一種同時(shí)測定再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種同時(shí)測定再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，該方法包括：以甲醇?甲酸?水溶液作為萃取液，再造煙葉樣品經(jīng)超聲萃取后，提取液經(jīng)有機(jī)濾膜過濾，采用高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯8種防腐劑。本發(fā)明采用同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法定量避免了復(fù)雜混合物體系定量分離、純化的困難；以甲醇?甲酸?水溶液為樣品萃取溶劑，在保證提取效率的同時(shí)，還能夠減小樣品中有機(jī)雜質(zhì)進(jìn)入色譜柱中的量，并有效保護(hù)色譜柱；本方法分析速度快，重復(fù)性和回收率好，適用于工業(yè)中大批量樣品的分析。
【專利說明】
一種同時(shí)測定再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于理化檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及再造煙葉中8種防腐劑含量的測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著食品工業(yè)的發(fā)展，食品添加劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，防腐劑因具有殺死某些 微生物或抑制其生長的作用，可以防止食品霉變、腐爛，延長保質(zhì)期，因此被廣泛使用。脫氫 乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯均屬于防腐劑，長期過 量攝入會(huì)影響人體新陳代謝的平衡，對人體健康造成一定的損害?！禛B 2760-2014食品添加 劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中對這幾種防腐劑在食品中的最大使用量都進(jìn)行了限定，并出臺(tái)了相關(guān)的檢 測標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行監(jiān)控。
[0003] 再造煙葉在使用的過程中為了防止霉變，減少損失，也可能在其中加入了上述的 防腐劑，并通過卷煙燃吸過程進(jìn)入人體，對人體產(chǎn)生危害。但目前以再造煙葉為研究對象的 檢測方法未見公開報(bào)道，為保證卷煙的吸食安全性，建立再造煙葉中這8種防腐劑的分析方 法意義重大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明彌補(bǔ)了現(xiàn)有分析技術(shù)的不足，提供一種再造煙葉中8種防腐劑含量的測定 方法。
[0005] 本發(fā)明提供的同時(shí)測定再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法包括：以甲醇-甲酸-水 溶液作為萃取液，再造煙葉樣品經(jīng)超聲萃取后，提取液經(jīng)有機(jī)濾膜過濾，采用高效液相色 譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯 甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯8種防腐劑。
[0006] 本發(fā)明提供的一種再造煙葉中8種防腐劑含量的測定方法的優(yōu)選技術(shù)方案為：
[0007] ①配制甲醇-甲酸-水溶液作為萃取液；
[0008] ②配制內(nèi)標(biāo)溶液:稱取一定量水楊酸-d4，用甲醇-甲酸-水溶液配制濃度為8-2〇y g/mL的內(nèi)標(biāo)溶液；
[0009 ]③配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取一定量脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯甲 酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯，用甲醇-甲酸-水溶液 配制濃度為〇. 5-1.5yg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0010] ④樣品前處理:稱取再造煙葉樣品于三角瓶中，依次加入內(nèi)標(biāo)溶液和甲醇-甲酸-水溶液，超聲萃取，取上層清液經(jīng)有機(jī)濾膜過濾后，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定；
[0011] ⑤標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05ml、0. lmL、0.5mL、lmL、2mL、4mL、10mL，各 加入內(nèi)標(biāo)溶液30-80yL，用甲醇-甲酸-水溶液定容至50-100mL，搖勻，得7級(jí)工作標(biāo)準(zhǔn)溶液； 對上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行LC-MS/MS分析，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值對二者相應(yīng)的濃度 比值進(jìn)行線性回歸分析，求得8種防腐劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0012] ⑥數(shù)據(jù)處理與檢測：由組分峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量。
[0013] 本發(fā)明提供的一種再造煙葉中8種防腐劑含量的測定方法的更優(yōu)選技術(shù)方案為：
[0014] ①配制甲醇-甲酸-水溶液作為萃取液；
[0015] ②配制內(nèi)標(biāo)溶液:稱取一定量水楊酸-d4,用甲醇-甲酸-水溶液配制濃度為12. g/mL的內(nèi)標(biāo)溶液；
[0016]③配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取一定量脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯甲 酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯，用甲醇-甲酸-水溶液 配制濃度為1. 〇yg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0017] ④樣品前處理:稱取再造煙葉樣品于三角瓶中，依次加入內(nèi)標(biāo)溶液和甲醇-甲酸-水溶液，超聲萃取，取上層清液經(jīng)有機(jī)濾膜過濾后，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定；
[0018] ⑤標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05ml、0. lmL、0.5mL、lmL、2mL、4mL、10mL，各 加入內(nèi)標(biāo)溶液50yL，用甲醇-甲酸-水溶液定容至50mL，搖勻，得7級(jí)工作標(biāo)準(zhǔn)溶液;對上述系 列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行LC-MS/MS分析，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值對二者相應(yīng)的濃度比值進(jìn)行 線性回歸分析，求得8種防腐劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0019] ⑥數(shù)據(jù)處理與檢測：由組分峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量。
[0020] 進(jìn)一步地，所述甲醇-甲酸-水溶液的體積比為50-100:0.1-1.0:10-25，優(yōu)選80: 0 ? 1:19?9 〇
[0021] 進(jìn)一步地，在步驟④中，稱取的再造煙葉樣品量為0.5-5g，優(yōu)選l.Og。
[0022]進(jìn)一步地，在步驟④中，內(nèi)標(biāo)溶液和甲醇-甲酸-水溶液的加入量分別為30-100此 和 25-100mL;優(yōu)選 50yL 和 50mL。
[0023] 進(jìn)一步地，在步驟④中，超聲萃取的時(shí)間為10-60min，功率為100-500W;優(yōu)選超聲 萃取的時(shí)間為30min，功率為300W。
[0024] 進(jìn)一步地，在步驟④中，有機(jī)濾膜為1 ? 2-0 ? 22mi尼龍濾膜;優(yōu)選0 ? 22mi。
[0025] 更進(jìn)一步地，在步驟④和⑤中，高效液相色譜條件為:色譜柱為Athena C1-WP色譜 柱（150mm X 4.6mm，粒徑5mi);進(jìn)樣量5yL;柱溫為40°C ;流速為1. OmL/min，梯度洗脫程序?yàn)椋?br>[0027]更進(jìn)一步地，在步驟④和⑤中，質(zhì)譜條件為：質(zhì)譜檢測采用ESI離子源，在正、負(fù)離 子同時(shí)檢測方式下，選擇MRM工作模式進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，優(yōu)化后的主要質(zhì)譜條件為:霧化 氣50psi，輔助加熱氣50psi，氣簾氣lOpsi，干燥溫度600°C;各化合物的特征離子及參數(shù)分 析別為：
[0029] 本發(fā)明的有益效果是：
[0030] 本發(fā)明使用的儀器和設(shè)備均為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)分析設(shè)備，發(fā)明方法易于推廣，檢測成 本低；
[0031] 本發(fā)明采用同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法定量避免了復(fù)雜混合物體系定量分離、純化的困 難；
[0032] 本發(fā)明以甲醇-甲酸-水溶液為樣品萃取溶劑，在保證提取效率的同時(shí)，還能夠減 小樣品中有機(jī)雜質(zhì)進(jìn)入色譜柱中的量，并有效保護(hù)色譜柱；
[0033] 本發(fā)明首次提出了采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測定再造煙葉中8種防腐 劑的分析方法，方法分析速度快，重復(fù)性和回收率好，適用于工業(yè)中大批量樣品的分析。
【附圖說明】
[0034] 圖1是苯甲酸的提取離子流圖；
[0035] 圖2是脫氫乙酸的提取離子流圖；
[0036] 圖3是水楊酸的提取離子流圖；
[0037] 圖4是對羥基苯甲酸甲酯的提取離子流圖；
[0038] 圖5是對羥基苯甲酸乙酯的提取離子流圖；
[0039] 圖6是對羥基苯甲酸丙酯的提取離子流圖；
[0040] 圖7是對羥基苯甲酸丁酯的提取離子流圖；
[0041] 圖8是山梨酸的提取離子流圖；
[0042] 圖9是內(nèi)標(biāo)的提取離子流圖。
【具體實(shí)施方式】
[0043] 為便于更好的理解本發(fā)明，本發(fā)明結(jié)合具體的實(shí)施例進(jìn)一步說明：
[0044] 實(shí)施例1
[0045] 儀器與試劑、材料：美國AB SCIEX 5500LC-MS/MS;美國Agilent 1290HPLC;Athena C1-WP色譜柱（150mmX 4.6mm，粒徑5wn)，0.22WI1微孔過濾膜，超聲清洗器;超純水（18M Q )， 甲醇(色譜純，百靈威化學(xué)試劑公司）.
[0046] 萃取液的制備:配制甲醇-甲酸-水體的積比為80:0.1:19.9的溶液作為萃取液。
[0047]內(nèi)標(biāo)溶液的配制：稱取一定量水楊酸_d4,用甲醇-甲酸-水溶液配制濃度為12.5y g/mL的內(nèi)標(biāo)溶液；
[0048] 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:稱取一定量脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯甲 酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯，用甲醇-甲酸-水溶液 配制濃度為1. 〇yg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0049] 樣品前處理:稱取1.0g(精確至O.lmg)再造煙葉樣品于100mL具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確 加入50mL萃取液和50yL內(nèi)標(biāo)溶液，超聲萃取30min，靜置2min，取適量萃取液經(jīng)0.22_有機(jī) 相濾膜過濾，濾液置于色譜瓶中待測。
[0050]液相色譜分離條件和質(zhì)譜參數(shù) [0051 ]液相色譜條件
[0052] --色譜柱:Athena C1-WP色譜柱（150mmX4.6mm，粒徑5ym);
[0053] --流速：1 .OmL/min;
[0054] --柱溫：40°C;
[0055] --進(jìn)樣量：5yL;
[0056] 一一流動(dòng)相A: 0.1 %甲酸水溶液(體積分?jǐn)?shù)）；流動(dòng)相B:甲醇；
[0057] 一一梯度洗脫條件如表1所示。
[0058]表1梯度洗脫條件
[0060]質(zhì)譜條件
[0061 ] --掃描方式:正、負(fù)離子掃描；
[0062] 一一離子源：電噴霧電離源(ESI);
[0063] --檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);
[0064] --電噴霧電壓：5500V(ESI+)、4500V(ESI-);
[0065] 一一離子源溫度：600 r;
[0066] --離子對的駐留監(jiān)測時(shí)間（dwell time) :50ms;
[0067] --氣簾氣壓力：25Psi;
[0068] --霧化氣壓力：60Psi;
[0069] --輔助氣壓力：60Psi;
[0070] 一一分析物及內(nèi)標(biāo)的定量離子對、定性離子對等質(zhì)譜參數(shù)見表2。
[0071]表2 8種化合物及內(nèi)標(biāo)質(zhì)譜參數(shù)表
[0073] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05ml、0. lmL、0.5mL、lmL、2mL、4mL、lOmL，各加 入內(nèi)標(biāo)溶液50yL，用甲醇-甲酸-水溶液定容至50mL，搖勻，得7級(jí)工作標(biāo)準(zhǔn)溶液;對上述系列 標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行LC-MS/MS分析，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值對二者相應(yīng)的濃度比值進(jìn)行線 性回歸分析，求得8種防腐劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線;8種化合物的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和 定量限如表3所示。
[0074] 表3 8種化合物的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限
[0076]精密度:為了考察方法的精密度，以某再造煙葉樣品進(jìn)行5次日內(nèi)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測定 結(jié)果表明8種化合物日內(nèi)測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.82%~5.23%之間，表明方法的日 內(nèi)精密度良好。同時(shí)，對樣品進(jìn)行了 5天日間重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測定結(jié)果表明8種化合物日間測定結(jié) 果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.90 %~8.60 %之間，結(jié)果表明該方法的日間重復(fù)性良好。
[0077] 回收率:采用樣品加標(biāo)法對再造煙葉樣品在高、中、低三個(gè)含量水平上進(jìn)行了回收 率的測定，結(jié)果表明，8種化合物的平均回收率的結(jié)果在89.1 %-103.8 %之間，回收率較高， 滿足分析要求。
[0078] 實(shí)際樣品的測定:采用本發(fā)明建立的方法測定了 6個(gè)再造煙葉樣品中的8種防腐劑 (表4)。結(jié)果表明，6個(gè)樣品中均檢出脫氫乙酸、山梨酸、水楊酸、苯甲酸和對羥基苯甲酸乙 酯，2個(gè)樣品檢出對羥基苯甲酸甲酯，2個(gè)樣品檢出對羥基苯甲酸丙酯，含量范圍為0.05_ 18?15mg/kg〇
[0079] 表4再造煙葉樣品的檢測結(jié)果(mg/kg)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種同時(shí)測定再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于： 以甲醇-甲酸-水溶液作為萃取液，再造煙葉樣品經(jīng)超聲萃取后，提取液經(jīng)有機(jī)濾膜過 濾，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯 甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯8種防腐劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于該方法包括以 下步驟： ① 配制甲醇-甲酸-水溶液作為萃取液； ② 配制內(nèi)標(biāo)溶液:稱取一定量水楊酸_d4，用甲醇-甲酸-水溶液配制濃度為8-20yg/mL的 內(nèi)標(biāo)溶液； ③ 配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取一定量脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯甲酸甲 酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯，用甲醇-甲酸-水溶液配制 濃度為〇. 5-1.5yg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； ④ 樣品前處理:稱取再造煙葉樣品于三角瓶中，依次加入內(nèi)標(biāo)溶液和甲醇-甲酸-水溶 液，超聲萃取，取上層清液經(jīng)有機(jī)濾膜過濾后，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定； ⑤ 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05ml、O. ImL、0.5mL、ImL、2mL、4mL、IOmL，各加入 內(nèi)標(biāo)溶液30_80yL，用甲醇-甲酸-水溶液定容至50-100mL，搖勻，得7級(jí)工作標(biāo)準(zhǔn)溶液;對上 述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行LC-MS/MS分析，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值對二者相應(yīng)的濃度比值 進(jìn)行線性回歸分析，求得8種防腐劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線； ⑥ 數(shù)據(jù)處理與檢測：由組分峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于該方法包括以 下步驟： ① 配制甲醇-甲酸-水溶液作為萃取液； ② 配制內(nèi)標(biāo)溶液:稱取一定量水楊酸_d4，用萃取液配制濃度為12.5yg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液； ③ 配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取一定量脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯甲酸甲 酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯，用萃取液配制濃度為1.〇μ g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； ④ 樣品前處理:稱取再造煙葉樣品于三角瓶中，依次加入內(nèi)標(biāo)溶液和萃取液溶液，超聲 萃取，取上層清液經(jīng)有機(jī)濾膜過濾后，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定； ⑤ 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05ml、0.1 mL、0.5mL、ImL、2mL、4mL、IOmL，各加入 內(nèi)標(biāo)溶液50yL，用萃取液定容至50mL，搖勻，得7級(jí)工作標(biāo)準(zhǔn)溶液;對上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行 LC-MS/MS分析，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值對二者相應(yīng)的濃度比值進(jìn)行線性回歸分析， 求得8種防腐劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線； ⑥ 數(shù)據(jù)處理與檢測：由組分峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于所述甲醇-甲 酸-水溶液的體積比為50-100:0.1-1.0:10-25。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于所述甲醇-甲 酸-水溶液的體積比為80:0.1:19.9。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于:在步驟④中， 稱取的再造煙葉樣品量為〇.5-5g。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于:在步驟④中， 稱取的再造煙葉樣品量為l.Og。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于:在步驟④中， 內(nèi)標(biāo)溶液和甲醇-甲酸-水溶液的加入量分別為30-100yL和25-100mL。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于:在步驟④中， 內(nèi)標(biāo)溶液和萃取液的加入量分別為50yL和50mL。10. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于：在步驟④ 中，超聲萃取的時(shí)間為10-60min，功率為100-500W。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于:超聲萃取 的時(shí)間為30min，功率為300W。12. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于：在步驟④ 中，有機(jī)濾膜為1.2-0.22μπι尼龍濾膜。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于:在步驟④ 中，有機(jī)濾膜為〇. 22μπι尼龍濾膜。14. 根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于： 高效液相色譜條件為:色譜柱為Athena Cl-WP色譜柱，柱參數(shù)為150mmX 4.6_ X 5μπι;進(jìn)樣 量5yL;柱溫為40°C ;流速為1.0 mL/min，梯度洗脫程序?yàn)椋?5. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于：質(zhì)譜條件 為:質(zhì)譜檢測采用ESI離子源，在正、負(fù)離子同時(shí)檢測方式下，選擇MRM工作模式進(jìn)行二級(jí)質(zhì) 譜分析，優(yōu)化后的主要質(zhì)譜條件為:霧化氣50psi，輔助加熱氣50psi，氣簾氣lOpsi，干燥溫 度600°C ;各化合物的特征離子及參數(shù)分析別為：16.根據(jù)權(quán)利要求2所述的再造煙葉中8種防腐劑的檢測方法，其特征在于該方法包括 以下步驟： ① 配制甲醇-甲酸-水溶液作為萃取液； ② 配制內(nèi)標(biāo)溶液:稱取一定量水楊酸_d4，用萃取液配制濃度為12.5yg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液； ③ 配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取一定量脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯甲酸甲 酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯，用萃取液配制濃度為1.〇μ g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； ④ 樣品前處理:稱取再造煙葉樣品于三角瓶中，依次加入內(nèi)標(biāo)溶液和萃取液溶液，超聲 萃取，取上層清液經(jīng)有機(jī)濾膜過濾后，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定； ⑤ 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05ml、O. ImL、0.5mL、ImL、2mL、4mL、IOmL，各加入 內(nèi)標(biāo)溶液50yL，用萃取液定容至50mL，搖勻，得7級(jí)工作標(biāo)準(zhǔn)溶液;對上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行 LC-MS/MS分析，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值對二者相應(yīng)的濃度比值進(jìn)行線性回歸分析， 求得8種防腐劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線； ⑥ 數(shù)據(jù)處理與檢測：由組分峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量； 在步驟④中，稱取的再造煙葉樣品量為I.Og;所述甲醇-甲酸-水溶液的體積比為80: 0.1:19.9;內(nèi)標(biāo)溶液和甲醇-甲酸-水溶液的加入量分別為50yL和50mL;超聲萃取的時(shí)間為 30min，功率為300W;有機(jī)濾膜為0.22μπι尼龍濾膜； 所述高效液相色譜條件為:色譜柱為Athena Cl-WP色譜柱，柱參數(shù)為150_X 4.6_ X 5 μπι;進(jìn)樣量5yL;柱溫為40°C ;流速為1.0 mL/min，梯度洗脫程序?yàn)椋? 所述質(zhì)譜條件為：質(zhì)譜檢測采用ESI離子源，在正、負(fù)離子同時(shí)檢測方式下，選擇MRM工
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105891374SQ201610410467
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年6月13日
【發(fā)明人】范忠, 劉鴻, 李小蘭, 陳志燕, 周蕓, 潘玉靈, 曾德芬, 唐桂芳, 韋入丹, 陳瑤, 王清波
【申請人】廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司