一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸純度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，包括以下步驟：(1)測定奧貝膽酸和內(nèi)標物各定量目標峰的縱向弛豫時間T1；(2)根據(jù)所測定的T1值設置核磁共振波普儀的傾倒角和弛豫延遲時間(d1)，所述傾倒角為30～90°，弛豫延遲時間(d1)≥(7/3×T1max～5×T1max)；(3)設定核磁共振波譜儀的其他相關(guān)檢測參數(shù)，測定奧貝膽酸及內(nèi)標物中各定量目標峰的積分面積，根據(jù)以下公式計算奧貝膽酸純度：W％＝(mIS×HIS×AS×MS×100％)/(MIS×AIS×HS×mS)。本發(fā)明具有操作簡便，內(nèi)標物廉價易得，結(jié)果準確且重復性好等優(yōu)點。
【專利說明】
一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸純度的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸 純度的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC)是一個相對罕見的肝硬 化，一般認為是自身免疫紊亂造成，具體發(fā)病機制不明。PBC病人多數(shù)沒有癥狀，所以診斷需 要多個步驟。首先是發(fā)現(xiàn)來自血液指標異常。最終確診需要超聲和活體檢測。PBC患者最后 通常需要肝移植，但器官供應遠低于需求，而且肝移植并不一定能根治PBC，所以亟需其它 治療方法。現(xiàn)在僅有熊去氧膽酸批準用于臨床中PBC的治療。已有臨床證據(jù)表明熊去氧膽酸 無法改善PBC患者生存期和降低肝移植風險。最近Π)Α專家組支持奧貝膽酸（Obeticholic acid)用于治療原發(fā)性膽汁性肝硬化，其對血液中堿磷酸酶指標具有較好的改善作用，該品 種被業(yè)界普遍認為具有較好的市場前景。
[0003] 目前，對奧貝膽酸純度的檢測通常使用HPLC-UV方法。然而如下式所示，奧貝膽酸 分子中無共輒結(jié)構(gòu)，在近紫外區(qū)無吸收，采用HPLC-UV方法測定其純度時，紫外檢測波長只 能選擇末端吸收，從而造成了儀器噪音高，選擇性差等缺點；同時HPLC-UV方法對樣品中存 在的溶劑殘留（水、乙醇等），無法一次性測定，仍需結(jié)合氣相色譜等方法扣除溶劑殘留量， 才能最終獲得奧貝膽酸真實的純度;而且定量時需要高純度的奧貝膽酸標準品，價格昂貴， 長期使用成本高，而且在存放過程中標準樣品發(fā)生吸潮、污染或降解等均會嚴重影響測定 結(jié)果。而藥品原料藥純度檢測方法的研究是醫(yī)藥研發(fā)中一項重要內(nèi)容，藥品制劑原料的純 度最終影響成藥的用藥安全和療效。因此，有必要開發(fā)一種能對奧貝膽酸純度進行廉價、簡 便、快速、準確測定的分析方法。
[0004] 氫核磁共振法因其具有的高靈敏度、高精確度、分析快速等優(yōu)點已被廣泛應用于 有機化合物的結(jié)構(gòu)解析和定性分析中，然而使用氫核磁共振法對某種特定化合物進行純度 測定定量分析時，由于影響其測量準確性的參數(shù)眾多，而各化合物之間結(jié)構(gòu)、性質(zhì)上差異巨 大，且參數(shù)設置無明確規(guī)律可以依循，因此構(gòu)建一套基于氫核磁共振法準確測定化合物純 度的體系十分困難。目前，尚未有基于氫核磁共振法測定奧貝膽酸純度的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸純度的 方法，該方法具有操作簡便，內(nèi)標物廉價易得，結(jié)果準確且重復性好等優(yōu)點。
[0007] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0008] 一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸純度的方法，包括以下步驟：
[0009] (1)測定奧貝膽酸和內(nèi)標物各定量目標峰的縱向弛豫時間T1;
[0010] (2)根據(jù)所測定的Ti值設置核磁共振波普儀的傾倒角和弛豫延遲時間(cU)，所述傾 倒角為30~90°，弛豫延遲時間（di)彡（7/3 XTimax~5 XTimax);
[0011] (3)設定核磁共振波譜儀的其他相關(guān)檢測參數(shù)，測定奧貝膽酸及內(nèi)標物中各定量 目標峰的積分面積，根據(jù)如下公式(1)計算奧貝膽酸純度；
[0012] ff% = (misXHisXAsXMsX100%)/(MisXAisXHsXms) (1)
[0013] 其中，為奧貝膽酸的純度;mis為內(nèi)標物的實際質(zhì)量（內(nèi)標物的質(zhì)量X純度），單 位為mg;HIS為內(nèi)標物定量目標峰的質(zhì)子數(shù);As為奧貝膽酸定量目標峰的積分值;Ms為奧貝膽 酸的摩爾質(zhì)量，單位為g/mol;Mis為內(nèi)標物的摩爾質(zhì)量，單位為g/mol ;Ais為內(nèi)標物定量目標 峰的積分值;Hs為奧貝膽酸定量目標峰的質(zhì)子數(shù);ms為奧貝膽酸樣品的質(zhì)量，單位為mg。
[0014] 優(yōu)選的，所述傾倒角為30°、50°或90°，弛豫延遲時間（cb)為6~100s;
[0015] 優(yōu)選的，所述核磁共振波譜儀的檢測參數(shù)為:共振頻率為400-600MHZ，譜寬20ppm， 測試溫度26 °C，采樣時間(AQ)為2.0~4.1 s;采樣累加次數(shù)為32~128次；
[0016] 優(yōu)選的，氘代試劑為重水、氘代甲醇或氘代二甲基亞砜(DMS〇-d6);
[0017] 進一步優(yōu)選的，所述氘代試劑為氘代二甲基亞砜；
[0018]優(yōu)選的，所述奧貝膽酸的檢測濃度為14.7-15.5mg/mL;
[0019]優(yōu)選的，所述奧貝膽酸的定量目標峰化學位移為δΗ 0.61(18位角甲基信號）；
[0020] 優(yōu)選的，所述內(nèi)標物為其質(zhì)子化學位移在δΗ 16.00~6.27、δΗ 6.27~3.50、3η 3.50~2.50或δΗ 〇. 61~0.00范圍內(nèi)，且室溫條件下不與奧貝膽酸發(fā)生化學反應的任意物 質(zhì)；
[0021] 進一步優(yōu)選的，所述內(nèi)標物為順丁烯二酸；
[0022] 優(yōu)選的，測定奧貝膽酸及內(nèi)標物中各定量目標峰的積分面積的計算方法為對每一 信號6次積分取平均值。
[0023] 氫核磁共振定量的基礎(chǔ)是在合適的儀器參數(shù)下，定量目標信號的積分值與引起該 信號的質(zhì)子數(shù)成正比關(guān)系，通過選擇適當?shù)膬?nèi)標物，根據(jù)定量目標峰的積分值推算該信號 所屬化合物的摩爾濃度，進而計算各定量化合物的質(zhì)量及純度。在實際研究過程中，
【申請人】 發(fā)現(xiàn)脈沖傾倒角和弛豫延遲時間（di)直接影響最終定量結(jié)果的準確性。當采用90°脈沖時， cU多5XT lmax是確保含量測定數(shù)據(jù)準確性的必須條件，但此時分析時間較長，氫核磁定量快 速性的優(yōu)點得不到發(fā)揮；當采用較小脈沖傾倒角時，如30°脈沖，此時cU> (7/3) X Tlmax，就能 夠獲得準確的分析結(jié)果，且分析時間大大縮短。因此，本申請首先通過測定定量目標信號的 縱向弛豫時間(h )，進而確定脈沖傾倒角和弛豫延遲時間(cU)及其他參數(shù)設置，并最終建立 了基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法。由于在測定過程中不需要特定研 發(fā)藥品的對照品，因此，特別適合新藥研發(fā)原料藥的純度測定。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有 如下有益效果：
[0024] (1)本發(fā)明利用氫核磁共振技術(shù)，選擇廉價穩(wěn)定的內(nèi)標物替代需要使用標準品作 外標的HPLC-UV進行奧貝膽酸原料藥純度測定，操作簡便，結(jié)果準確且重復性好；
[0025] (2)本發(fā)明樣品前處理簡單，分析時間短，特別適合無紫外吸收的醫(yī)藥品種原料藥 的純度分析及質(zhì)量控制，能夠有效解決奧貝膽酸以及類奧貝膽酸的新藥純度測定的技術(shù)問 題，為此類藥物純度測定提供了新方法。
[0026]核磁共振定量的原理是含氫有機化合物NMR波譜信號直接與原子數(shù)目成正比，因 此在實驗參數(shù)設定時，需要被測物和內(nèi)標物上的共振峰與其對應的原子數(shù)盡可能保持一 致，若選擇不合適位置的氫進行純度的測定，則受溶劑中雜質(zhì)以及溶劑本身等干擾峰的影 響較大，被測組分和雜質(zhì)信號之間存在干擾，被測組分和內(nèi)標也會出現(xiàn)信號重疊，導致積分 不準確，檢測結(jié)果重現(xiàn)性差。本發(fā)明中的待檢測物質(zhì)奧貝膽酸分子量高達421，結(jié)構(gòu)式如背 景技術(shù)中所示，實際上除了羰基、羥基等位置上比較活潑的氫不易被測出外，奧貝膽酸還有 二十余個不同位置的氫，每一位移峰都會對應不同的傾倒角和弛豫延遲時間等參數(shù)，所以 選擇哪個位置的氫進行純度測定是目前限制利用氫核磁共振測定奧貝膽酸純度的技術(shù)難 題之一。
[0027] 而內(nèi)標物的選擇最基本的原則是室溫條件下不與奧貝膽酸發(fā)生化學反應的物質(zhì)， 但是在內(nèi)標物的物的選擇時還要考慮被測物質(zhì)的氫共振峰與內(nèi)標的氫共振峰之間要避免 重疊以及內(nèi)標物是否廉價易得等，目前可用于作為內(nèi)標物的物質(zhì)有苯、苯甲酸芐酯、馬來 酸、過氧化苯甲酰、非那西汀、2,4_二硝基甲苯、三氟乙酸鈉，DMS〇-d 6,鄰苯二甲酸氫鉀等多 種，每種內(nèi)標物都有至少一種氫共振峰，待測物質(zhì)奧貝膽酸的選擇哪個位置的氫作為檢測 對象并不確定，所以選擇何種內(nèi)標物，何種氫共振峰都是沒有任何依據(jù)的，這也是目前限制 利用氫核磁共振測定奧貝膽酸純度的技術(shù)難題之一。
[0028] 此外，需要說明的是，研究者通常對核磁共振檢測過程中的測定溫度和待測物檢 測濃度并不關(guān)注，對于測定溫度研究者基本都選定室溫作為測定溫度，但
【申請人】在基于氫 核磁共振快速測定奧貝膽酸純度的研究中發(fā)現(xiàn)，適度提高溫度能夠有效促使H0D峰向高場 移動，而且有效提高譜圖分辨率，
【申請人】發(fā)現(xiàn)在26°C時效果最佳，過高溫度反而使譜圖分辨 率下降，不利于檢測結(jié)果的準確測定。同時，對待測物濃度選取學術(shù)界也是莫衷一是，目前 對核磁共振檢測樣品的濃度一般為20mg/mL左右，有學者認為提高檢測樣品濃度，可以增大 樣品信號在采集到信號中所占百分比，可達到提高信噪比目的。然而
【申請人】在實際檢測中 發(fā)現(xiàn)，在保證一定信噪比的條件下，適當降低濃度反而有利于提高檢測的準確度，經(jīng)過分析 奧貝膽酸檢測濃度為14.7-15.5mg/mL檢測精度最高。
[0029]
【申請人】有必要指出，脈沖傾倒角和弛豫延遲時間（cU)是建立氫核磁共振定量方法 過程中兩個重要儀器參數(shù)，直接影響最終定量結(jié)果的準確性，目前雖然也有研究這些參數(shù) 與檢測結(jié)果關(guān)系的文獻報道，然而在實際測定純度時研究人員往往直接將內(nèi)標物與待測物 質(zhì)溶解于溶劑中，進行儀器參數(shù)設定的測量，在進行參數(shù)的設定時則將脈沖傾倒角和弛豫 延遲時間等同于共振頻率等常規(guī)參數(shù)一起進行設定，這使得使用測量時對參數(shù)設置存在盲 目性，往往需要進行多次試驗才能確定較佳參數(shù)，費時費力。本申請發(fā)明人在研究過程中則 突破傳統(tǒng)思維，首先測定奧貝膽酸及內(nèi)標物定量目標峰在氘代試劑中的縱向弛豫時間 (??，再根據(jù)所測定的1^值設置核磁共振波譜儀的傾倒角和弛豫延遲時間(cU)，提高分析樣 品的準確性和效率。
【附圖說明】
[0030] 圖1為實例1中核磁共振氫譜圖；
[0031] 圖2為實例2中核磁共振氫譜圖；
[0032]圖3為實例3中核磁共振氫譜圖；
[0033]圖4為實例4中核磁共振氫譜圖；
[0034]圖5為實例5中核磁共振氫譜圖；
[0035]圖6為實例6中核磁共振氫譜圖；
[0036]圖7為實例7中核磁共振氫譜圖；
[0037]圖8為實例8中核磁共振氫譜圖；
[0038]圖9為實例9中核磁共振氫譜圖；
[0039]圖10為實例10中核磁共振氫譜圖；
[0040]圖11為實例11中核磁共振氫譜圖；
[0041 ]圖12為實例12中核磁共振氫譜圖；
[0042]圖13為實例13中核磁共振氫譜圖；
[0043]圖14為實例14中核磁共振氫譜圖。
【具體實施方式】
[0044] 稱取奧貝膽酸7.39mg、順丁稀二酸0.654mg,分別置于核磁管中，加入0.5mL DMS0- d6溶解，用于咕NMR測試。采用質(zhì)子反轉(zhuǎn)-恢復!^實驗方法測定各定量目標峰的縱向弛豫時 間Τι，并用Bruker的Τι計算程序計算。設定脈沖弛豫延遲時間范圍為1秒至30秒。經(jīng)測定以 DMS〇-d6為溶劑時，順丁烯二酸δ Η 6.27信號峰1^為2.5s，奧貝膽酸δΗ 〇.61處信號1^*3731^。 [0045]下面結(jié)合附圖與實施例對本發(fā)明作進一步說明，應該說明的是，下述說明僅是為 了解釋本發(fā)明，并不對其內(nèi)容進行限定。
[0046] 實施例1-14奧貝膽酸樣品實際純度為99.0%。
[0047] 實施例1
[0048] 精密稱取奧貝膽酸樣品8.393mg、順丁烯二酸4.706mg，分別以500yL、250yL DMS0- d6溶解，后精密取440yL奧貝膽酸溶液、60yL順丁烯二酸溶液轉(zhuǎn)移到核磁管中，進行咕NMR測 試。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，90°脈沖，cU為100s，采樣累加次數(shù)為32次，譜寬 20ppm，測試溫度為26 °C，AQ為4 · 1 s。
[0049] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.71，根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為98.4%，重復5次，相對標準 偏差0.2%。
[0050] ff% = (misXHisXAsXMsX100%)/(MisXAisXHsXms)(公式 _1)
[0051] W%-奧貝膽酸的純度
[0052 ] mis-內(nèi)標物的實際質(zhì)量（內(nèi)標物的質(zhì)量X純度），1.118mg
[0053] HIS -內(nèi)標物定量目標峰的質(zhì)子數(shù)，為2
[0054] As-奧貝膽酸定量目標峰的積分值，為2.69
[0055] Ms-奧貝膽酸的摩爾質(zhì)量，420.63g/mol
[0056] Mis一內(nèi)標物的摩爾質(zhì)量，116.07g/mol
[0057] AIS -內(nèi)標物定量目標峰的積分值，為1 [0058] Hs-奧貝膽酸定量目標峰的質(zhì)子數(shù)，為3 [0059] ms-奧貝膽酸樣品的質(zhì)量，7 · 386mg
[0060] 實施例2
[00611咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，90°脈沖，ch為 808，采樣累加次數(shù)為32次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：40為2.08。
[0062] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.71，根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.1%，重復5次，相對標準 偏差0.2%。
[0063] 實施例3
[0064]咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，90°脈沖，ch為 5〇8，采樣累加次數(shù)為32次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：4〇為4.18。
[0065] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.70,根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為98.8%，重復5次，相對標準 偏差0.1%。
[0066] 實施例4
[0067]咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，30°脈沖，ch為 3〇8，采樣累加次數(shù)為32次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：4〇為4.18。
[0068] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.71，根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.1%，重復5次，相對標準 偏差0.3%。
[0069] 實施例5
[0070]咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，90°脈沖，ch為 258，采樣累加次數(shù)為32次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：40為4.18。
[0071] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.71，根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.1%，重復5次，相對標準 偏差0.3%。
[0072] 實施例6
[0073] 4 M1R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為600MHz，90°脈沖，ch為 2〇8，采樣累加次數(shù)為128次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：4〇為3.〇8。
[0074] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.72,根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.5%，重復5次，相對標準 偏差0.2%。
[0075] 實施例7
[0076]咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，90°脈沖，ch為 158，采樣累加次數(shù)為64次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：40為4.18。
[0077] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.72,根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.5%，重復5次，相對標準 偏差0.1%。
[0078] 實施例8
[0079] 咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，50°脈沖，ch為 10〇8，采樣累加次數(shù)為128次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：4〇為4.18。
[0080] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.72,根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.5%，重復5次，相對標準 偏差0.2%。
[0081 ] 實施例9
[0082]咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，90°脈沖，ch為 158，采樣累加次數(shù)為64次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：4〇為2.〇8。
[0083] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.71，根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.1%，重復5次，相對標準 偏差0.3%。
[0084] 實施例10
[0085]咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，30°脈沖，ch為 3〇8，采樣累加次數(shù)為32次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：4〇為4.18。
[0086] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.71，根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.1%，重復5次，相對標準 偏差0.3%。
[0087] 實施例11
[0088]咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，30°脈沖，ch為 2〇8，采樣累加次數(shù)為64次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：4〇為4.18。
[0089] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.72,根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.5%，重復5次，相對標準 偏差0.2%。
[0090] 實施例12
[0091]咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，30°脈沖，ch為 158，采樣累加次數(shù)為32次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：40為4.18。
[0092] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.70,根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為98.8%，重復5次，相對標準 偏差0.2%。
[0093] 實施例13
[0094] 4 NMR測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為400MHz，30°脈沖，cb為6s， 采樣累加次數(shù)為32次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：40為4.18。
[0095] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.70,根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為98.8%，重復5次，相對標準 偏差0.1%。
[0096] 實施例14
[0097]咕匪R測試樣品同實施例1。核磁共振波譜儀共振頻率為600MHz，30°脈沖，ch為 158，采樣累加次數(shù)為32次，譜寬20??111，測試溫度為26°(：4〇為2.〇8。
[0098] 在1H NMR譜中，內(nèi)標物順丁烯二酸δΗ 6.27信號峰積分值為1，奧貝膽酸δΗ 0.61處 信號積分值為2.71，根據(jù)公式-1可計算得到奧貝膽酸的純度為99.1%，重復5次，相對標準 偏差0.2%。
[0099]上述雖然結(jié)合實施例對本發(fā)明的【具體實施方式】進行了描述，但并非對本發(fā)明保護 范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員 不需要付出創(chuàng)造性勞動即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護范圍以內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，其特征在于，包括以下 步驟： (1) 測定奧貝膽酸和內(nèi)標物各定量目標峰的縱向弛豫時間Ti; (2) 根據(jù)所測定的Ti值設置核磁共振波普儀的傾倒角和弛豫延遲時間(cU)，所述傾倒角 為30~90°，所述弛豫延遲時間（di)多（7/3 X Timax~5 X Timax)。2. 如權(quán)利要求1所述的一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，其 特征在于，所述傾倒角為30°、50°或90°，所述弛豫延遲時間（cU)為6~100s。3. 如權(quán)利要求1所述的一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，其 特征在于，所述核磁共振波譜儀的檢測參數(shù)為:共振頻率為400~600MHz，譜寬20ppm，測試 溫度26°C，采樣時間(AQ)為2.0~4. Is;采樣累加次數(shù)為32~128次。4. 如權(quán)利要求1所述的一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，其 特征在于，氘代試劑為重水、氘代甲醇或氘代二甲基亞砜。5. 如權(quán)利要求4所述的一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，其 特征在于，所述氘代試劑為氘代二甲基亞砜。6. 如權(quán)利要求1所述的一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，其 特征在于，所述奧貝膽酸的檢測濃度為14.7-15.5mg/mL。7. 如權(quán)利要求1所述的一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，其 特征在于，所述奧貝膽酸的定量目標峰化學位移為知0.61。8. 如權(quán)利要求1所述的一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，其 特征在于，所述內(nèi)標物為其質(zhì)子化學位移在3(116.00~6.27、31 16.27~3.50、3113.50~ 2.50或δΗ 〇. 61~0.00范圍內(nèi)，且室溫條件下不與奧貝膽酸發(fā)生化學反應的任意物質(zhì)。9. 如權(quán)利要求1或8所述的一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法， 其特征在于，所述內(nèi)標物為順丁烯二酸。10. 如權(quán)利要求1所述的一種基于氫核磁共振快速測定奧貝膽酸原料藥純度的方法，其 特征在于，測定奧貝膽酸及內(nèi)標物中各定量目標峰的積分面積的計算方法為對每一信號6 次積分取平均值。
【文檔編號】G01N24/08GK106018454SQ201610322784
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月16日
【發(fā)明人】王志偉, 林云良, 魏祥玉, 李鋒, 趙汝松, 閆慧嬌, 陳躍, 高紅梅
【申請人】山東省分析測試中心