一種金霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明屬于發(fā)酵培養(yǎng)的技術(shù)領域，涉及到發(fā)酵培養(yǎng)基的配置，具體涉及一種金霉 素的發(fā)酵培養(yǎng)基，本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基用于生產(chǎn)金霉素可大幅提高效價。
【背景技術(shù)】
[0002] 金霉素屬四環(huán)類抗生素，由金色鏈霉菌兩級發(fā)酵后干燥制得。金霉素具有廣譜抗 菌作用，其抗菌譜與四環(huán)素相似。金霉素預混料中的主要有效成分為金霉素韓鹽，對多數(shù) 革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有抗菌作用。金霉素預混劑一般添加在家畜的飼料中飼 喂，用于抑制細菌的生長，提高飼料轉(zhuǎn)化率。鹽酸金霉素具有治療作用，一般用于家畜的 飲水劑中。金霉素的藥用機制是主要是干擾蛋白質(zhì)的合成。金霉素在使用過程中直接添加 到動物飼料中，主要用于沙眼、肺炎、敗血癥、淋巴肉芽腫、斑疫傷寒及其它細菌性感染。
[0003] 我國是從上世紀50年代開始生產(chǎn)金霉素。上海第三制藥廠是我國第一家生產(chǎn)金 霉素的企業(yè)，當時發(fā)酵單位不到l〇〇〇〇ug/ml。多年來，國內(nèi)金霉素的發(fā)酵單位提高較緩 慢，但在產(chǎn)量、生產(chǎn)能力及系列產(chǎn)品的開發(fā)等方面發(fā)展較快。20世紀80年代后期，國內(nèi)金 霉素平均發(fā)酵單位為18000ug/ml，單罐最高發(fā)酵單位為20000ug/ml左右，提煉總收率為 80-90%。20世紀末期，國內(nèi)金霉素發(fā)酵水平小幅提高，平均達到22000ug/ml。近年來， 金霉素平均發(fā)酵單位提高到23000ug/ml以上，收率提高到95%以上，但是發(fā)酵單位還是遠 低于其他四環(huán)類抗生素的發(fā)酵水平。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)金霉素效價低的技術(shù)問題， 提供了一種可大幅提高發(fā)酵效價的金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0005] 本發(fā)明為實現(xiàn)其目的采用的技術(shù)方案是：
[0006] -種金霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成分和含量為：葡萄糖25_35g/ L、植物油50-70g/L、黃豆餅粉30-50g/L、碳酸鈣5-7g/L、玉米漿20-30g/L、硫酸銨4-6g/L、 氯化鈉3-5g/L、磷酸二氫鉀0. 2-0. 3g/L、硫酸鎂0. 2-0. 3g/L。
[0007] -種金霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成分和含量為：葡萄糖28_32g/ L、植物油55-65g/L、黃豆餅粉36-44g/L、碳酸鈣5. 5-6. 5g/L、玉米漿21-26g/L、硫酸銨 4. 5-5. 5g/L、氯化鈉 3. 5-4. 5g/L、磷酸二氫鉀 0· 23-0. 27g/L、硫酸鎂 0· 23-0. 27g/L。
[0008] -種金霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成分和含量為：葡萄糖26g/L、植 物油53g/L、黃豆餅粉32g/L、碳酸鈣6g/L、玉米漿23g/L、硫酸銨4. 8g/L、氯化鈉3. 6g/L、磷 酸二氫鉀〇· 22g/L、硫酸鎂0· 21g/L。
[0009] -種金霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成分和含量為：葡萄糖30g/L、植 物油60g/L、黃豆餅粉40g/L、碳酸媽5. 7g/L、玉米楽；22g/L、硫酸銨5g/L、氯化鈉4g/L、磷酸 二氫鉀 0· 25g/L、硫酸鎂 0· 25g/L。
[0010] 一種金霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成分和含量為：葡萄糖34g/L、植 物油68g/L、黃豆餅粉47g/L、碳酸鈣6. 7g/L、玉米漿28g/L、硫酸銨5. 8g/L、氯化鈉4. 7g/L、 磷酸二氫鉀〇· 28g/L、硫酸鎂0· 29g/L。
[0011] 所述植物油為豆油、葵花籽油、花生油中的一種。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明突破了發(fā)酵領域的傳統(tǒng)觀念，在發(fā)酵培養(yǎng)基中使用 了大量的油，既提高了菌株的碳源利用度，又解決了發(fā)酵過程中的產(chǎn)泡沫問題，同時大幅 提高了發(fā)酵效價，能使金霉素發(fā)酵120小時的搖瓶效價達到29000U/mL以上，最高能達到 31502U/mL。
[0013] 本發(fā)明金霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基用于發(fā)酵培養(yǎng)金霉素時，實現(xiàn)發(fā)酵效價提高的關鍵在 于加入了大量的植物油，植物油在發(fā)酵過程中發(fā)揮著多重作用，主要發(fā)揮碳源、消沫劑、氧 載體等作用，能夠有效提高金霉素產(chǎn)量。植物油在微生物代謝的不同階段發(fā)揮不同的作用， 不僅能夠降低抗生素生產(chǎn)成本，而且能有效提高金霉素的產(chǎn)量。本發(fā)明培養(yǎng)基中葡萄糖在 發(fā)酵前期發(fā)揮作用，植物油是在發(fā)酵的中后期作為緩效碳源提供能量，此外植物油還起到 了消泡作用，其解決了現(xiàn)有技術(shù)中淀粉發(fā)酵液粘度大，產(chǎn)泡沫等負面影響。
[0014] 植物油提高金霉素效價的原理可通過兩點說明：一是油脂是作為緩慢利用碳源可 避免迅速利用碳源引起的分解代謝物的阻遏作用；二是油脂是短鏈脂肪酸產(chǎn)物的主要來 源，可為聚酮體途徑抗生素合成提供大量前體物質(zhì)。具體來說，油脂作為碳源被利用，主要 是脂肪酸發(fā)揮作用，油脂中的長鏈脂肪酸先被乙酰輔酶A硫酯活化，進入氧化途徑， 每循環(huán)一次脂肪酸鏈掉下兩個碳碎片為乙酰輔酶Α，剩余的脂酰輔酶A化合物重新進入降 解循環(huán)，降解產(chǎn)物乙酰輔酶A可以作為產(chǎn)物合成的前體。
【具體實施方式】
[0015] 本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)金霉素效價低的技術(shù)問題， 提供了一種可大幅提高發(fā)酵效價的金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進 一步的說明。
[0016] 實施例1
[0017] 培養(yǎng)基配置：按照表1的配方稱取各組分，分別加純化水溶解、定容至lOOOmL，調(diào) 節(jié)pH至6. 8 ;編號分別為實驗組1、2、3、4、5、6、7、8、9、對照組。
[0018] 表 1
[0019] CN 105177099 A I兄明書 3/8 頁
[0020] 分裝滅菌：將實驗組1-9和對照組中各自的1000 mL培養(yǎng)基分別分裝到3個容積為 250mL的搖瓶中，分別記作搖瓶1、搖瓶2、搖瓶3,每瓶裝量50mL，剩余料液棄之，加6g棉塞， 兩層紗布，一層牛皮紙包頭，于121°C滅菌30分鐘，冷卻至室溫，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。接種：按 10%的接種量向本實施例制備的發(fā)酵培養(yǎng)基中接入金霉素產(chǎn)生菌金色鏈霉菌的種子培養(yǎng) 物，于溫度29-31Γ下培養(yǎng)120小時后檢測效價，結(jié)果見表2。
[0021] 表 2
[0023] 由表2可知，本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵的金霉素效價遠高于現(xiàn)有技術(shù)培養(yǎng)基發(fā)酵 的金霉素效價，基于此，植物油的大量加入與其他成分的相結(jié)合實現(xiàn)了金霉素效價的提高， 植物油由于油價格較高和代謝需消耗大量的氧使供養(yǎng)能耗上升等原因，現(xiàn)有技術(shù)中植物 油的用量的加入只能使植物油作為一種優(yōu)良的消泡劑，普遍認為植物油的加入量在21g/L， 本發(fā)明大膽嘗試，將植物油的用量提高1倍以上用量，并通過與其他組分的用量和成分的 結(jié)合解決了供氧能耗的問題，而且使金霉素的發(fā)酵效價有了大幅度的提升。
[0024] 實施例2.
[0025] 培養(yǎng)基配置：按照表3的配方稱取各組分，分別加純化水溶解、定容至lOOOmL，調(diào) 節(jié)pH至6. 8 ;編號分別為實驗組1、2、3、對照組。
[0026]表 3
[0029] 分裝滅菌：將實驗組1-3和對照組中各自的1000 mL培養(yǎng)基分別分裝到5個容積為 250mL的搖瓶中，每瓶裝量50mL，剩余料液棄之，加6g棉塞，兩層紗布，一層牛皮紙包頭，于 121°C滅菌30分鐘，冷卻至室溫，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0030] 接種：按10%的接種量向本實施例制備的發(fā)酵培養(yǎng)基中接入金霉素產(chǎn)生菌金色 鏈霉菌的種子培養(yǎng)物，于溫度29-31°C下培養(yǎng)120小時后檢測效價，結(jié)果見表4。
[0031] 表 4
[0033] 實施例3.
[0034] 培養(yǎng)基配置：按照表5的配方稱取各組分，分別加純化水溶解、定容至lOOOmL，調(diào) 節(jié)pH至6. 8 ;編號分別為實驗組1、2、3、對照組。
[0035] 表 5
[0036] CN 105177099 A 說明書 5/8 頁
[0037] 分裝滅菌：將實驗組1-3和對照組中各自的1000 mL培養(yǎng)基分別分裝到3個容積為 250mL的搖瓶中，每瓶裝量50mL，剩