一種lc-ms/ms檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法
【專利摘要】一種LC?MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于：該方法利用劍橋?yàn)V片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，然后轉(zhuǎn)移劍橋?yàn)V片至錐形瓶內(nèi)，向錐形瓶加入甲醇，對劍橋?yàn)V片進(jìn)行超聲萃取，采用LC?MS/MS對萃取液中的茄尼醇進(jìn)行檢測，采用LC?MS/MS對茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量。本發(fā)明利用液相色譜進(jìn)行卷煙主流煙氣樣品中茄尼醇的分離，由串級(jí)質(zhì)譜完成定性和定量分析。相比于HPLC方法，LC?MS/MS方法具有更強(qiáng)的定性和定量能力，具有更高的檢測靈敏度，能有效地消除基質(zhì)的干擾，有利于卷煙主流煙氣中茄尼醇的準(zhǔn)確檢測。
【專利說明】
一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于卷煙煙氣分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]茄尼醇是一種廣泛存在于煙葉、馬鈴薯葉和桑葉中的不飽和聚異戊二烯醇。卷煙抽吸時(shí)，大部分茄尼醇原形轉(zhuǎn)移至卷煙主流煙氣和側(cè)流煙氣。煙氣中的茄尼醇含量較高，通常條件下也較為穩(wěn)定，是一種重要的卷煙煙氣標(biāo)志物。很多研究報(bào)道以茄尼醇作為煙氣的粒相標(biāo)志物，來研究卷煙主流煙氣在人體呼吸道的沉降規(guī)律及環(huán)境煙氣中煙氣顆粒的老化和沉降規(guī)律。
[0003]關(guān)于茄尼醇的檢測方法研究多集中于煙草煙葉上，已有《GB/T 31758-2015煙葉和煙葉提取物中茄尼醇的測定高效液相色譜法》，該標(biāo)準(zhǔn)方法采用了高效液相色譜法(HPLC)對煙葉、煙葉提取物中的茄尼醇進(jìn)行檢測。此外，很多文獻(xiàn)也報(bào)道了基于HPLC的檢測煙葉中茄尼醇的方法。
[0004]卷煙煙氣是煙草不完全燃燒形成的，是不斷變化的極其復(fù)雜的化學(xué)物質(zhì)混合物。茄尼醇的分子量大，沸點(diǎn)高，主要存在于煙氣的粒相中。目前，卷煙煙氣中茄尼醇的檢測雖然仍可采用HPLC方法(如，茄尼醇的快速分析及在煙氣攝入量評估中的應(yīng)用，煙草科技，2013；Identificat1n of oxidat1n products of solanesol produced during airsampling for tobacco smoke by electrospray mass spectrometry and HPLC?Analyst，2005)，但是，由于卷煙煙氣的化學(xué)成分相比于煙草煙葉更為復(fù)雜，在對卷煙煙氣中茄尼醇檢測時(shí)可能存在基質(zhì)干擾及定性定量準(zhǔn)確性差的問題。
[0005]液相色譜串級(jí)質(zhì)譜(LC-MS/MS)是將液相色譜與串級(jí)質(zhì)譜相聯(lián)用的分析儀器，其利用液相色譜進(jìn)行有機(jī)物的分離，并由串級(jí)質(zhì)譜完成待測物的定性和定量分析。由于具有較高的定性能力和定量能力，LC-MS/MS在復(fù)雜基質(zhì)樣品有機(jī)物的檢測中得到了廣泛地應(yīng)用。相比于HPLC方法，LC-MS/MS方法往往具有更強(qiáng)的定性能力和更高的靈敏度。Chunjian Z(Rapid and quantitative determinat1n of solanesol in Nicotiana tabacumbyliquid chromatography-tandem mass spectrometry, Journal of Pharmaceutical andB1medical Analysis , 2007)采用了LC-MS/MS對煙草煙葉中的前尼醇進(jìn)行了檢測；Clifford Watson (Development of a method to assess cigarette smoke intake，Environmental science & technology, 2004)米用LC-MS/MS方法對卷煙抽吸后卷煙濾嘴中截留的茄尼醇進(jìn)行檢測。此外，黃翼飛等(液相色譜一大氣壓化學(xué)電離離子阱質(zhì)譜法測定煙草中的游離茄尼醇，分析試驗(yàn)室，2009)、黃菲等(液相色譜一電噴霧離子阱質(zhì)譜測定煙草中的游離茄尼醇，現(xiàn)代食品科技，2011)均采用液相色譜與離子阱質(zhì)譜(LC-1TMS)聯(lián)用用于煙草中茄尼醇的檢測。
[0006]當(dāng)前，針對卷煙主流煙氣中茄尼醇仍沒有LC-MS/MS檢測方法的研究報(bào)道，而HPLC法檢測卷煙主流煙氣時(shí)又可能存在基質(zhì)干擾及定性定量準(zhǔn)確性差的問題。本發(fā)明正是基于這一現(xiàn)狀應(yīng)運(yùn)而生的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明針對卷煙主流煙氣中茄尼醇檢測的需要，提供一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，相比于HPLC方法，LC-MS/MS方法具有更強(qiáng)的定性和定量能力，具有更高的檢測靈敏度，能有效地消除基質(zhì)的干擾，有利于卷煙主流煙氣中茄尼醇的準(zhǔn)確檢測。
[0008]本發(fā)明的目的是通過以下方案來實(shí)現(xiàn)的:
一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，首先利用劍橋?yàn)V片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，然后轉(zhuǎn)移劍橋?yàn)V片至錐形瓶內(nèi)，向錐形瓶加入甲醇，對劍橋?yàn)V片進(jìn)行超聲萃取，米用LC-MS/MS對萃取液中的前尼醇進(jìn)彳丁檢測，米用LC-MS/MS對前尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)彳丁檢測，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量，具體步驟如下:
a、茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:
用甲醇配制茄尼醇系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為I，2，5，10，20，50，100yg/mL;
b、卷煙主流煙氣中茄尼醇的捕集與萃取:
抽吸4支卷煙，采用劍橋?yàn)V片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，轉(zhuǎn)移劍橋?yàn)V片至50mL錐形瓶內(nèi)，向錐形瓶加入甲醇20mL，對劍橋?yàn)V片進(jìn)行超聲萃取40 min，超聲功率為40W，將萃取液通過規(guī)格為0.22μπι的有機(jī)濾膜，收集于色譜瓶中；
c、萃取液和茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的分析:
LC-MS/MS分析條件:
液相色譜柱為C18色譜柱(100mmX4.6mm)，柱溫為32°C，流速為1.8ml/min，進(jìn)樣量為10yL，流動(dòng)相為甲醇:異丙醇=90:10(V:V)，等度洗脫。
[0009]質(zhì)譜電離模式為電噴霧正離子模式，離子傳輸管溫度為400°C，電噴霧電壓為3.5KV，質(zhì)譜掃描模式為MRM，碰撞氣為氮?dú)猓鲎材芰繛?0eV，茄尼醇定量離子對為:m/z
613.5—m/z 557.5。
[0010]d、根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量。
[0011]本方法中卷煙主流煙氣粒相物的捕集過程，應(yīng)采用直線式吸煙機(jī)按照GB/T19609規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)條件抽吸卷煙。
[0012]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法具有如下優(yōu)良效果:
針對卷煙主流煙氣中茄尼醇的檢測，LC-MS/MS利用液相色譜進(jìn)行卷煙主流煙氣樣品中茄尼醇的分離，由串級(jí)質(zhì)譜完成定性和定量分析。相比于HPLC方法，LC-MS/MS方法具有更強(qiáng)的定性和定量能力，具有更高的檢測靈敏度，能有效地消除基質(zhì)的干擾，有利于卷煙主流煙氣中茄尼醇的準(zhǔn)確檢測。
【附圖說明】
[0013]圖1本發(fā)明茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測的全掃描質(zhì)譜圖。
[0014]圖2本發(fā)明茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測的離子流圖(m/z613.5—m/z 557.5)。
【具體實(shí)施方式】
[0015]本發(fā)明以下結(jié)合實(shí)施例附圖做進(jìn)一步說明: 將卷煙樣品在(22 ± I) °C和相對濕度(60 ± 2 )%的環(huán)境下平衡48h以上，在ISO標(biāo)準(zhǔn)條件下抽吸卷煙，用Φ 44mm劍橋?yàn)V片捕集主流煙氣的粒相物，每張劍橋?yàn)V片捕集4支卷煙主流煙氣的粒相物。轉(zhuǎn)移劍橋?yàn)V片至50mL錐形瓶內(nèi)，向錐形瓶加入甲醇20mL，對劍橋?yàn)V片進(jìn)行超聲萃取40 min，超聲功率為40W，將萃取液通過規(guī)格為0.22μπι的有機(jī)濾膜，收集于色譜瓶中，待分析。
[0016]茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:以甲醇為溶劑，配制濃度為500yg/mL的茄尼醇儲(chǔ)備液，然后分別配制茄尼醇濃度分別為I，2，5，10，20，50，100yg/mL的甲醇溶液，待分析。
[0017]萃取液和茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的分析條件如下:
LC-MS/MS分析條件:
液相色譜柱為C18色譜柱(100mmX4.6mm)，柱溫為32°C，流速為1.8ml/min，進(jìn)樣量為10yL，流動(dòng)相為甲醇:異丙醇=90:10(V:V)，等度洗脫。
[0018]質(zhì)譜電離模式為電噴霧正離子模式，離子傳輸管溫度為400°C，電噴霧電壓為3.5KV，質(zhì)譜掃描模式為MRM，碰撞氣為氮?dú)猓鲎材芰繛?0eV，茄尼醇定量離子對為:m/z
613.5—m/z 557.5。
[0019]圖1為茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測的全掃描質(zhì)譜圖，其中m/z613.5為茄尼醇[1-出0+!1] +的離子峰，m/z 614.5、m/z 615.5分別為前尼醇的同位素離子峰。圖2為前尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測的離子流圖，茄尼醇的保留時(shí)間為3.4min。
[0020]分別對茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行LC-MS/MS分析，建立峰面積對茄尼醇濃度的線性定量方程;對待測樣品進(jìn)行分析，采用外標(biāo)法計(jì)算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于:該方法利用劍橋?yàn)V片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，然后轉(zhuǎn)移劍橋?yàn)V片至錐形瓶內(nèi)，向錐形瓶加入甲醇，對劍橋?yàn)V片進(jìn)彳丁超聲萃取，米用LC-MS/MS對萃取液中的前尼醇進(jìn)彳丁檢測，米用LC-MS/MS對前尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量，具體步驟如下: a、茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制: 用甲醇配制茄尼醇系列標(biāo)準(zhǔn)溶液； b、卷煙主流煙氣中茄尼醇的捕集與萃取: 抽吸4支卷煙，采用劍橋?yàn)V片捕集卷煙主流煙氣的粒相物，轉(zhuǎn)移劍橋?yàn)V片至50mL錐形瓶內(nèi)，向錐形瓶加入甲醇20mL，對劍橋?yàn)V片進(jìn)行超聲萃取，將萃取液通過規(guī)格為0.22μπι的有機(jī)濾膜，收集于色譜瓶中； c、萃取液和茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的分析: LC-MS/MS分析條件: 液相色譜柱為C18色譜柱(10mm X 4.6mm)，柱溫為32°C，流速為1.8ml/min，進(jìn)樣量為10yL，流動(dòng)相為甲醇:異丙醇=90:10(V:V)，等度洗脫； 質(zhì)譜電離模式為電噴霧正離子模式，離子傳輸管溫度為400°C，電噴霧電壓為3.5 KV,質(zhì)譜掃描模式為MRM，碰撞氣為氮?dú)猓鲎材芰繛?0eV，茄尼醇定量離子對為:m/z 613.5—m/z 557.5; d、根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算卷煙主流煙氣中茄尼醇的含量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于:茄尼醇系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為I，2，5，10，20，50，100yg/mLo3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于:超聲萃取40 min，超聲功率為40W。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的LC-MS/MS檢測卷煙主流煙氣中茄尼醇的方法，其特征在于:在卷煙主流煙氣粒相物的捕集過程中，采用直線式吸煙機(jī)按照GB/T19609規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)條件抽吸卷煙。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105938126SQ201610563501
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2016年7月18日
【發(fā)明人】崔華鵬, 陳黎, 秦亞瓊, 王曉瑜, 樊美娟, 賈云禎, 蔡君蘭, 劉紹鋒, 張曉兵, 劉惠民
【申請人】中國煙草總公司鄭州煙草研究院