延齡草皂苷類物質(zhì)及其制劑的制備方法與其在制備治療老年癡呆及阿爾茨海默病藥物中應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種延齡草皂苷類物質(zhì)的制備方法及其制劑的制備方法與其在制備 治療老年癡呆以及阿爾茨海默病藥物中的應(yīng)用，屬于中醫(yī)藥制備技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 延齡草為百合科延齡草屬植物延齡草TrilliumtschonoskiiMaxim?，俗名頭頂 一顆珠、芋兒七、獅兒七等，是傳統(tǒng)的名貴中藥，有延年益壽的功效。主治頭暈?zāi)垦?、失眠、?打損傷、外傷出血、神經(jīng)衰弱、高血壓病、腦震蕩后遺癥等疾病，是恩施土家族著名民間藥之 一。目前國內(nèi)外對延齡草屬植物的藥理活性研究表明延齡草有較強(qiáng)的抗炎、免疫調(diào)節(jié)、改善 大鼠學(xué)習(xí)記憶功能和抗衰老等作用。發(fā)明人利用H/MAD模型對延齡草的藥理活性進(jìn)行初步 研究，證實(shí)延齡草根及根莖的70%乙醇提取物具有明顯改善癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，同 時(shí)延齡草的含藥腦脊液具有抗A0 25 35致PC12細(xì)胞凋亡的生物活性，深入研究確定延齡草 85%乙醇洗脫物為延齡草治療異質(zhì)性及多因性老年癡呆以及阿爾茨海默病模型大鼠的有 效部位。
[0003] 化學(xué)研究表明，有效部位85%乙醇洗脫部位以留體皂苷類成分為主，留體皂苷總 含量大于90%，其中主要為偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)-P-D-葡萄糖 苷（pennogenin-3-〇-a-L-rhamnopyranosyl-(1 一 2) - 0 -D-glucopyranoside)、偏諾阜 苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1- 4) _[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]_ 0-D-葡萄糖苷 (pennogenin-3-〇-a-L-rhamnopyranosyl- (1 一 4) - [a-L-rhamnopyranosyl- (1 一 2) ] - 0 -D-glucopyranoside)和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡喃鼠李糖 基（1 -4)-[a-L_P比喃鼠李糖基（1 -2)]-0_D-葡萄糖苷（pennogenin-3-〇-a-L-rha mnopyranosyl- (1 一 4) _a-L-rhamnopyranosyl_ (1 一 4) _ [a_L-rhamnopyranosyl_ (1 一 2) ] _ 0 -D-glucopyranoside)，上述三種阜苷既是延齡草藥材的指標(biāo)性和特征性成分，又是有效部 位85%乙醇洗脫部位的指標(biāo)性和特征性成分。進(jìn)一步藥理研究證實(shí)有效部位中偏諾皂苷 元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) - 0 -D-葡萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖 基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃 鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡 萄糖苷為延齡草治療異質(zhì)性及多因性老年癡呆以及阿爾茨海默病的有效成分。上述研究 還沒有報(bào)道，我們通過系統(tǒng)的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究，首先發(fā)現(xiàn)其對由衰老、心腦血管疾?。ㄐ呐K 病、高血壓、動脈粥樣硬化和短暫性腦缺血發(fā)作等）導(dǎo)致腦低灌注狀態(tài)、淀粉樣蛋白AP沉 積病因形成的老年癡呆以及阿爾茨海默病疾病具有良好的治療作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的是提供一種延齡草皂苷類物質(zhì)及其制劑的制備方法與其在制備治療 老年癡呆以及阿爾茨海默病藥物中應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明采用了下述技術(shù)方案。
[0006] 延齡草皂苷類物質(zhì)中偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)-0 -D-葡萄 糖苷（pennogenin_3-〇-a-L_rhamnopyranosyl-(l一 2)-0 -D-glucopyranoside)、偏諾阜 苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-[a-L_吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷 (pennogenin-3-〇-a-L-rhamnopyranosyl- (1 一 4) - [a-L-rhamnopyranosyl- (1 一 2) ] - 0 -D-glucopyranoside)和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡喃鼠李糖 基（1 - 4) - [a-L-P比喃鼠李糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷（pennogenin-3-〇-a-L-rham nopyranosyl-(1 一 4) _a_L-rhamnopyranosyl_ (1 一 4) _ [a_L-rhamnopyranosyl_ (1 一 2) ] _ 0 _ D-glucopyranoside)的制備方法，其特征在于步驟如下：
[0007] (1).將延齡草藥材粉碎成粗粉，用0-100%乙醇浸泡，加入4-12倍量溶劑加熱回 流提取若干次，過濾，合并濾液；
[0008] (2).上述濾液減壓濃縮至0. 5-1. 5g生藥材/ml，冷藏過夜，析膠，過濾，濾液再用 有機(jī)溶劑萃取或?yàn)V液上大孔吸附樹脂進(jìn)行梯度洗脫，回收有機(jī)溶劑，得浸膏上硅膠柱；
[0009] (3).上硅膠柱后依次用三氯甲烷：甲醇或二氯甲烷：甲醇或三氯甲烷：甲醇：水或 二氯甲烷：甲醇：水梯度洗脫，以上述延齡草皂苷類物質(zhì)中偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠 李糖基（1 - 2) - 0-D-葡萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [a-L-吡 喃鼠李糖基（1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 -4)-a-L_吡喃鼠李糖基（1 -4)-[a-L_吡喃鼠李糖基（1 -2)]-P-D-葡萄糖苷的 3種皂苷作為對照品TLC或HPLC檢測，合并相應(yīng)流份；
[0010] (4).將上述延齡草皂苷類物質(zhì)中偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - 0 -D-葡萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡 喃鼠李糖基（1 -4)-[a-L_吡喃鼠李糖基（1 -2)]-P-D-葡萄糖苷的相應(yīng)流份減壓濃 縮蒸干，用適量乙醇溶解，過濾，減壓回收乙醇至含醇量為10-40%之間，析膠，過濾，濾液中 加入適量的聚酰胺，攪拌0. 5-3小時(shí)，靜置4-24小時(shí)，過濾，濾液中加入適量活性炭，攪拌 0. 5-3小時(shí)，靜置4-24小時(shí)，過濾，濾液用噴霧干燥或冷凍干燥法進(jìn)行干燥，收集噴霧干燥 粉或凍干粉，用10-95%乙醇結(jié)晶并重結(jié)晶，即得。
[0011] 更具體地，步驟（1)中，加入4-12倍量溶劑加熱回流提取2-4次，每次1-3小時(shí)。
[0012] 更具體地，步驟（2)中，于0-4°C冷藏過夜。
[0013] 更具體地，步驟（2)中，減壓濃縮溫度為45-80°C。
[0014] 更具體地，步驟（2)中，濾液經(jīng)大孔吸附樹脂富集，依次用乙醇水由0-50%洗脫， 再用乙醇水由50-95%洗脫得到各洗脫部位，主要收集乙醇水為60-85%的洗脫部位，回收 洗脫液得浸膏上硅膠柱。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選，步驟（3)中主要收集三氯甲烷：甲醇：水為65 :35 :1或60 :30 :1的洗 脫流份。
[0016] 前述方法制備的延齡草皂苷類物質(zhì)，其有效成分為偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡 喃鼠李糖基（1 - 2)-P-D-葡萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠 李糖基（1 -4)-a-L_吡喃鼠李糖基（1 -4)-[a-L_吡喃鼠李糖基（1 -2)]-P-D-葡萄 糖苷中的一種或多種，或其該物質(zhì)中的皂苷元的第21位和第27位的轉(zhuǎn)化羥甲基的羥基或 17位羥基或所有糖基的醇羥基被乙酰基、脂肪鏈烷烴基、芳香族取代基、酰胺基中的任意一 種取代，或者是水解后會廣生偏諾阜苷兀 _3_0_a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) - 0 -D-葡萄 糖苷的物質(zhì)，可用于制備治療老年癡呆以及阿爾茨海默病的藥物，所述藥物包括口服液、膠 囊、片劑、泡騰片和注射劑等各種劑型，所述藥物還包括各種單方和復(fù)方制劑。
[0017] 所涉及的老年癡呆以及阿爾茨海默病是由衰老、心腦血管疾?。ㄐ呐K病、高血壓、 動脈粥樣硬化和短暫性腦缺血發(fā)作等）導(dǎo)致腦低灌注狀態(tài)、淀粉樣蛋白AP沉積病因形成 的老年癡呆以及阿爾茨海默病疾病中的任意一種。
[0018] 本發(fā)明公開了一種含偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)-P-D-葡 萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-a-L_吡 喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]_P-D-葡萄糖苷中的一種或多種 成分的片劑制備方法，其特征是，包括如下組分：偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - 0 -D-葡萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷中的一種或多種成 分為0. 25-15g，乳糖為3-8g，糊精為3-12g，微晶纖維素為3-8g，硬脂酸鎂為0. 2-0. 5g， 按適當(dāng)比例混合均勻，濕法制粒，最后加入硬脂酸鎂混勻壓片，制成每片中含偏諾皂苷 元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) - 0 -D-葡萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖 基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃 鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡 萄糖苷中的一種或多種有效成分5-300mg。
[0019] 本發(fā)明公開了一種含偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)-P-D-葡 萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-a-L_吡 喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]_P-D-葡萄糖苷中的一種或多種 成分的膠囊制備方法，其特征是，包括如下組分：偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - 0 -D-葡萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]_P-D-葡萄糖苷中的一種或多種 成分為0. 25-15g，乳糖為3-8g，糊精為3-12g，微晶纖維素為3-8g，按適當(dāng)比例混合均 勻，濕法制粒，灌裝成膠囊，制成每粒膠囊中含偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - 0 -D-葡萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷中的一種或多種有效 成分 5_300mg。
[0020] 本發(fā)明公開了一種含偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)-P-D-葡 萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-a-L_吡喃 鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-0-D-葡萄糖苷中的一種或多種成 分的水針劑制備方法，其特征是，包括如下組分：偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2) - 0 -D-葡萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李 糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷中的一種或多種成分 為100-6000mg溶于適量注射用水中，加入計(jì)量的注射用水溶性輔料，加0. 2-1 %的活性炭 除去熱源，調(diào)節(jié)PH至6. 0-7. 5,經(jīng)微孔濾膜超濾后，補(bǔ)充注射用水至定容，灌裝于安瓿瓶中 或輸液瓶中，容封/乳蓋，檢驗(yàn)合格后，包裝即得，制成每只安瓿瓶中或輸液瓶中含偏諾皂 苷兀 _3-〇_a-L-R比喃鼠李糖基（1 - 2) - 0 -D-葡萄糖苷、偏諾阜苷兀-3-0-a-L-R比喃鼠李 糖基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡 喃鼠李糖基（1 - 4) -a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4) - [a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2) ] - 0 -D-葡 萄糖苷中的一種或多種有效成分5-300mg。
[0021] 本發(fā)明公開了一種含偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 2)-P-D-葡 萄糖苷、偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)_[a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷和偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基（1 - 4)-a-L_吡喃 鼠李糖基（1 - 4)-[a-L_吡喃鼠李糖基（1 - 2)]-P-D-葡萄糖苷中的一種或多種成 分的粉針劑制備方法，其特征是，包括如下組分：偏諾皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基