利用魚的ACP活性監(jiān)測CO₂酸化水體的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用魚的酸性磷酸酶(ACP)監(jiān)測二氧化碳(CO2)酸化水體的方法，用魚作為監(jiān)測水體污染的生物樣本，魚的ACP作為監(jiān)測CO2酸化水體的敏感生物標(biāo)記物；本發(fā)明的優(yōu)點在于：本發(fā)明可以獲知待測水域中CO2酸化水體的pH值大小，以及獲知待測水域目前的危害程度；同時也能從生物的角度敏感地監(jiān)測CO2酸化程度和危害程度，為水體生態(tài)環(huán)境監(jiān)測、毒理診斷、調(diào)控和防治提供準(zhǔn)確、快速的科學(xué)方法。
【專利說明】
利用魚的ACP活性監(jiān)測C〇2酸化水體的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及利用生物敏感標(biāo)志物檢測水體酸化，更具體地說，本發(fā)明涉及一種利 用魚的ACP活性檢測水體酸化程度和危害程度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 自工業(yè)革命以來，由于人類活動和工農(nóng)業(yè)發(fā)展，大氣中的二氧化碳(C02)水平正以 前所未有的速度上升，導(dǎo)致海洋和其他水體吸收C0 2的量不斷增加，水體pH值下降，導(dǎo)致水 體酸化。
[0003] C〇2酸化如海水酸化，不同于一般意義上的酸化如鹽酸(HC1)酸化，C〇2酸化對魚類 的影響顯著大于HC1酸化的影響。例如同是pH=6.2，C〇2酸化對真鯛(Pagrus major)的卵和 幼體產(chǎn)生的毒性(死亡率60-100% )遠高于HC1酸化產(chǎn)生的毒性(死亡率1-4% )。由于⑶2分 子比H+更易穿透生物膜，與水反應(yīng)生成HK〇3,后者在碳酸酐酶的作用下，迅速分解成H+和 HC0 3-;在相同H+濃度下(pH=6.16)，C〇2衍生出的分子種類(HC03-、C03 2-)是HC1的150倍。HC1 酸化只是H+濃度升高；而C02進入生物體內(nèi)后可以直接破壞體液的酸堿平衡，加之C0 2酸化還 會使機體新陳代謝率及蛋白合成下降，攜氧能力下降，抑制機體正常生理活動，乃至死亡。 因此，由C〇2酸化升高導(dǎo)致的pH降低對水生動物產(chǎn)生的影響比單一 H+濃度增加而產(chǎn)生的影響 更為嚴重。
[0004] 海水酸化是C02酸化，是全球環(huán)境變化的重大問題之一。海水酸化可直接和間接影 響魚及其他水生生物的代謝、抗氧化、免疫防御、離子和酸堿平衡等，致其傷亡。海水酸化不 僅威脅某些物種，還可使整個海洋生態(tài)系統(tǒng)退化。海水酸化是亟待研究和積極應(yīng)對的全球 性重大環(huán)境問題。
[0005] 目前有關(guān)海水酸化(C02酸化水體）的研究剛起步，海水酸化對水生生物影響的研 究還少，對魚類影響的研究更少，海水酸化的生物效應(yīng)相對難以預(yù)測，并且尚無適宜的魚類 酶活性監(jiān)測C0 2酸化水體的酸化程度和危害程度，影響了海水酸化對水生生物影響的深入 研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu) 點。
[0007] 本發(fā)明還有一個目的就是提供一種利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，本 方法利用魚的ACP作為敏感生物標(biāo)記物，能敏感地表明水體中⑶2酸化的程度和危害程度， 為水體生態(tài)環(huán)境監(jiān)測、毒理診斷、調(diào)控和防治提供準(zhǔn)確、快速的科學(xué)方法。
[0008] 為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其他優(yōu)點，提供了一種利用魚的ACP活性監(jiān)測 C02酸化水體的方法。本檢測方法為獲取需要檢測的水域中的魚，并采用所述魚的ACP作為 敏感生物標(biāo)記物。其中，ACP是酸性磷酸酶的簡寫。
[0009] 優(yōu)選的是，所述魚的ACP活性與C02酸化水體的pH值大小呈負相關(guān)。
[0010] 優(yōu)選的是，建立魚的ACP活性與C〇2酸化水體的pH值大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將 待檢測水域中的同種同大小的魚的ACP活性與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，得到待檢測水域中0) 2酸 化水體的pH值大小。
[0011] 優(yōu)選的是，采用蛋白定量測定試劑盒、ACP測定試劑盒和可見分光光度計測定魚的 ACP活性。
[0012]優(yōu)選的是，所述魚的ACP活性測定包括如下步驟：
[0013] 步驟一、待測樣本處理:制備全魚勻漿，然后離心分層，取上層清液為待測樣本；
[0014] 步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本 加入1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍顯色劑，分別混勻，靜置，用分光光 度計并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質(zhì)的光密度，分別 記為1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度：
[0015]
[0016]步驟三、在空白管中加入雙蒸水0.03mL，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入濃度為0. lmg/mL的酚標(biāo) 準(zhǔn)應(yīng)用液0.03mL，在測定管中加入待測樣本0.03mL，在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加 入緩沖液〇. 5mL和基質(zhì)液0.5mL，然后充分混勻，37 °C水浴30分鐘；
[0017]步驟四、在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加入堿液lmL和顯色劑1.5mL，然后快 速混勻，靜置10分鐘，將空白管的溶液于可見光分光光度計調(diào)零后，使用lcm光徑于520nm 處，測標(biāo)準(zhǔn)管和測定管的光密度，分別記為標(biāo)準(zhǔn)0D值和測定0D值，然后代入如下公式計算 ACP活性：
[0018]
[0019] 其中，取樣量為0.03mL，在37°C時，每0.5h每克組織蛋白與基質(zhì)產(chǎn)生lmg酚，定義為 1個ACP活力單位。
[0020] 優(yōu)選的是，所述步驟一中全魚勻漿為全魚與濃度0.65%的魚用生理鹽水按質(zhì)量比 為1:9配置，且所述離心分層用冷凍離心機，11028g，4°C，離心10min。
[0021]優(yōu)選的是，所述步驟二中等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本均為0.05ml，蛋白 標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為〇.563g/L，分別加入考馬斯亮藍顯色劑的量均為3ml，靜置lOmin。
[0022]優(yōu)選的是，所述魚為海水青鏘或淡水青鏘。
[0023] 本發(fā)明至少包括以下有益效果:酸性磷酸酶(Acid phosphatase,ACP)是一種在酸 性條件下催化磷酸單酯水解生成無機磷酸的水解酶。它是魚體內(nèi)重要的代謝酶，參與信號 轉(zhuǎn)導(dǎo)、能量轉(zhuǎn)換等生命活動。主要存在于巨噬細胞、溶酶體內(nèi)，在正常情況下，ACP活性較低。 ACP對環(huán)境因素和機體pH變化非常敏感。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種基于魚 的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，該方法有利于預(yù)測海水酸化的生物效應(yīng)。對保護海水 酸化的首要沖擊者、水體生產(chǎn)力中的主要產(chǎn)物一魚類和其他生物，發(fā)展可持續(xù)的漁業(yè)和生 態(tài)系統(tǒng)具有現(xiàn)實意義。并且本發(fā)明可以利用魚的ACP監(jiān)測C0 2酸化水體的污染情況，通過魚 的ACP與C02酸化水體的pH值大小呈負相關(guān)，就可以快速準(zhǔn)確監(jiān)測到水體受到C02的酸化程度 和危害程度。
【具體實施方式】
[0024]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書 能夠據(jù)以實施。
[0025] 實施例1
[0026]本方案利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，獲取需要檢測的水域中的魚， 并采用所述魚的ACP作為敏感生物標(biāo)記物，通過檢測魚的ACP活性，然后比對同類同大小的 魚的ACP活性與C02酸化水體的pH值大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以檢測出水體受C0 2酸化的pH 值大小，不但檢測準(zhǔn)確，且敏感度高，而且能直觀反映C02酸化水體對生物的危害程度。
[0027] 實施例2
[0028]本方案利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，獲取需要檢測的水域中的魚， 并采用所述魚的ACP作為敏感生物標(biāo)記物，根據(jù)魚的ACP活性與水體受C02酸化的pH值大小 呈負相關(guān)，通過測定魚的ACP活性，然后比對同類同大小的魚的ACP活性與C0 2酸化水體的pH 值大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果檢測樣本魚的ACP活性比正常情況下的同類同大小的魚的ACP 活性高，則判斷水域受到C0 2酸化;ACP活性越高，則判斷水域C02酸化越嚴重，甚至可判斷是 否達到危害水體生物的程度。
[0029] 實施例3
[0030]本方案利用魚的ACP活性監(jiān)測⑶2酸化水體的方法，獲取需要檢測的水域中的魚， 并采用所述魚的ACP作為敏感生物標(biāo)記物。首先通過實驗建立魚的ACP活性與C02酸化水體 的pH值大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將待檢測水域中的同種同大小的魚的ACP活性與所述標(biāo) 準(zhǔn)曲線比對，得到待檢測水域中C0 2酸化的pH大小。
[0031 ]通過實驗建立魚的ACP活性與C02酸化水體的pH值大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下： [0032]采用30天齡海水青鏘稚魚作為監(jiān)測水污染的生物樣本，將稚魚分成5組，每組3個 平行進行，分別在表1所述的水環(huán)境中飼養(yǎng)，其中水域的PH8.1為對照組。飼養(yǎng)8周后，每個平 行取3尾魚樣品測定，每組測定3*3 = 9個數(shù)據(jù)，將每組9個數(shù)據(jù)數(shù)理統(tǒng)計后得到各組魚的ACP 活性如表2所示，根據(jù)表2的數(shù)據(jù)繪制魚的ACP活性與C02酸化水體的pH值大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲 線。
[0033] 表1 5組稚魚飼養(yǎng)的水域中C02酸化水體的pH值
[0035]用C02充氣系統(tǒng)持續(xù)泡控目標(biāo)pH值的酸化海水，以目前近海表層海水的平均值 (pH8.1)為對照組。通過向海水中充入高純C02氣體，用HENTEX pH/ORP控制器監(jiān)測并持續(xù)泡 控每個養(yǎng)殖槽中海水pH值，以保持各組實驗海水pH值的穩(wěn)定。飼養(yǎng)的其他條件是:每天三次 投喂200目飼料，總投喂量為魚體重的5%。每天詳細觀察和記錄魚的活動、攝食、畸形、死亡 等，8周后隨機采集魚樣品，分別稱魚體濕重，提取用于測定魚的ACP。
[0036] 表2 5組魚樣品的ACP活性
[0038]使用南京建成生物公司生產(chǎn)的蛋白定量測定試劑盒、ACP測定試劑盒和可見分光 光度計測定待測水域中的海水青鏘的ACP活性的具體步驟如下：
[0039]步驟一、待測樣本處理:制備全魚勻漿，然后離心分層，取上層清液為待測樣本；
[0040] 步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本 加入1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍顯色劑，分別混勻，靜置，用分光光 度計并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質(zhì)的光密度，分別 記為1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度：
[0041]
[0042]步驟三、在空白管中加入雙蒸水0.03mL，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入濃度為0. lmg/mL的酚標(biāo) 準(zhǔn)應(yīng)用液0.03mL，在測定管中加入待測樣本0.03mL，在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加 入緩沖液〇. 5mL和基質(zhì)液0.5mL，然后充分混勻，37 °C水浴30分鐘；
[0043] 步驟四、在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加入堿液lmL和顯色劑1.5mL，然后快 速混勻，靜置10分鐘，用空白管溶液于可見光分光光度計調(diào)零后，使用lcm光徑于520nm處， 測標(biāo)準(zhǔn)管和測定管的光密度，分別記為標(biāo)準(zhǔn)0D值和測定0D值，然后代入如下公式計算ACP活 性：
[0044]
[0045] 其中，取樣量為0.03mL，在37°C時，每0.5h每克組織蛋白與基質(zhì)產(chǎn)生lmg酚，定義為 1個ACP活力單位。
[0046] 然后將計算得海水青鏘的ACP活性，比對用表2的數(shù)據(jù)繪制魚的ACP活性與C02酸化 水體的pH值大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，不但可以知道水體是否受到C〇2酸化，而且從標(biāo)準(zhǔn)曲線中 可以知道水體中C〇2酸化的pH大小，更能知道水體對生物體危害程度。
[0047] 實施例4
[0048] 利用實驗可以建立任何魚種的魚的ACP活性與⑶2酸化水體的pH值大小關(guān)系的標(biāo) 準(zhǔn)曲線，然后取待測水域中的魚做樣本，只要做樣本的魚與建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的魚是同類同大 小的即可進行比對。
[0049] 利用蛋白定量測定試劑盒、ACP測定試劑盒和可見分光光度計測定待測水域中的 魚的ACP活性具體步驟如下：
[0050] 步驟一、待測樣本處理:取與建立標(biāo)準(zhǔn)曲線用魚一樣和大小相當(dāng)?shù)聂~制備全魚勻 漿，全魚勻漿為全魚與0.65%濃度的魚用生理鹽水按質(zhì)量比為1:9配置，然后離心分層用冷 凍離心機，1 l〇28g，4°C，離心10min分層，取上層清液為待測樣本；
[0051] 步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本 加入1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍顯色劑，分別混勻，靜置，預(yù)熱，用 分光光度計并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質(zhì)的0D，分 另IJ記為1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度：
[0052]
[0053]步驟三、在空白管中加入雙蒸水0.03mL，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入濃度為0. lmg/mL的酚標(biāo) 準(zhǔn)應(yīng)用液0.03mL，在測定管中加入待測樣本0.03mL，在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加 入緩沖液〇. 5mL和基質(zhì)液0.5mL，然后充分混勻，37 °C水浴30分鐘；
[0054]步驟四、在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加入堿液lmL和顯色劑1.5mL，然后快 速混勻，靜置10分鐘，用空白管溶液于可見光分光光度計調(diào)零后，使用lcm光徑于520nm處， 測標(biāo)準(zhǔn)管和測定管的光密度，分別記為標(biāo)準(zhǔn)0D值和測定0D值，然后代入如下公式計算ACP活 性：
[0055]
[0056] 其中，取樣量為0.03mL，在37 °C時，每0.5h每克組織蛋白與基質(zhì)產(chǎn)生lmg酚，為1個 ACP活力單位。
[0057] 將計算得魚的ACP活性，比對試驗建立魚的ACP活性與⑶2酸化水體的pH值大小關(guān) 系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，不但可以知道水體是否受C〇2酸化，而且從標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以知道水體中C〇2酸 化的pH值大小，更能知道水體對生物體危害程度。
[0058] 實施例5
[0059]利用實驗建立12周齡的淡水青鏘的ACP活性與C02水體的pH大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線， 然后取待測水域中的魚做樣本，只要取得樣本的魚與建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的魚是同類同大小的即 可進行比對。
[0060] 取得待測水域中12周齡的淡水青鏘做樣本，然后利用蛋白定量測定試劑盒、ACP測 定試劑盒和可見分光光度計測定待測水域中的該魚的ACP活性具體步驟如下：
[0061] 步驟一、待測樣本處理:取與建立標(biāo)準(zhǔn)曲線用魚一樣和大小相當(dāng)?shù)聂~制備全魚勻 漿，全魚勻漿為全魚與0.65%濃度的魚用生理鹽水按質(zhì)量比為1:9配置，然后離心分層用冷 凍離心機，1 l〇28g，4°C，離心10min分層，取上層清液為待測樣本；
[0062] 步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將雙蒸水、濃度為0.563g/L的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 和待測樣本各〇.〇5ml加入1、2、3號管中，并分別向各管加入考馬斯亮藍顯色劑3ml，分別混 勻，靜置lOmin，預(yù)熱到35°C，用分光光度計并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，波長595nm處，測 定1、2、3號管中溶液的0D，分別記為1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下公式計算得 待測樣本蛋白濃度：
[0063]
[0064]步驟三、在空白管中加入雙蒸水0.03mL，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入濃度為0. lmg/mL的酚標(biāo) 準(zhǔn)應(yīng)用液0.03mL，在測定管中加入待測樣本0.03mL，在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加 入緩沖液〇. 5mL和基質(zhì)液0.5mL，然后充分混勻，37 °C水浴30分鐘；
[0065]步驟四、在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加入堿液lmL和顯色劑1.5mL，然后快 速混勻，靜置10分鐘，用空白管溶液于可見光分光光度計調(diào)零后，使用lcm光徑于520nm處， 測標(biāo)準(zhǔn)管和測定管的光密度，分別記為標(biāo)準(zhǔn)0D值和測定0D值，然后代入如下公式計算得ACP 活性為 70 ? 01U/gprot:
[0066]
[0067] 其中，取樣量為0.03mL，在37 °C時，每0.5h每克組織蛋白與基質(zhì)產(chǎn)生lmg酚，為1個 ACP活力單位。
[0068] 將計算得魚的ACP活性和標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，得到待測水域的⑶2酸化的pH為7.57,這 樣既可以知道水體已受到C〇2酸化，也可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中知道水體中的C〇2酸化的pH大小，更 能知道水體對生物體危害程度。
[0069] 盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列 應(yīng)用范例，它完全適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地另 行修改他用，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特 定的細節(jié)和這里示出與描述的實施例。
【主權(quán)項】
1. 一種利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，其特征在于，獲取需要檢測的水域中 的魚，并采用所述魚的ACP作為敏感生物標(biāo)記物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，其特征在于，所述 魚的ACP活性與C0 2酸化水體的pH值大小呈負相關(guān)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，其特征在于，建 立魚的ACP活性與C0 2酸化水體的pH值大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將待檢測水域中的同種同 大小的魚的ACP活性與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，得到待檢測水域中C0 2酸化水體的pH值大小。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，其特征在于，采用 蛋白定量測定試劑盒、ACP測定試劑盒和可見分光光度計測定魚的ACP活性。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，其特征在于，所述 魚的ACP活性測定包括如下步驟： 步驟一、待測樣本處理:制備全魚勻漿，然后離心分層，取上層清液為待測樣本； 步驟二、待測樣本蛋白濃度的測定:分別將等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本加入 1、2、3號管中，并分別向各管加入等量的考馬斯亮藍顯色劑，分別混勻，靜置，用分光光度計 并用雙蒸水調(diào)零后，于lcm光徑，在波長595nm處，測定1、2、3號管中物質(zhì)的光密度，分別記為 1號0D值，2號0D值，3號0D值，然后代入如下公式計算得待測樣本蛋白濃度：步驟三、在空白管中加入雙蒸水0.03mL，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入濃度為0. lmg/mL的酚標(biāo)準(zhǔn)應(yīng) 用液0.03mL，在測定管中加入待測樣本0.03mL，在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加入緩 沖液0.5mL和基質(zhì)液0.5mL，然后充分混勻，37 °C水浴30分鐘； 步驟四、在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管中分別各加入堿液lmL和顯色劑1.5mL，然后快速混 勻，靜置10分鐘，將空白管的溶液于可見光分光光度計上調(diào)零后，使用lcm光徑于520nm處， 測標(biāo)準(zhǔn)管和測定管的光密度，分別記為標(biāo)準(zhǔn)OD值和測定OD值，然后代入如下公式計算ACP活 性：其中，取樣量為〇. 〇3mL，在37°C時，每0.5h每克組織蛋白與基質(zhì)產(chǎn)生lmg酚，定義為1個 ACP活力單位。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，其特征在于，所述 步驟一中全魚勻漿為全魚與濃度0.65%的魚用生理鹽水按質(zhì)量比為1:9配置，且所述離心 分層用冷凍離心機，ll〇28g，4°C，離心10min。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，其特征在于，所述 步驟^中等量的雙蒸水、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本均為〇 .〇5ml，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為0.563g/ L，分別加入考馬斯亮藍顯色劑的量均為3ml，靜置lOmin。8. 根據(jù)權(quán)利要求4-7任一項所述的利用魚的ACP活性監(jiān)測C02酸化水體的方法，其特征 在于，所述魚為海水青鏘或淡水青鏘。
【文檔編號】G01N1/28GK106053749SQ201610545356
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月12日
【發(fā)明人】許友卿, 丁兆坤, 劉永強, 唐旎, 張茜
【申請人】廣西大學(xué)