎上 腺障礙。基線（V0)時，受試對象接受標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療訪視，此時收集隔夜空腹血漿樣品。一周后 (VI )，用CT(在CHUV)和iDXA(瑞士洛桑雀巢研究中心（Nestl^Research Center，Lausanne， Switzerland)代謝科室)檢測身體組成，通過間接測熱法測量了靜息時能量消耗，并進行了 標(biāo)準(zhǔn)的口服葡萄糖耐量試驗(〇GTT，75g葡萄糖）。一周后(V2)，收集隔夜空腹血漿和24小時 的尿樣，對其進行代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)分析。
[0143] 化學(xué)物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)品
[0144] 乙醇、氯仿、異丙醇(HPLC級）購自Biosolve公司（荷蘭范肯斯沃德(Valkenswaard, the Netherlands))。甲醇、水和醋酸銨購自默克公司（Merck)(德國達姆施塔特 (Darmstadt,Germany))。合成的脂質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品購自Avanti Polar Lipids公司，純度高于 99%。用甲醇制備單獨脂質(zhì)化合物的儲備溶液，制好后在-20°C下儲存。用異丙醇/甲醇/氯 仿的4:2:1 (體積比）溶液稀釋儲備溶液，制備所需濃度的工作溶液。
[0145] 臨床測量、人體測量與身體組成測量
[0146] 這些參數(shù)按之前報道的方式測量(Martin et al. (2013))。簡言之，臨床測量和人 體測量(體重、身高、腰圍、臀圍）依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的臨床操作規(guī)范進行。執(zhí)行全身掃描，來確定腹部 脂肪分布和整個身體的組成。全身掃描采用GE Lunar iDXA系統(tǒng)（軟件版本：enCORE 12.10.113版)執(zhí)行，由設(shè)備自動確定掃描模式，使用之前報道過的程序(Martin et al. (2013))。
[0147] 使用64層螺旋CT掃描儀(VCT Lightspeed，美國密爾沃基通用電氣醫(yī)療系統(tǒng)(GE Medical Systems，Milwaukee，USA))對腹部區(qū)域進行CT掃描，用測量結(jié)果來量化腹膜內(nèi)脂 肪和皮下脂肪，如此前所述(Martin et al.(2013))。受試對象以仰臥位平躺，雙臂舉過頭 頂，用墊子墊高雙腿。在脊椎L4-L5位置單次掃描（10_)腹部，分析脂肪組織的橫截面積，用 平方厘米表示。使用下列采集參數(shù)：120Kv，100至200mA，帶Z軸劑量調(diào)制，視野500mm。使用標(biāo) 準(zhǔn)內(nèi)核重建5mm層面厚度的軸向斷層圖像。該量化過程以Advantage Window工作站(通用電 氣醫(yī)療系統(tǒng)(GE Medical Systems))為載體，采用市售的半交互式算法，分割皮下脂肪和腹 內(nèi)脂肪。使用Deltatrak II(Datex Instruments公司），通過開路間接測熱法測量靜息代謝 率。
[0148] 進一步CT掃描心包內(nèi)脂肪、心包外脂肪和縱隔脂肪，由40名受試對象中的28名產(chǎn) 生了高分辨率心臟脂肪沉積圖像。
[0149] 鳥槍脂質(zhì)組學(xué)分析
[0150]我們自行開發(fā)了一種全自動的高通量液/液萃取法，該方法利用漢密爾頓 Microlabstar機器人(瑞士博納杜茨漢密爾頓公司（Hamilton，Bonaduz，Switzerland))，用 于脂質(zhì)組學(xué)提取，是對之前的方法稍作修改得到的（之前的方法參見Matyash et al.， (2008)J Lipid Res 49:1137-1146(Matyash 等人，2008 年，《脂質(zhì)研究雜志》第 49 卷，第 1137-1146頁））。在3小時內(nèi)提取了96份樣品。簡言之，用5yL血清來清理樣品。使用700yL MTBE/Me0H(10/3)來提取脂質(zhì)，該MTBE/MeOH溶液含有的內(nèi)標(biāo)為下列物質(zhì)的混合物:5μΜ TAG 44:1、0.5μΜ DAG 24:0、5μΜ PC 28:0、1μΜ LPC 14:0、1μΜ ΡΕ 28:0、0.5μΜ LPE 14:0、1μΜ PS 28:0、0·5μΜ LPS 17:1、1μΜ PI 32:0、0·5μΜ LPI 17:1、0·5μΜ PA 28:0、0·5μΜ LPA 14: 0、1μΜ PG 28:0、0·5μΜ LPG 14:0、2μΜ SM 35:1、1μΜ Cer 32:1。4。(：下渦旋混合樣品 1 小時， 然后添加150yL水，引起相分離。5，000g離心10分鐘后，取500yL上層有機相轉(zhuǎn)移到96孔深孔 板(德國漢堡艾本德公司（Eppendorf，Hamburg，Germany))內(nèi)，用錯箱密封好，-20°C保存，分 析時取出。MS分析之前，取10yL總脂質(zhì)提取物，最后用90yL包含7.5mM醋酸銨的MS運行緩沖 液(異丙醇/甲醇/氯仿，體積比4:2:1)稀釋。
[0151]基于之前發(fā)表的研究成果（Schuhmann et al ·，（2012)J Mass Spectrom 47:96-104(Schuhmann等人，2012年，《質(zhì)譜雜志》第47卷，第96-104頁）；Schuhmann et al · (2011) Anal Chem 83:5480-5487(Schuhmann等人，2011年，《分析化學(xué)》第83卷，第5480-5487頁））， 自行開發(fā)了鳥槍脂質(zhì)組學(xué)方法。采用連接到Nanomate納升注入(nanoinfusion)離子源（英 國艾塞克斯哈洛鎮(zhèn)Advion生物科學(xué)股份有限公司（Advion Bioscience Ltd,Harlow, Essex，UK))的LTQOrbitrapVelos質(zhì)譜系統(tǒng)（瑞士賴納赫賽默飛世爾科技公司（The;rmo Fisher Scientific，Reinach,Switzerland))進行分析。對于每份樣品提取物，連續(xù)進樣兩 次，分別采用負離子化模式和正離子化模式分析。在DDA模式下采集質(zhì)心高能碰撞解離 (HCD)負MS/MS。每個DDA周期包括一個MS全譜圖，該譜圖以100，000的目標(biāo)分辨率R m/Z4〇o采 集，然后以30，000的分辨率Rm/Z4QQ采集20個Η⑶FT MS/MS譜圖。一次DDA實驗在25分鐘內(nèi)完 成。前體離子只有在其m/z與預(yù)先編制的包含列表的質(zhì)量相匹配(精度為5ppm)的情況下，才 能被MS/MS檢測到。在正離子化模式下，以100，000的目標(biāo)分辨率R m/Z4QQ采集MS譜圖，不再進 行MS/MS實驗。激活鎖定質(zhì)量選項，使用LPA 17:0(m/z 424.492;負離子模式)和(118:1/17: 0Cer(m/z 551.528;正尚子模式)作為參考峰。
[0152]采用LipidXplorer，遵循Herzog及其同事開發(fā)的方案（Herzog et al · (2011)， Genome Biol 12:R8(Herzog等人，2011年，《基因組生物學(xué)》第12卷，第R8頁））鑒定脂質(zhì)種 類。然后導(dǎo)出數(shù)據(jù)，采用自行開發(fā)的軟件工具進一步處理。該程序合并了數(shù)據(jù)集，通過將被 分析物前體離子的豐度與提取前加標(biāo)的內(nèi)標(biāo)的豐度對比，生成了包含歸一化值（內(nèi)標(biāo)與被 分析物的比值)和絕對濃度的Exce 1輸出文件。
[0153]依據(jù)脂質(zhì)圖分類和命名系統(tǒng)(http://www. lipidmaps.org)，注釋了脂質(zhì):PC，磷脂 酰膽堿;PC-0，磷脂酰膽堿-醚;LPC，溶血磷脂酰膽堿;PE，磷脂酰乙醇胺;ΡΕ-0，磷脂酰乙醇 胺-醚;LPE，溶血磷脂酰乙醇胺;PS，磷脂酰絲氨酸;LPS，血磷脂酰絲氨酸;PI，磷脂酰肌醇； LPI，溶血磷脂酰肌醇;PG，磷脂酰甘油;Cer，神經(jīng)酰胺;SM，鞘磷脂;DAG，甘油二酯;TAG，甘油 三酯;PA，磷脂酸。通常，單獨脂質(zhì)種類注釋如下：[脂質(zhì)類別][碳原子總數(shù)]:[雙鍵總數(shù)]。
[0154] 化學(xué)計量
[0155] 化學(xué)計量分析使用軟件包SIMCA-P+(13.0版，瑞典烏默奧Umetrics AB公司 (Umetrics AB，U.melSweden))和自行開發(fā)的MATLAB程序(美國馬薩諸塞州納蒂克邁斯沃 克公司（1'116]\^11:11￥〇^8 111(3.，他1:;[01<:，]\^，1]3厶））進行。使用主成分分析（？〇厶）（￥〇1(13， Esbensen K,Geladi P(1987)Principal Component Analysis.Chemom Intell Lab Syst 2:37-52(Wold S、Esbensen K、Geladi P，1987年，"主成分分析"，《化學(xué)計量學(xué)和智能實驗 室系統(tǒng)》第2卷，第37-52頁））、潛結(jié)構(gòu)投影（PLS)(Wold S，Hellberg S，Lundstedt T， Sjostrom M(1987)PLS Modeling with Latent Variables in Two or More Dimensions.PLS Meeting,Frankfurt(ffold S、Hellberg S、Lundstedt T、Sjostrom M， 1987年，"用潛在變量進行二維或更高維PLS建模"，法蘭克福PLS會議））和潛結(jié)構(gòu)正交投影 (〇-PLS)(Trygg J，Wold S(2003)J Chemom 17:53-64(Trygg J、Wold S，2003年，《化學(xué)計量 雜志》第17卷，第53-64頁）），來研究心外膜和內(nèi)臟脂肪與脂質(zhì)組學(xué)分布之間的關(guān)系。使用7 倍交叉驗證來評估模型的有效性（Cloarec et al.(2005),Anal Chem 77:517-526 (Cloarec等人，2005年，《分析化學(xué)》第77卷，第517-526頁））。
[0156] 此外，通過隨機森林算法分析脂類組學(xué)數(shù)據(jù)，利用了"隨機森林(randomForest)" (RF?)軟件包（Liaw et al.，2002，R News 3:18-22(Liaw等人，2002年，R News第3卷，第 18-22頁））（設(shè)置500棵樹，以=5的樹分裂進行隨機變量采樣），并利用在RF?中實施的變量重要 性特征(精度/結(jié)點不純度的平均降低量)來測定與內(nèi)臟脂肪和心外膜脂肪的狀態(tài)關(guān)聯(lián)得更 好（由絕對值或體脂肪率評估)的變量。
[0157] 使用統(tǒng)計學(xué)計算軟件環(huán)境R計算了Spearman自相關(guān)矩陣，并使用軟件包Rgraphviz v. 1.32.0生成了相應(yīng)的圖形。還在R內(nèi)執(zhí)行了單變量顯著性檢驗，來驗證計量結(jié)果。
[0158] 實施例2
[0159] 研究了特定內(nèi)臟脂肪庫中的血漿脂質(zhì)組，及其內(nèi)部容納的信息。具體地講，基于磁 共振(MRI)和CT的現(xiàn)代成像技術(shù)可生成內(nèi)臟脂肪庫的準(zhǔn)確區(qū)域特異性量化，包括EAT(Wang et al.(2009)J Clin Endocrinol Metab 94:662-669(Wang等人，2009年，《臨床內(nèi)分泌與 代謝雜志》第94卷，第662-669頁））。在對健康的肥胖女性進行的同一同期群研究中，應(yīng)用鳥 槍脂質(zhì)組學(xué)方法來量化血漿脂質(zhì)的分布，并評估與特定體脂沉積相關(guān)的復(fù)合代謝特征，尤 其注重VA、EAT和胰島素抵抗。因此，本研究在內(nèi)臟肥胖的外形如何與健康肥胖女性的血漿 脂質(zhì)組建立不同關(guān)聯(lián)方面，提供了補充性和全新的見解。
[0160] 心外膜脂肪測量值、臨床參數(shù)與身體組成參數(shù)之間的關(guān)系
[0161]所述同期群的人體測量數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)記錄在表1和表2中。初始的PCA和 spearman相關(guān)分析表明，心包內(nèi)脂肪、縱隔脂肪和心外膜脂肪參數(shù)與下列諸項密切相關(guān):其 他內(nèi)臟脂肪估計值(例如，腹膜內(nèi)脂肪（IPVF)的Logio值(r = 0.56，p = 0.002;r = 0.65，p〈 0.001；r = 0.66,p<0.001),VAT/SAT(r = 0.49,p = 0.008；r = 0.50,p = 0.006；r = 0.40,p = 0 · 031)，VAT/腹部脂肪總量的比值(r = 0 · 49，p = 0.008 ;r = 0 · 49，p = 0 · 006 ;r = 0 · 39，p = 0.037)，BMI(r = 0.45，p = 0.016;r = 0.54，p = 0.003;r = 0.60，p〈0.001)，腹部脂肪（r = 0·39，p = 0.040;r = 0·51，p = 0.005;r = 0.56，p = 0.002)，皮下脂肪(r = 0·62，p〈0·001 ;r = 0.70印〈0.001# = 0.71印〈0.001)，以及脂肪總量（『=0.44印=0.019# = 0.52印=0.004; r = 0.55，p = 0.002)，但與男性型/女性型脂肪不相關(guān)（圖1)。此外，縱隔脂肪和心包內(nèi)脂肪 與幾個瘦體質(zhì)參數(shù)相關(guān)聯(lián)。類似于其他內(nèi)臟脂肪估計值，心包內(nèi)脂肪和縱隔脂肪與下列諸 項密切相關(guān):ALAT(r = 0 · 38，p = 0 · 045 ;r = 0 · 42，p = 0 · 025)，ALAT/ASAT比值(r = 0 · 49，p = 0.007# = 0.56，？ = 0.002)，血液甘油三酯（1 = 0.48，？ = 0.009# = 0.45，？ = 0.016)。心外 膜脂肪主要與ALAT/ASAT比值相關(guān)聯(lián)(r = 0.47，p = 0.011)，然而所有的心臟脂肪參數(shù)與GGT 密切相關(guān)(r = 0.54，ρ = 0· 039; r = 0.57，p = 0.001 ;r = 0.47，ρ = 0· 011)。有趣的是，相比其 他內(nèi)臟脂肪估計值，在空腹或OGTT期間測得的心臟脂肪參數(shù)與葡萄糖和胰島素參數(shù)并沒有 統(tǒng)計相關(guān)性。比值Α和Β不依賴于大多數(shù)其他參數(shù)，只與BMI(r = 0.41，p = 0.028;r = 0.41，p =0.028)和心外膜脂肪(r = 0.42, p = 0.025; r = 0.42，p = 0.025)正相關(guān)，并與區(qū)域特異性 的骨量分布負相關(guān)(例如相對女性型骨量，r = -0.46，p = 0.015)。
[0162] 心外膜脂肪、內(nèi)臟脂肪含量和H0MA-IR同特定的血漿脂質(zhì)組成重構(gòu)相關(guān)聯(lián)
[0163] 使用經(jīng)過驗證的鳥槍脂質(zhì)組學(xué)方法表示40名受試對象的血漿脂質(zhì)組的特征，得到 14種不同類別脂質(zhì)中的252種脂質(zhì)種類的相對定量值。分析對象涵蓋甘油三酯TG(n = 50)、 甘油二酯DAG(n = 18)、鞘磷脂SM(n = 24)、神經(jīng)酰胺Cer(n = 17)、磷脂酰肌醇PI(n=12)、溶 血磷脂酰肌醇LPI(n = 2)、磷脂酰甘油PG(n = 6)、磷脂酰乙醇胺PE(n = 23)、磷脂酰乙醇胺-醚PE-0(n=15)、溶血磷脂酰乙醇胺 LPE(n = 4)、磷脂酰膽堿PC(n = 45)、磷脂酰膽堿-醚PC-0 (n = 29)、溶血磷脂酰膽堿LPC(n = 6)和磷脂酸PA(n = l)。
[0164] 通過0PLS分析法，使用1個預(yù)測分量和1個正交分量生成了三個模型，分別為內(nèi)臟 脂肪模型(VAT/腹部脂肪的l〇g 1Q比值，的=0.16，的=0.87,0吟=0.59)、心外膜脂肪模型 (1^( = 0.32，1?2￥ = 0.81，02￥ = 0.59，圖2)、!1〇嫩-1財莫型（1^( = 0.32，1?2￥ = 0.55,02￥ = 0.21)。
[0165] 使用Volcano繪圖法，基于VIP和相關(guān)系數(shù)值，研究了影響變量。與此同時，使用在 RF?中實施的變量重要性特征，可測定與內(nèi)臟脂肪、H0MA-IR和心外膜脂肪最佳關(guān)聯(lián)的代謝 讀出值。
[0166] EAT的代謝特征示于表3。此外，表3總結(jié)了以RF?指標(biāo)為基礎(chǔ)，就VA、EAT和H0A-IR而 言的各影響變量的相似性和差異性。
[0167] 最可判別的變量是PC[16:1/16:1]、DAG[42:8]、PE-0[32:5]。根據(jù)這些分析，我們 可以定義 PC[16:1/16:1]、DAG[42:8]、PE-0[32:5]、PC[18:0/22:5]、PI[18:0/16:1]、PG[20: 3/20:3]和PG[22:5/18:1]。
[0168] 表1:受試對象的描述性身體組成

[0170]^關(guān)鍵詞：SAT =皮下脂肪組織，VAT=內(nèi)臟脂肪組織。
[0171]表2:受試對象的描述性人體測量參數(shù)與臨床參數(shù)
[0173]關(guān)鍵詞：BMI =身體質(zhì)量指數(shù)，HDL-C =高密度脂蛋白膽固醇，H0MA-IR =胰島素抵 抗穩(wěn)態(tài)模型評估法，LDL-C =低密度脂蛋白膽固醇，TG =甘油三酯，MAP =平均動脈血壓， ALAT =丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，ASAT =天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶，GGT= γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶，0GTT= 口服葡萄糖 耐量試驗。
[0174] 表3代謝物在預(yù)測EAT、VAT和H0MA-IR方面的重要性和穩(wěn)健性(采用隨機森林分析 法評估）
[0177]圖例:報告的數(shù)值與n = 10000之后隨機森林分析法產(chǎn)生的合并平均值的精度降低 相對應(yīng)。變量的重要性越高，合并平均值精度下降的值越大。
【主權(quán)項】
1. 用于預(yù)測受試對象心外膜脂肪組織(EAT)水平的方法，包括： (a) 測定取自所述受試對象的樣品中的一種或多種脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平，其中所述 生物標(biāo)志物選自以下物質(zhì)： (i) 磷脂酰膽堿(PC)[16:1/16:1] (ii) 甘油二酯(DAG)[42:8] (i i i)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0) [ 32:5 ] (i v)磷脂酰膽堿(PC) [ 18:0/22:5 ] (v) 磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1] (vi) 磷脂酰甘油（PG) [20:3/20:3] (vii) 磷脂酰甘油(PG) [22:5/18:1] (b) 將所述樣品中的所述生物標(biāo)志物的水平與參考值比較； 其中所述樣品中的所述生物標(biāo)志物的水平與所述參考值相比，指示了所述受試對象中 EAT的水平。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，包括測定取自所述受試對象的所述樣品中的一種或多 種脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平，所述生物標(biāo)志物選自以下物質(zhì)： (i) PC[16:l/16:l] (ii) DAG[42:8] (iii) PE-0[32:5]。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，包括測定取自所述受試對象的所述樣品中的兩種或更 多種脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水平，所述生物標(biāo)志物選自以下物質(zhì)： (i) PC[16:l/16:l] (ii) DAG[42:8] (iii) PE-0[32:5]。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，包括測定取自所述受試對象的所述樣品中的下列每一 種的水平： (i) PC[16:l/16:l] (ii) DAG[42:8] (iii) PE-0[32:5]。5. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中測定了 PC[16:1/16:1]的水平，并且取自 所述受試對象的所述樣品中的PC[ 16:1/16:1 ]的水平相比所述參考樣品降低，指示EAT水平 較高。6. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中測定了 DAG[42:8]的水平，并且取自所述 受試對象的所述樣品中的DAG[42:8]的水平相比所述參考樣品升高，指示EAT水平較高。7. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中測定了 PE-0[32:5]的水平，并且取自所 述受試對象的所述樣品中的PE-〇[ 32:5]的水平相比所述參考樣品升高，指示EAT水平較高。8. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中： 測定了PC[ 18:0/22:5]的水平，并且取自所述受試對象的所述樣品中的PC[ 18:0/22:5] 的水平相比所述參考樣品升高，指示EAT水平較高，和/或 測定了PC[ 20:3/20:3 ]的水平，并且取自所述受試對象的所述樣品中的PC[ 20:3/20:3 ] 的水平相比所述參考樣品升高，指示EAT水平較高，和/或 測定了 PG[22:5/18:1 ]的水平，并且取自所述受試對象的所述樣品中的PG[22:5/18:1 ] 的水平相比所述參考樣品升高，指示EAT水平較高，和/或 測定了 PG[22:5/18:1 ]的水平，并且取自所述受試對象的所述樣品中的PG[22:5/18:1 ] 的水平相比所述參考樣品升高，指示EAT水平較高。9. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述樣品包括取自所述受試對象的血清 或血漿。10. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述參考值基于受試對象對照群體的 所述生物標(biāo)志物的平均水平。11. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述生物標(biāo)志物的水平是通過質(zhì)譜法 測定的。12. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述生物標(biāo)志物的水平是通過鳥槍脂 質(zhì)組學(xué)方法測定的。13. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述樣品中的所述生物標(biāo)志物的水平 與所述參考值相比，指示發(fā)展心血管障礙或代謝障礙的風(fēng)險。14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述心血管障礙是冠狀動脈疾病。15. 用于調(diào)節(jié)受試對象心外膜脂肪組織(EAT)水平的方法，包括： 如果此前使用前述任一項權(quán)利要求所述的方法已確定所述受試對象具有指示EAT水平 不健康的所述生物標(biāo)志物的水平，則改變所述受試對象的生活方式，從而調(diào)節(jié)EAT水平。16. 用于調(diào)節(jié)受試對象心外膜脂肪組織(EAT)水平的方法，包括： (a) 執(zhí)行權(quán)利要求1至14中任一項所述的方法；以及 (b) 如果所述受試對象具有指示EAT水平不健康的所述生物標(biāo)志物的水平，則改變所述 受試對象的生活方式，從而調(diào)節(jié)EAT水平。17. 用于選擇受試對象的生活方式的改變從而調(diào)節(jié)所述受試對象的心外膜脂肪組織 (EAT)水平的方法，所述方法包括： (a) 執(zhí)行權(quán)利要求1至14中任一項所述的方法， (b) 根據(jù)步驟(a)測定的生物標(biāo)志物水平，選擇生活方式的適當(dāng)改變。18. 根據(jù)權(quán)利要求15至17中任一項所述的方法，其中調(diào)節(jié)EAT水平包括降低EAT水平。19. 根據(jù)權(quán)利要求15至18中任一項所述的方法，其中所述受試對象的所述生活方式的 改變包括飲食改變。20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述飲食改變包括向所述受試對象施用至少一 種營養(yǎng)產(chǎn)品，所述營養(yǎng)產(chǎn)品是防止EAT增多的飲食的一部分。21. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述飲食改變包括向所述受試對象施用至少一 種營養(yǎng)產(chǎn)品，所述營養(yǎng)產(chǎn)品是促使EAT減少的飲食的一部分。22. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述飲食改變包括減少脂肪攝入。23. 根據(jù)權(quán)利要求16至22中任一項所述的方法，還包括在改變所述受試對象的所述生 活方式之后重復(fù)步驟(a)。24. 用于預(yù)測受試對象心外膜脂肪組織(EAT)水平的方法，包括： (a)使用檢測裝置測定取自所述受試對象的樣品中的一種或多種脂質(zhì)生物標(biāo)志物的水 平，其中所述生物標(biāo)志物選自以下物質(zhì)： (i) 磷脂酰膽堿(PC)[16:1/16:1] (ii) 甘油二酯(DAG)[42:8] (i i i)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0) [ 32:5 ] (i v)磷脂酰膽堿(PC) [ 18:0/22:5 ] (v) 磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1] (vi) 磷脂酰甘油（PG) [20:3/20:3] (vii) 磷脂酰甘油(PG) [22:5/18:1] 以及根據(jù)所述樣品中的所述生物標(biāo)志物相對所述參考值的水平，預(yù)測所述受試對象中 EAT的水平。
【文檔編號】G01N33/92GK105874335SQ201480072250
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2014年12月9日
【發(fā)明人】F·C·貝格蘭, S·科里諾, F-P·馬丁, I·蒙托柳魯拉, M·舍雷爾
【申請人】雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司