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      一種基于酵母微囊的口服靶向載體系統(tǒng)及其制備方法_2

      文檔序號(hào):8950772閱讀:來源:國(guó)知局
      nm的量子點(diǎn),分散均勻后于20°C繼續(xù)孵育I小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有發(fā)射波長(zhǎng)450nm的量子點(diǎn)的釀酒酵母微囊,其中量子點(diǎn)的包封率為46.5%。
      [0038]實(shí)施例2
      [0039]首先,取Ig釀酒酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化鈉溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,真空干燥后即得釀酒酵母空微囊。
      [0040]然后,將釀酒酵母空微囊分散于100 μ L的pH 9.4的碳酸鹽緩沖液中制得濃度為5mg/mL的空微囊混懸液,25°C孵育0.5小時(shí),再加入50 μ L濃度為0.lmg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化銨表面修飾的最大發(fā)射波長(zhǎng)在525nm的量子點(diǎn),分散均勻后于25°C繼續(xù)孵育8小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有發(fā)射波長(zhǎng)525nm的量子點(diǎn)的釀酒酵母微囊,其中量子點(diǎn)的包封率為70.8%。
      [0041]實(shí)施例3
      [0042]首先,取Ig葡萄汁有孢漢遜酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化鈉溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,真空干燥后即得葡萄汁有孢漢遜酵母空微囊。
      [0043]然后,將葡萄汁有孢漢遜酵母空微囊分散于100 μ L的pH 9.4的碳酸鹽緩沖液中制得濃度為10mg/mL的空微囊混懸液,30°C孵育I小時(shí),再加入50 μ L濃度為0.3mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化銨表面修飾的、粒徑15nm的、最大發(fā)射波長(zhǎng)在540nm的量子點(diǎn),分散均勻后于30°C繼續(xù)孵育12小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有發(fā)射波長(zhǎng)540nm的量子點(diǎn)的葡萄汁有孢漢遜酵母微囊,其中量子點(diǎn)的包封率為71.5%。
      [0044]實(shí)施例4
      [0045]首先,取Ig季也蒙有孢漢遜酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化鈉溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,真空干燥后即得季也蒙有孢漢遜酵母空微囊。
      [0046]然后,將季也蒙有孢漢遜酵母空微囊分散于100 μ L的pH 11.0的碳酸鹽緩沖液中制得濃度為10mg/mL的空微囊混懸液,37°C孵育I小時(shí),再加入50 μ L濃度為0.2mg/mL的聚二稀丙基二甲基氯化錢表面修飾的、粒徑20nm的、最大發(fā)射波長(zhǎng)在620nm的量子點(diǎn),分散均勻后于37°C繼續(xù)孵育24小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有發(fā)射波長(zhǎng)620nm的量子點(diǎn)的季也蒙有孢漢遜酵母微囊,其中量子點(diǎn)的包封率為76.7%。
      [0047]實(shí)施例5
      [0048]首先,取Ig東方伊薩酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化鉀溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,
      真空干燥后即得東方伊薩酵母空微囊。
      [0049]然后,將東方伊薩酵母空微囊分散于100 μ L的pH 9.0的磷酸鹽緩沖液中制得濃度為lmg/mL的酵母空微囊混懸液,40°C下恒溫孵育I小時(shí),再加入10 μ L濃度為10mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化銨表面修飾的、粒徑5nm的氧化鐵納米粒,分散均勻后于40°C繼續(xù)孵育36小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有氧化鐵納米粒的東方伊薩酵母微囊,酵母微囊的氧化鐵納米粒負(fù)載率為12.4%。
      [0050]實(shí)施例6
      [0051]首先,取Ig畢赤克魯維酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化鉀溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,
      真空干燥后即得畢赤克魯維酵母空微囊。
      [0052]然后,將畢赤克魯維酵母空微囊分散于100 μ L的pH 11的碳酸鹽緩沖液中制得濃度為2mg/mL的酵母空微囊混懸液,45°C下孵育I小時(shí),再加入10 μ L濃度為25mg/mL的聚乙烯亞胺表面修飾的、粒徑1nm的氧化鐵納米粒,分散均勻后于40°C繼續(xù)孵育48小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有氧化鐵納米粒的畢赤克魯維酵母微囊,酵母微囊的氧化鐵納米粒負(fù)載率為14.9%。
      [0053]實(shí)施例7
      [0054]首先,取Ig膜璞畢赤酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化鈉溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,
      真空干燥后即得膜璞畢赤酵母空微囊。
      [0055]然后,將膜璞畢赤酵母空微囊分散于100 μ L的pH 10.0的碳酸鹽緩沖液中制得濃度為10mg/mL的空微囊混懸液,37°C下恒溫孵育I小時(shí),再加入20 μ L濃度為1.0mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化銨表面修飾的最大發(fā)射波長(zhǎng)在620nm的量子點(diǎn),分散均勻后于37°C繼續(xù)孵育72小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有發(fā)射波長(zhǎng)620nm的量子點(diǎn)的膜璞畢赤酵母微囊,其中量子點(diǎn)的包封率為80.2%。
      [0056]實(shí)施例8
      [0057]首先,取Ig美極梅奇酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化納溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,
      真空干燥后即得美極梅奇酵母空微囊。
      [0058]然后,將美極梅奇酵母空微囊分散于100 μ L的pH 9.4的碳酸鹽緩沖液中制得濃度為15mg/mL的酵母空微囊混懸液,50°C下恒溫孵育0.5小時(shí),再加入10 μ L濃度為30mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化銨表面修飾的、粒徑30nm的氧化鐵納米粒,分散均勻后于50°C繼續(xù)孵育48小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有氧化鐵納米粒的美極梅奇酵母微囊,酵母微囊的氧化鐵納米粒負(fù)載率為24.8%。
      [0059]實(shí)施例9
      [0060]首先,取Ig紅冬孢酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化納溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,
      真空干燥后即得紅冬孢酵母空微囊。
      [0061]然后,將紅冬孢酵母空微囊分散于100 μ L的pH 11的碳酸鹽緩沖液中制得濃度為I Omg/mL的酵母空微囊混懸液,60°C下恒溫孵育0.5小時(shí),再加入20 μ L濃度為20mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化銨表面修飾的、粒徑50nm的氧化鐵納米粒,分散均勻后于60°C繼續(xù)孵育48小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有氧化鐵納米粒的紅冬孢酵母微囊,酵母微囊的氧化鐵納米粒負(fù)載率為35.4%。
      [0062]實(shí)施例10
      [0063]首先,取Ig假絲酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化納溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,真空干燥后即得假絲酵母空微囊。
      [0064]然后,將假絲酵母空微囊分散于200 μ L的pH 9.2的磷酸鹽緩沖液中制得濃度為5mg/mL的酵母空微囊混懸液,40°C下恒溫孵育I小時(shí),再加入20 μ L濃度為10mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化銨表面修飾的氧化鐵納米粒,分散均勻后于40°C繼續(xù)孵育48小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有氧化鐵納米粒的假絲酵母微囊,酵母微囊的氧化鐵納米粒負(fù)載率為30.8%。
      [0065]實(shí)施例11
      [0066]首先,取Ig釀酒酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化納溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,真空干燥后即得釀酒酵母空微囊。
      [0067]然后,將1mg吲哚美辛和5mg分子量為25kDa的枝化聚乙烯亞胺溶于0.5mL 二甲基亞砜中,在去離子水中透析去除有機(jī)溶劑,得到粒徑為150nm、表面電位為20mV的吲哚美辛/枝化聚乙烯亞胺納米粒。
      [0068]最后,將釀酒酵母空微囊分散于500 μ L的去離子水中制得濃度為40mg/mL的酵母空微囊混懸液,37°C下恒溫孵育2小時(shí),再加入1000 μ L濃度為20mg/mL的上述吲哚美辛/枝化聚乙烯亞胺納米粒,分散均勻后于37°C繼續(xù)孵育24小時(shí),至上清液澄清后,離心水洗,干燥后即得到負(fù)載有吲哚美辛/枝化聚乙烯亞胺納米粒的釀酒酵母微囊,酵母微囊的吲哚美辛負(fù)載量為26.9%。
      [0069]實(shí)施例12
      [0070]首先,取Ig釀酒酵母分散于15mL濃度為IM的氫氧化納溶液中,于80°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心10分鐘,棄上清,雙蒸水洗滌2次后,加入15mL雙蒸水分散均勻;再用濃度為2.5M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-5,60°C恒溫孵育I小時(shí)后轉(zhuǎn)速3000rpm離心水洗2次,去上清,再加入10mL異丙醇洗滌4次后,用10mL丙酮洗2次,離心棄上清,真空干燥后即得釀酒酵母空微囊。
      [0071]然后,將25mg吲哚美辛和1mg分子量為2kDa的枝化聚乙烯亞胺溶于1.0mL 二甲基亞砜中,在去離子水中透析去除有機(jī)溶劑,得到粒徑為210nm、表面電位為28mV的吲哚美辛/枝化聚乙烯亞胺納米粒。
      [0072]最后,將釀酒酵母空微囊分散于100 μ L的去離子
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