一種香蕉枯萎病的生物防治方法及其生防制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001 ]本發(fā)明屬于香蕉病害生物防治領(lǐng)域，具體涉及一種香蕉枯萎病的生物防治方法及其生防制劑。
【背景技術(shù)】
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[0002]香蕉枯萎病是一種侵染香蕉植株維管束的病害，其主要特征是病株凋萎和維管束變色腐爛，是一種毀滅性病害，是國際植物檢疫對象，由尖孢鐮刀菌古巴?；?Fusariumoxysporum f.sp.cubense)侵染引起。尖孢鐮刀菌(F.0xysporum)是一種世界性分布的土傳病原真菌，寄主范圍廣泛，可引起瓜類、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多種植物枯萎病的發(fā)生。尖孢鐮刀菌屬半知菌類(Imperfecti fungi)、從梗孢目(Moniliales)、瘤座孢科(Tuberculariaceae)、鐮刀菌屬(Fusarium)。病原菌在土壤中存活時間達(dá)數(shù)年之久，一般減產(chǎn)20%以上，嚴(yán)重的田塊甚至絕收。
[0003]帶病蕉苗和帶病菌土壤是香蕉枯萎病初侵染源。高溫多雨、土壤酸性、砂壤土、月巴力低、土質(zhì)黏重、排水不良、下層土滲透性差和耕作傷根等因素，有利于病害發(fā)生。感病的春植蕉一般在6-7月開始發(fā)病，8-9月加重，10-11月進入發(fā)病高峰。香蕉枯萎病通過帶菌的香蕉種苗、土壤和農(nóng)機具等調(diào)運和搬移進行遠(yuǎn)距離傳播;通過帶菌的水、分生孢子進行近距離擴散。
[0004]香蕉枯萎病傳統(tǒng)的防治方法主要有化學(xué)農(nóng)藥防治和栽種抗病品種。化學(xué)農(nóng)藥防治不僅效果一般，還會污染環(huán)境和影響香蕉品質(zhì);抗病品種大多只能抗香蕉枯萎病單個生理小種，在其他生理小種入侵時存在大面積爆發(fā)的危險。香蕉枯萎病的生物防治是目前最受關(guān)注的方法，因此，開發(fā)香蕉枯萎病的生物防治方法及其生防制劑對蕉農(nóng)和香蕉產(chǎn)業(yè)意義重大。

【發(fā)明內(nèi)容】

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[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種香蕉枯萎病的生物防治方法及其生防制劑。
[0006]本發(fā)明的香蕉枯萎病的生物防治方法包括:香蕉組培苗移栽時枯萎病拮抗菌定殖、香蕉苗大田移栽時枯萎病拮抗菌定殖、香蕉植株生長期枯萎病拮抗菌定殖，具體為:
[0007]A.香蕉組培苗移栽時枯萎病拮抗菌定殖:在香蕉組培苗移栽后噴施香蕉枯萎病拮抗復(fù)合微生物菌劑或?qū)⑾憬犊菸∞卓箯?fù)合微生物菌劑拌入組培苗移栽基質(zhì)或土壤;香蕉枯萎病拮抗復(fù)合微生物菌劑稀釋200-1000倍噴施，每隔10-15天噴施一次，共三次;香蕉枯萎病拮抗復(fù)合微生物菌劑拌入組培苗移栽基質(zhì)的量為每10kg基質(zhì)中加入0.5-5.0kg香蕉枯萎病拮抗復(fù)合微生物菌劑。
[0008]B.香蕉苗大田移栽時枯萎病拮抗菌定殖:在香蕉苗大田移栽前塘施香蕉枯萎病拮抗生物有機肥，移栽后灌施香蕉枯萎病拮抗復(fù)合微生物菌劑;香蕉枯萎病拮抗生物有機肥在香蕉移栽前按每株2-10kg施入塘內(nèi)；香蕉枯萎病拮抗復(fù)合微生物菌劑在香蕉苗移栽后稀釋200-1000倍液灌施，每株2-10kg。
[0009]C.香蕉植株生長期枯萎病拮抗菌定殖:在香蕉生長期追施香蕉枯萎病拮抗生物有機肥和(或)香蕉枯萎病拮抗復(fù)合微生物菌劑;香蕉枯萎病拮抗生物有機肥在香蕉植株周圍開溝穴施，每株5_20kg，每個月追施一次，共3-4次；香蕉枯萎病拮抗復(fù)合微生物菌劑稀釋200-1000倍后灌施香蕉根部，每株5-20kg，每個月追施一次，共3-4次。
[0010]上述A步驟所述香蕉組培苗苗移栽時枯萎病拮抗菌的兩種定殖方式能單獨采用一種，亦能兩種同時米用；
[0011 ]上述B步驟所述香蕉苗大田移栽時枯萎病拮抗菌的定殖，能單獨采用含香蕉枯萎病拮抗菌劑的復(fù)合微生物菌劑或生物有機肥進行定殖，亦能兩者同時采用進行定殖；
[0012]上述C步驟所述香蕉植株生長期枯萎病拮抗菌定殖，能單獨追施含香蕉枯萎病拮抗菌劑的復(fù)合微生物菌劑或生物有機肥，亦能兩者同時追施；
[0013]所述的香蕉枯萎病的生物防治方法，在香蕉組培苗移栽時枯萎病拮抗菌定殖、香蕉苗移栽時枯萎病拮抗菌定殖、香蕉植株生長期枯萎病拮抗菌定殖三個過程能單獨采用其中一部分措施，亦能全部措施一同采用。
[0014]用于本發(fā)明的香蕉枯萎病的生物防治方法中的生防制劑包括:香蕉枯萎病拮抗復(fù)合微生物菌劑和香蕉枯萎病拮抗生物有機肥;該生防制劑經(jīng)由如下步驟得到:
[0015]—、將保藏在北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號、中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為CGMCC N0.1211、保藏日為2004年8月30日的褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)YKT41 株，保藏號為CGMCC N0.1212、保藏日為2004年8月30 日的越南伯克霍爾德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418株，保藏號為CGMCC N0.1213、保藏日為2004年8月30日的巨大芽孢桿菌(Baci I Ius megaterium)Ap25株，保藏號為CGMCCN0.1498，保藏日為2005年10月20日的綠色木霉(Trichoderma viride)LTR_2株，保藏號為CGMCC N0.7938，以及保藏在北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號、中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏日為2013年7月19日的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)Tl 1-W株五種菌種分別按常規(guī)方法進行液體或固體發(fā)酵;具體如下:
[0016]1、褐球固氮菌YKT41的液體發(fā)酵
[0017]褐球固氮菌YKT41的液體發(fā)酵按以下步驟進行:
[0018](I)斜面菌種:采用固體無氮培養(yǎng)基(K2HP04 0.64g,KH2PO4 0.16g,MgS04.7H200.2g、NaCl 0.2g、CaS04.2H20 0.05g^Na2MoO4 O-OOlg^FeSO4 0.03g、蔗糖20g、瓊脂 15g、水1000ml、pH7.0-7.2)，將菌種接種在試管培養(yǎng)基中，28-32 °C培養(yǎng)18-24小時。
[0019](2)搖瓶菌種:采用液體無氮培養(yǎng)基(K2HP04 0.64g,KH2PO4 0.16g,MgS04.7H200.2g、NaCl 0.2g、CaS04.2H20 0.05g^Na2MoO4 O-OOlg^FeSO4 0.03g、蔗糖20g、水 1000ml、pH7.0-7.2)，將斜面菌種的單菌落接種在液體無氮培養(yǎng)基中置搖床上28-32°C培養(yǎng)18-24小時。
[0020](3)液體發(fā)酵:采用含蔗糖I %、玉米粉4%、黃豆餅粉I %、硫酸銨0.2%、硫酸鎂
0.02%、磷酸二氫鉀0.1 %、磷酸氫二鉀0.1 % (前述物料均按質(zhì)量百分比添加)、pH7.0-7.2培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，將搖瓶液體培養(yǎng)的菌種接種到發(fā)酵罐內(nèi)(接種量為2-10% )，28-32°C條件下培養(yǎng)，每分鐘通發(fā)酵罐容積1-1.5倍的氣量，攪拌速度為150-250r/min，培養(yǎng)時間36-48小時。在接種量為10%，30°C恒溫培養(yǎng)的情況下，32小時進入穩(wěn)定期，此時可作為發(fā)酵終點，獲得褐球固氮菌YKT41的孢子發(fā)酵液，留作配制復(fù)合微生物菌劑用。[0021 ] 2、越南伯克霍爾德氏菌P418的液體發(fā)酵
[0022]越南伯克霍爾德氏菌P418的液體發(fā)酵按以下步驟進行:
[0023](I)斜面菌種:采用固體無氮培養(yǎng)基(K2HP04 0.5g,MgS04.7H20 0.2g、NaCl 0.02g,CaCl2 0.2g、Fe-EDTA 0.066g,Na2MoO4 0.002g、L_谷氨酸(或味精)0.05g、葡萄糖5g、瓊脂15g、pH7.2-7.4)將菌種接種在試管培養(yǎng)基中，28-32°C培養(yǎng)18_24小時。
[0024](2)搖瓶菌種:稱取蛋白胨1g、酵母浸出物Ig、氯化鈣0.2g配制成pH7.0的液體培養(yǎng)基，將斜面菌種的單菌落接種在液體無氮培養(yǎng)基中置搖床上28-32Γ培養(yǎng)18-24小時。
[0025](3)液體發(fā)酵:采用含蔗糖I %、玉米粉4%、黃豆餅粉I %、硫酸銨0.2%、硫酸鎂0.02%、磷酸二氫鉀0.1 %、磷酸氫二鉀0.1 % (前述物料均按質(zhì)量百分比添加)、pH7.2-7.4培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，將搖瓶液體培養(yǎng)的菌種接種到發(fā)酵罐內(nèi)(接種量為2-10% )，28-32°C條件下培養(yǎng)，每分鐘通發(fā)酵罐容積1-1.5倍的氣量，攪拌速度為150-250r/min，培養(yǎng)時間36-48小時。在接種量為10%，30°C恒溫培養(yǎng)的情況下，32小時進入穩(wěn)定期，此時可結(jié)束發(fā)酵，獲得越南伯克霍爾德氏菌P418的孢子發(fā)酵液，留作配制復(fù)合微生物菌劑用。
[0026]3、巨大芽孢桿菌Ap25的液體發(fā)酵
[0027]巨大芽孢桿菌Ap25的液體發(fā)酵按以下步驟進行:
[0028](I)斜面菌種:采用固體無氮培養(yǎng)基(K2HP04 0.5g,MgS04.7H20 0.2g、NaCl 0.02g,CaCl2 0.2g、Fe-EDTA 0.066g,Na2MoO4 0.002g、L_谷氨酸(或味精)0.05g、葡萄糖5g、瓊脂15g、pH7.2-7.4)將菌種接種在試管培養(yǎng)基中，28-32°C培養(yǎng)18_24小時。
[0029](2)搖瓶菌種:稱取蛋白胨1