一種基于Au-GQD@PtPd的免疫傳感器的制備方法及應用
【專利摘要】本發(fā)明屬于納米功能材料、免疫分析以及生物傳感技術領域，提供了一種基于Au?GQD@PtPd的免疫傳感器的制備方法及應用。具體是采用Au?GQD@PtPd作為檢測抗體標記物，制備一種癌胚抗原的夾心型電化學免疫傳感器，利用Au?GQD@PtPd優(yōu)異的生物相容性和高的催化性能，使所制作的傳感器具有特異性強，靈敏度高和檢出限低等優(yōu)點。
【專利說明】
一種基于Au-GQD@PtPd的免疫傳感器的制備方法及應用
技術領域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法及應用。具體是采用Au-GQDOPtPd作為檢測抗體標記物，制備一種夾心型電化學免疫傳感器，屬于新型功能材料、免疫分析以及生物傳感檢測技術領域。
【背景技術】
[0002]人類受眾多疾病的困擾，如肺癌、卵巢癌、乳腺癌和囊腺癌，發(fā)病率高、生長和轉移速度快，對人類的健康有極大的危害。癌胚抗原最初發(fā)現(xiàn)于結腸癌和胎兒腸組織中，人體血清中癌胚抗原的含量的升高，表明人體處于一種非健康的狀態(tài)。癌胚抗原的意義就在于其能反映出多種腫瘤的存在，可用于對大腸癌、乳腺癌和肺癌的療效判斷、病情發(fā)展、監(jiān)測和預后估計。癌胚抗原升高常見于大腸癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌等。因此在臨床研究上，發(fā)展快速、簡便、靈敏的檢測癌胚抗原的方法十分重要。
[0003]目前已有的對于癌胚抗原的檢測方法很多，如目前常用于檢測癌胚抗原的免疫分析方法主要包括有放射免疫法、酶聯(lián)免疫分析方法、熒光免疫分析方法和電化學發(fā)光免疫分析方法等，但多數(shù)檢測方法繁瑣，操作復雜，費用昂貴，檢出限高，因此，建立一種快速、簡便、靈敏的檢測方法有重要意義。
[0004]免疫傳感器是將免疫學方法與分析化學方法相結合的一種生物傳感器，通過抗原與抗體之間的特異性結合，使得它具有靈敏度高、選擇性好、結構簡單、操作簡便、易于小型化、可連續(xù)、快速自動化檢測分析等優(yōu)點。而構建電化學免疫傳感器的關鍵有兩點:其一是采用簡單、快速、有效的方法將抗原抗體等生物分子固定在電極表面;其二是開發(fā)傳感器的信號放大技術。
[0005]電沉積金具有良好的導電性能，其優(yōu)良的生物相容性使之能夠很好的固載抗體，有序介孔碳以其大的比表面積能夠很好的固載金納米粒子和鉻離子，使之具有良好的催化性能，能夠加速電子傳遞，對于提高傳感器靈敏度具有重要作用。
[0006]因此本發(fā)明制備了一種應用電沉積金作為基底材料和以Au-GQDOPtPd為標記物的免疫傳感器，實現(xiàn)了對癌胚抗原的超靈敏檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的之一是基于Au-GQDOPtPd作為檢測抗體標記物，構建了一種快速超靈敏的夾心型電化學免疫傳感器。
[0008]本發(fā)明的目的之二是將該夾心型電化學免疫傳感器應用于癌胚抗原的檢測。
[0009]本發(fā)明的技術方案如下:
1.一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下:
(1)將直徑為3?5mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)將HAuCl4(I wt%)用計時電流法從-0.2V~0.2V電沉積到電極表面，晾干，用超純水沖洗，晾干； (3)滴涂6yL、8?12 yg/mL的腫瘤標志物一抗Abi溶液于電極表面，4°C冰箱中干燥；
(4)超純水沖洗掉未結合的捕獲抗體六匕后，滴加3yU0.5?1.5 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，4°C冰箱中晾干；
(5)超純水沖洗掉未結合的BSA后，滴加6yUlXlO—6?10 ng/mL的一系列不同濃度的癌胚抗原溶液，室溫孵化Ih，超純水清洗，置于4°C冰箱中干燥；
(6)將6uL、1.5- 5.0 mg/mL的檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd-Ab2溶液滴涂于電極表面上，室溫孵化Ih，超純水清洗干凈，置于4°C冰箱中晾干，制得一種基于Au-GQDOPtPd的癌胚抗原傳感器。
[0010]2.如權利要求1所述的一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法，所述的所述Au-GQDOPtPd _Ab2二抗孵化物溶液的制備，其特征在于，制備步驟如下:
(1)石墨稀量子點的制備
首先將2.0 g檸檬酸和1.0 g雙氰胺加入到5mL超純水中，之后將混合物轉移到25mL高壓釜內(nèi)加熱到180°C并持續(xù)12 h;將產(chǎn)物分散在100 mL超純水中，在離心機中用10000r/min的轉速離心10 min，取上清液室溫下真空干燥12 h，制得石墨稀量子點；
(2)GQD@PtPd的制備
將0.158 mL氯鉑酸(20mmol/L)，0.233 mL氯鈀酸(20mmol/L)和20mg石墨烯量子點在磁力攪拌下加入到15.0 mL超純水中，用NaOH調(diào)節(jié)pH到10，隨后把混合溶液轉移至高壓反應釜中，在160°C下反應6h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，室溫下真空干燥12h，制得黑色粉末GQDOPtPd ；
(3 )金納米粒子的制備
將1.0 mL氯金酸(I wt%)加入到99 mL超純水中，邊攪拌邊加入2.5 mL的檸檬酸鈉(Iwt%)，在100 °(:下回流15 min，離心分離，棄去沉淀，分散均勾的酒紅色的上清液即為金納米粒子種子溶液;取I mL金納米粒子種子溶液與25 mL 二次水與混合均勻，加入100 yL、0.2 mol/L的鹽酸羥胺溶液，在室溫下高速攪拌混勻，然后逐滴加入3.0 mL氯金酸(I wt%)溶液，隨著氯金酸的加入，溶液的顏色逐漸轉變?yōu)樯罴t色，制得粒徑為50土5 nm的金納米粒子溶液；
(4)Au-GQD@PtPd的制備
首先將1.0 mL金納米粒子溶液和2.0 mL乙二胺分散在5.0 mL超純水中，超聲Ih，然后磁力攪拌5h，離心分離，并用超純水洗滌，棄上清液，得到氨基功能化的金納米粒子，然后準確加入4?6 mg GQDOPtPd，并加入1.0 mL超純水，室溫反應12h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得Au-GQDOPtPd ；
(5)檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd-Ab2溶液的制備
將1.5?5 mg的Au-GQDOPtPd二抗標記物分散到I mL超純水中，加入100 yL、80?120 yg/mL的腫瘤標志物二抗Ab2溶液和900 yL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;離心分離后，加入I mL 50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，得到檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd -Ab2溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0011]3.如權利要求1所述的制備方法制備的一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器用于癌胚抗原的檢測，步驟如下:
(I)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.91?8.04磷酸鹽緩沖溶液中進行測試；
(2)用計時電流法對癌胚抗原進行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 S，運行時間400 s ；
(3)當背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液中加入10μ L、5 mo I /L的雙氧水溶液，記錄電流變化。
[0012]4.如權利要求1所述的一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法，所述癌胚抗原選自CEA。
[0013]本發(fā)明的有益成果
(I)本發(fā)明的發(fā)明人首次將Au-GQDOPtPd納米粒子作為檢測抗體標記物引入到癌胚抗原的電化學免疫傳感器的制備當中，利用Au-GQDOPtPd優(yōu)異的生物相容性和高的催化性能，使所制作的傳感器具有高的靈敏度和寬的檢測范圍，檢測CEA線性范圍為0.001 pg/mL?10ng/mL，檢測限為0.0003 pg/mL。
[0014](2)使用了具有良好催化效果電沉積金作為基底材料，既能夠很好的固載捕獲抗體，又可以提高比表面積和電子轉移速率，實現(xiàn)了電化學信號的放大，進一步提高了傳感器的靈敏度。
[0015](3)使用完全相同的納米材料和修飾方法，利用抗原與抗體的特異性結合，只需改變免疫球蛋白種類即可實現(xiàn)不同免疫球蛋白的高靈敏、特異性檢測，此方法操作簡單，檢測速度快，可在短時間內(nèi)實現(xiàn)大量樣品的測定，有利于免疫傳感器的商品化。
[0016](4)將Au-GQDOPtPd納米粒子與人癌胚抗原檢測抗體直接孵化，在檢測抗體的標記物中不必使用酶，避免了因酶的失活和泄漏造成的檢測誤差，簡化了檢測抗體標記物的制作步驟，顯著提高了電化學免疫傳感器的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。
【具體實施方式】
[0017]現(xiàn)將本發(fā)明通過【具體實施方式】進一步說明，但不限于此
實施例1.一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下:
(1)將直徑為3mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)將HAuCl4(I wt%)用計時電流法從-0.2V電沉積到電極表面，晾干，用超純水沖洗，晾干；
(3)滴涂6tiL、8 ug/mL的癌胚抗原捕獲抗體Ab1溶液于電極表面，4°C冰箱中干燥；
(4)超純水沖洗掉未結合的捕獲抗體六匕后，滴加3yU0.5 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，4°C冰箱中晾干；
(5)超純水沖洗掉未結合的BSA后，滴加6yUlXlO—6?10 ng/mL的一系列不同濃度的人免疫球蛋白溶液，室溫孵化Ih，超純水清洗，置于4°C冰箱中干燥；
(6)將6uL、l.5 mg/mL的檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd-Ab2溶液滴涂于電極表面上，室溫孵化Ih，超純水清洗干凈，置于4°C冰箱中晾干，制得一種基于Au-GQDOPtPd的癌胚抗原傳感器。
[0018]實施例2.—種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下: (1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)將HAuCl4(I wt%)用計時電流法從O V電沉積到電極表面，晾干，用超純水沖洗，晾干；
(3)滴涂6uUlO ug/mL的癌胚抗原捕獲抗體Ab1溶液于電極表面，4°C冰箱中干燥；
(4)超純水沖洗掉未結合的捕獲抗體六匕后，滴加3pLU.0 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，4°C冰箱中晾干；
(5)超純水沖洗掉未結合的BSA后，滴加6yUlXlO—6?10 ng/mL的一系列不同濃度的人免疫球蛋白溶液，室溫孵化Ih，超純水清洗，置于4°C冰箱中干燥；
(6)將6uL、3.0 mg/mL的檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd-Ab2溶液滴涂于電極表面上，室溫孵化Ih，超純水清洗干凈，置于4°C冰箱中晾干，制得一種基于Au-GQDOPtPd的癌胚抗原傳感器。
[0019]實施例3.—種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下:
(1)將直徑為5mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)將HAuCl4(I wt%)用計時電流法從0.2V電沉積到電極表面，晾干，用超純水沖洗，晾干；
(3)滴涂6仙、12ug/mL的癌胚抗原捕獲抗體Ab1溶液于電極表面，4°C冰箱中干燥；
(4)超純水沖洗掉未結合的捕獲抗體六匕后，滴加3tiL、1.5 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，4°C冰箱中晾干；
(5)超純水沖洗掉未結合的BSA后，滴加6yUlXlO—6?10 ng/mL的一系列不同濃度的人免疫球蛋白溶液，室溫孵化Ih，超純水清洗，置于4°C冰箱中干燥；
(6)將6uL、5.0 mg/mL的檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd-Ab2溶液滴涂于電極表面上，室溫孵化Ih，超純水清洗干凈，置于4°C冰箱中晾干，制得一種基于Au-GQDOPtPd的癌胚抗原傳感器。
[0020]實施例4.構建癌胚抗原免疫傳感器的各種傳感材料的制備方法，包括以下步驟:
(1)石墨稀量子點的制備
首先將2.0 g檸檬酸和1.0 g雙氰胺加入到5mL超純水中，之后將混合物轉移到25mL高壓釜內(nèi)加熱到180°C并持續(xù)12 h;將產(chǎn)物分散在100 mL超純水中，在離心機中用10000r/min的轉速離心10 min，取上清液室溫下真空干燥12 h，制得石墨稀量子點；
(2)GQD@PtPd的制備
將0.158 mL氯鉑酸(20mmol/L)，0.233 mL氯鈀酸(20mmol/L)和20mg石墨烯量子點在磁力攪拌下加入到15.0 mL超純水中，用NaOH調(diào)節(jié)pH到10，隨后把混合溶液轉移至高壓反應釜中，在160°C下反應6h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，室溫下真空干燥12h，制得黑色粉末GQDOPtPd ；
(3 )金納米粒子的制備
將1.0 mL氯金酸(I wt%)加入到99 mL超純水中，邊攪拌邊加入2.5 mL的檸檬酸鈉(Iwt%)，在100 °(:下回流15 min，離心分離，棄去沉淀，分散均勾的酒紅色的上清液即為金納米粒子種子溶液;取I mL金納米粒子種子溶液與25 mL 二次水與混合均勻，加入100 yL、0.2 mol/L的鹽酸羥胺溶液，在室溫下高速攪拌混勻，然后逐滴加入3.0 mL氯金酸(I wt%)溶液，隨著氯金酸的加入，溶液的顏色逐漸轉變?yōu)樯罴t色，制得粒徑為50土5 nm的金納米粒子溶液；
(4)Au-GQD@PtPd的制備
首先將1.0 mL金納米粒子溶液和2.0 mL乙二胺分散在5.0 mL超純水中，超聲Ih，然后磁力攪拌5h，離心分離，并用超純水洗滌，棄上清液，得到氨基功能化的金納米粒子，然后準確加入4 mg GQDOPtPd，并加入1.0 mL超純水，室溫反應12h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得Au-GQDOPtPd ；
(5)檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd-Ab2溶液的制備
將1.5 mg的Au-GQDOPtPd二抗標記物分散到I mL超純水中，加入100 yL、80 yg/mL的腫瘤標志物二抗Ab2溶液和900 yL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;離心分離后，加入I mL 50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，得到檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd -Ab2溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0021]實施例5.構建癌胚抗原免疫傳感器的各種傳感材料的制備方法，包括以下步驟:
(1)石墨稀量子點的制備
首先將2.0 g檸檬酸和1.0 g雙氰胺加入到5mL超純水中，之后將混合物轉移到25 mL高壓釜內(nèi)加熱到180°C并持續(xù)12 h;將產(chǎn)物分散在100 mL超純水中，在離心機中用10000 r/min的轉速離心10 min，取上清液室溫下真空干燥12 h，制得石墨稀量子點；
(2)GQD@PtPd的制備
將0.158 mL氯鉑酸(20mmol/L)，0.233 mL氯鈀酸(20mmol/L)和20mg石墨烯量子點在磁力攪拌下加入到15.0 mL超純水中，用NaOH調(diào)節(jié)pH到10，隨后把混合溶液轉移至高壓反應釜中，在160°C下反應6h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，室溫下真空干燥12h，制得黑色粉末GQDOPtPd ；
(3 )金納米粒子的制備
將1.0 mL氯金酸(I wt%)加入到99 mL超純水中，邊攪拌邊加入2.5 mL的檸檬酸鈉(Iwt%)，在100 °(:下回流15 min，離心分離，棄去沉淀，分散均勾的酒紅色的上清液即為金納米粒子種子溶液;取I mL金納米粒子種子溶液與25 mL 二次水與混合均勻，加入100 yL、0.2 mol/L的鹽酸羥胺溶液，在室溫下高速攪拌混勻，然后逐滴加入3.0 mL氯金酸(I wt%)溶液，隨著氯金酸的加入，溶液的顏色逐漸轉變?yōu)樯罴t色，制得粒徑為50土5 nm的金納米粒子溶液；
(4)Au-GQD@PtPd的制備
首先將1.0 mL金納米粒子溶液和2.0 mL乙二胺分散在5.0 mL超純水中，超聲Ih，然后磁力攪拌5h，離心分離，并用超純水洗滌，棄上清液，得到氨基功能化的金納米粒子，然后準確加入5 mg GQDOPtPd，并加入1.0 mL超純水，室溫反應12h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得Au-GQDOPtPd ；
(5)檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd-Ab2溶液的制備
將3 mg的Au-GQDOPtPd二抗標記物分散到I mL超純水中，加入100 yL、100 yg/mL的腫瘤標志物二抗Ab2溶液和900 yL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;離心分離后，加入I mL 50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，得到檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd -Ab2溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0022]實施例6.構建癌胚抗原免疫傳感器的各種傳感材料的制備方法，包括以下步驟:
(1)石墨稀量子點的制備
首先將2.0 g檸檬酸和1.0 g雙氰胺加入到5mL超純水中，之后將混合物轉移到25 mL高壓釜內(nèi)加熱到180°C并持續(xù)12 h;將產(chǎn)物分散在100 mL超純水中，在離心機中用10000 r/min的轉速離心10 min，取上清液室溫下真空干燥12 h，制得石墨稀量子點；
(2)GQD@PtPd的制備
將0.158 mL氯鉑酸(20 mmol/L), 0.233 mL氯鈀酸(20 mmol/L)和20mg石墨烯量子點在磁力攪拌下加入到15.0 mL超純水中，用NaOH調(diào)節(jié)pH到10，隨后把混合溶液轉移至高壓反應釜中，在160°C下反應6h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，室溫下真空干燥12 h，制得黑色粉末GQDOPtPd;
(3 )金納米粒子的制備
將1.0 mL氯金酸(I wt%)加入到99 mL超純水中，邊攪拌邊加入2.5 mL的檸檬酸鈉(Iwt%)，在100 °(:下回流15 min，離心分離，棄去沉淀，分散均勾的酒紅色的上清液即為金納米粒子種子溶液;取I mL金納米粒子種子溶液與25 mL 二次水與混合均勻，加入100 yL、0.2 mol/L的鹽酸羥胺溶液，在室溫下高速攪拌混勻，然后逐滴加入3.0 mL氯金酸(I wt%)溶液，隨著氯金酸的加入，溶液的顏色逐漸轉變?yōu)樯罴t色，制得粒徑為50土5 nm的金納米粒子溶液；
(4)Au-GQD@PtPd的制備
首先將1.0 mL金納米粒子溶液和2.0 mL乙二胺分散在5.0 mL超純水中，超聲Ih，然后磁力攪拌5h，離心分離，并用超純水洗滌，棄上清液，得到氨基功能化的金納米粒子，然后準確加入6 mg GQDOPtPd，并加入1.0 mL超純水，室溫反應12h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得Au-GQDOPtPd ；
(5)檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd-Ab2溶液的制備
將5 mg的Au-GQDOPtPd二抗標記物分散到I mL超純水中，加入100 yL、120 yg/mL的腫瘤標志物二抗Ab2溶液和900 yL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;離心分離后，加入I mL 50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，得到檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd -Ab2溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0023]實施例7.所構建的免疫傳感器，用于癌胚抗原CEA的檢測，檢測步驟如下:
(1)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.59- 8.02磷酸鹽緩沖溶液中進行測試；
(2)用計時電流法對癌胚抗原CEA進行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 S，運行時間400 s；
(3)當背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液中加入10μ L、5 mo I /L的雙氧水溶液，記錄電流變化；
(4)根據(jù)所得電流強度與CEA濃度之間的線性關系，繪制工作曲線，測得其線性范圍為0.001 pg/mL?100 ng/mL，檢測限為0.0003 pg/mL。
【主權項】
1.一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下: (1)將直徑為3~5mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈； (2)將HAuCl4(I wt%)用計時電流法從-0.2V-0.2V電沉積到電極表面，晾干，用超純水沖洗，瞭干； (3)滴涂6yL、8?12 yg/mL的腫瘤標志物一抗Abi溶液于電極表面，4°C冰箱中干燥； (4)超純水沖洗掉未結合的捕獲抗體六匕后，滴加3tiL、0.5?1.5 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，4°C冰箱中晾干； (5)超純水沖洗掉未結合的BSA后，滴加6yUlXlO—6?10 ng/mL的一系列不同濃度的癌胚抗原溶液，室溫孵化Ih，超純水清洗，置于4°C冰箱中干燥； (6)將6uL、1.5- 5.0 mg/mL的檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd-Ab2溶液滴涂于電極表面上，室溫孵化Ih，超純水清洗干凈，置于4°C冰箱中晾干，制得一種基于Au-GQDOPtPd的癌胚抗原傳感器。2.如權利要求1所述的一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法，所述的所述Au-GQDiPtPd _Ab2二抗孵化物溶液的制備，其特征在于，制備步驟如下: (1)石墨稀量子點的制備 首先將2.0 g檸檬酸和1.0 g雙氰胺加入到5mL超純水中，之后將混合物轉移到25mL高壓釜內(nèi)加熱到180°C并持續(xù)12 h;將產(chǎn)物分散在100 mL超純水中，在離心機中用10000r/min的轉速離心10 min，取上清液室溫下真空干燥12 h，制得石墨稀量子點； (2)GQD@PtPd的制備 將0.158 mL氯鉑酸(20mmol/L)，0.233 mL氯鈀酸(20mmol/L)和20mg石墨烯量子點在磁力攪拌下加入到15.0 mL超純水中，用NaOH調(diào)節(jié)pH到10，隨后把混合溶液轉移至高壓反應釜中，在160°C下反應6h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，室溫下真空干燥12h，制得黑色粉末GQDOPtPd ； (3 )金納米粒子的制備 將1.0 mL氯金酸(I wt%)加入到99 mL超純水中，邊攪拌邊加入2.5 mL的檸檬酸鈉(Iwt%)，在100 °(:下回流15 min，離心分離，棄去沉淀，分散均勾的酒紅色的上清液即為金納米粒子種子溶液;取I mL金納米粒子種子溶液與25 mL 二次水與混合均勻，加入100 yL、0.2 mol/L的鹽酸羥胺溶液，在室溫下高速攪拌混勻，然后逐滴加入3.0 mL氯金酸(I wt%)溶液，隨著氯金酸的加入，溶液的顏色逐漸轉變?yōu)樯罴t色，制得粒徑為50土5 nm的金納米粒子溶液； (4)Au-GQD@PtPd的制備 首先將1.0 mL金納米粒子溶液和2.0 mL乙二胺分散在5.0 mL超純水中，超聲lh，然后磁力攪拌5h，離心分離，并用超純水洗滌，棄上清液，得到氨基功能化的金納米粒子，然后準確加入4?6 mg GQDOPtPd，并加入1.0 mL超純水，室溫反應12h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得Au-GQDOPtPd ； (5 )檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd -Ab2溶液的制備 將1.5?5 mg的Au-GQDOPtPd二抗標記物分散到I mL超純水中，加入100 yL、80?120 yg/mL的腫瘤標志物二抗Ab2溶液和900 yL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;離心分離后，加入I mL 50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，得到檢測抗體孵化物Au-GQDOPtPd -Ab2溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?.如權利要求1所述的制備方法制備的一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器用于癌胚抗原的檢測，步驟如下: (1)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.91?8.04磷酸鹽緩沖溶液中進行測試； (2)用計時電流法對癌胚抗原進行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 S，運行時間400 s ； (3)當背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液中加入10μ L、5 mo I /L的雙氧水溶液，記錄電流變化。4.如權利要求1所述的一種基于Au-GQDOPtPd的免疫傳感器的制備方法，所述癌胚抗原選自CEA。
【文檔編號】G01N27/30GK105928997SQ201610539821
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年7月11日
【發(fā)明人】劉青, 楊玉瑩, 董云會, 劉會, 王平, 李月云
【申請人】山東理工大學