專利名稱：一種塵螨的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種塵螨的培養(yǎng)方法，具體涉及一種戶塵螨的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
當前，變應(yīng)性疾病日趨嚴重，塵螨是重要的室內(nèi)變應(yīng)原，其中，與人類過敏性疾病關(guān)系最密切的有戶塵螨和粉塵螨等。作為重要的變應(yīng)原種類，塵螨可以引起過敏性哮喘、鼻炎、遺傳過敏性皮炎等多種變應(yīng)性疾病。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，80％的哮喘患者對塵螨過敏，且兒童的過敏率高于成人。
塵螨的純培養(yǎng)為實驗室研究螨體或其排泄物的變應(yīng)原性以及螨性變應(yīng)性疾病的疫苗發(fā)展提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。另外，目前廣泛應(yīng)用于臨床的脫敏治療所用制劑亦為稀釋的天然抗原。目前對粉塵螨的培養(yǎng)，各方面條件都比較成熟，國內(nèi)亦有相關(guān)文獻發(fā)表，但尚無成功建立起戶塵螨培養(yǎng)體系的單位；國際上，也只有泰國等為數(shù)不多的幾個實驗室能大量培養(yǎng)戶塵螨并作為商品出售。對于戶塵螨的培養(yǎng)，其溫度和濕度的控制沒有爭議，在培養(yǎng)基的選擇上有所不同，國外有用酵母粉、魚粉、肝粉、人皮屑、動物飼料等其中若干種混合使用，但其培養(yǎng)成本價格高，培養(yǎng)物的純度及繁殖速度尚不理想。一般粉塵螨培養(yǎng)用面粉、米粉等就可滿足培養(yǎng)條件，但戶塵螨的培養(yǎng)條件尚未見詳細報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種塵螨的培養(yǎng)方法，尤其涉及一種戶塵螨的培養(yǎng)方法。
本發(fā)明方法選用的培養(yǎng)基方便易得，配比合理，在可控的溫度和濕度下，對戶塵螨進行培養(yǎng)，達到較好效果，培養(yǎng)物繁殖速度快，純度達90％以上。
本發(fā)明方法通過下述步驟實現(xiàn)，1、采集含螨灰塵，取床褥、草席、沙發(fā)等處灰塵鏡檢，經(jīng)形態(tài)鑒定后進入初期培養(yǎng)階段；2、初期小量培養(yǎng)，傳統(tǒng)方法挑取螨類，一般采用解剖針。但由于解剖針為剛性材質(zhì)，螨類爬上以后，不易使其落下，浪費時間。
本發(fā)明方法采用毛發(fā)針從上述采集的灰塵中挑取塵螨5～10對至盛有2mm左右培養(yǎng)基的小號玻璃瓶(底面積4cm2左右，高度1cm左右)中培養(yǎng)，6～8周后確定增長良好且無雜螨，可轉(zhuǎn)入大瓶大量飼養(yǎng)。
所述培養(yǎng)基含下述組分1)酵母粉(日本和光純藥工業(yè)株式會社/國產(chǎn))，2)實驗室動物飼料(市售)，3)魚粉(市售)，動物飼料磨碎后過100目網(wǎng)篩，魚粉過100目網(wǎng)篩，小鼠飼料和魚粉分別120℃干熱消毒1小時，裝瓶備用。
使用前，將酵母粉，小鼠飼料和魚粉按1～3∶1～3∶0～2的比例混合，具體可視所購各組份的實際成分進行調(diào)整。大量培養(yǎng)時，可直接在培養(yǎng)基中加入10-20％(w/w)高壓滅菌水，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基濕度，充分搖勻。
為利于濕熱消毒和易鏡下觀察，本方法所述培養(yǎng)瓶選用玻璃材質(zhì)，瓶口光滑，高度大于1cm；底面積＞4cm2，Wattman 3MM濾紙封口。
一般培養(yǎng)螨類多采用開放式培養(yǎng)容器，加蓋，需隔兩三天取出透氣，但較難避免雜螨或其它昆蟲進入培養(yǎng)系統(tǒng)，造成污染；或有用棉花、紙塞塞堵瓶口，此法雖可以保證空氣的進出，但孔隙大小較難控制，仍然難以杜絕螨類進出。
本方法的培養(yǎng)溫度為25℃，濕度為75％。
本發(fā)明采用飽和食鹽水或霧化器控制培養(yǎng)濕度，所述飽和食鹽水溶液含0.1～0.5％的新潔爾滅(苯扎溴銨)防止培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)霉菌生長。
培養(yǎng)物繁殖速度快，小量培養(yǎng)6～8周后確定增長良好，挑取100只戶塵螨轉(zhuǎn)入2.5g培養(yǎng)基，12～16周后可以達到收獲標準(計數(shù)每0.01克培養(yǎng)基內(nèi)含50～100個左右塵螨)，純度達90％以上，采用反復(fù)飽和鹽水浮聚法收獲。
具體實施例方式
實施例1取床褥、草席、沙發(fā)等處灰塵鏡檢，經(jīng)形態(tài)鑒定后進行初期小量培養(yǎng)，采用毛發(fā)針從上述采集的灰塵中挑取塵螨5～10對至盛有2mm左右培養(yǎng)基的小號玻璃瓶中培養(yǎng)，，所述玻璃瓶底面積4cm2，高度1cm，6～8周后確定增長良好且無雜螨，轉(zhuǎn)入大瓶大量飼養(yǎng)。
所述培養(yǎng)基含下述組分1)酵母粉(日本和光純藥工業(yè)株式會社/國產(chǎn))，2)實驗室動物飼料(市售)，3)魚粉(市售)，動物飼料磨碎后過100目網(wǎng)篩，魚粉過100目網(wǎng)篩，小鼠飼料和魚粉分別120℃干熱消毒1小時，裝瓶備用。
使用前，將酵母粉，小鼠飼料和魚粉按1∶1∶1的比例按常規(guī)方法混合。大量培養(yǎng)時，直接在培養(yǎng)基中加入10％(w/w)高壓滅菌水，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基濕度，充分搖勻。
為利于濕熱消毒和易鏡下觀察，本方法所述培養(yǎng)瓶選用玻璃材質(zhì)，瓶口光滑，Wattman 3MM濾紙封口。培養(yǎng)溫度為25℃。
采用飽和食鹽水控制培養(yǎng)濕度在75％，溶液含0.1～0.5％的新潔爾滅(苯扎溴銨)防止培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)霉菌生長。
培養(yǎng)物繁殖速度快，小量培養(yǎng)6～8周后確定增長良好，挑取100只戶塵螨轉(zhuǎn)入2.5g培養(yǎng)基，12～16周后可以達到收獲標準(計數(shù)每0.01克培養(yǎng)基內(nèi)含50～100個左右塵螨)，純度達90％以上，采用反復(fù)飽和鹽水浮聚法收獲。
實施例2取床褥、草席、沙發(fā)等處灰塵鏡檢，經(jīng)形態(tài)鑒定后進行初期小量培養(yǎng)，采用毛發(fā)針從上述采集的灰塵中挑取塵螨5～10對至盛有2mm左右培養(yǎng)基的小號玻璃瓶中培養(yǎng)，，所述玻璃瓶底面積4cm2，高度1cm，6～8周后確定增長良好且無雜螨，轉(zhuǎn)入大瓶大量飼養(yǎng)。
所述培養(yǎng)基含下述組分1)酵母粉(日本和光純藥工業(yè)株式會社/國產(chǎn))，2)實驗室動物飼料(市售)，3)魚粉(市售)，動物飼料磨碎后過100目網(wǎng)篩，魚粉過100目網(wǎng)篩，小鼠飼料和魚粉分別120℃干熱消毒1小時，裝瓶備用。
使用前，將酵母粉，小鼠飼料和魚粉按2∶2∶1的比例按常規(guī)方法混合。大量培養(yǎng)時，直接在培養(yǎng)基中加入16％(w/w)高壓滅菌水，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基濕度，充分搖勻。
為利于濕熱消毒和易鏡下觀察，本方法所述培養(yǎng)瓶選用玻璃材質(zhì)，瓶口光滑，Wattman 3MM濾紙封口。培養(yǎng)溫度為25℃。
采用霧化器控制濕度在75％。
培養(yǎng)物繁殖速度快，小量培養(yǎng)6～8周后確定增長良好，挑取100只戶塵螨轉(zhuǎn)入2.5g培養(yǎng)基，12～16周后可以達到收獲標準(計數(shù)每0.01克培養(yǎng)基內(nèi)含50～100個左右塵螨)，純度達90％以上，采用反復(fù)飽和鹽水浮聚法收獲。
權(quán)利要求
1.一種塵螨的培養(yǎng)方法，其特征是包括下述步驟，1)采集含螨灰塵，取床褥、草席、沙發(fā)等處灰塵鏡檢，經(jīng)形態(tài)鑒定后進入初期培養(yǎng)階段；2)初期小量培養(yǎng)，采用毛發(fā)針挑取塵螨至盛有培養(yǎng)基的玻璃瓶中培養(yǎng)，6～8周后轉(zhuǎn)入大瓶大量培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基含下述配比的組分酵母粉∶實驗室動物飼料∶魚粉為1～3∶1～3∶0～2，動物飼料磨碎后過100目網(wǎng)篩，魚粉過100目網(wǎng)篩，實驗室動物飼料和魚粉分別120℃干熱消毒1小時，裝瓶備用，采用飽和食鹽水或霧化器控制濕度在75％；3).采用反復(fù)飽和鹽水浮聚法收獲。
2.按權(quán)利要求1所述的塵螨的培養(yǎng)方法，其中所述的毛發(fā)針選自人的頭發(fā)或睫毛或眉毛或豬鬃，以棉線固定于竹簽。
3.按權(quán)利要求1所述的塵螨的培養(yǎng)方法，其中所述的培養(yǎng)基含下述配比的組分酵母粉∶實驗室動物飼料∶魚粉為1∶1∶1。
4.按權(quán)利要求1所述的塵螨的培養(yǎng)方法，其中所述的培養(yǎng)基含下述配比的組分酵母粉∶實驗室動物飼料∶魚粉為2∶2∶1。
5.按權(quán)利要求1所述的塵螨的培養(yǎng)方法，其特征是所述的玻璃培養(yǎng)瓶采用Wattman濾紙封口。
6.按權(quán)利要求1所述的塵螨的培養(yǎng)方法，其特征是所述的培養(yǎng)基，大量培養(yǎng)時，在其中加入10-20％(w/w)高壓滅菌水。
7.按權(quán)利要求1所述的塵螨的培養(yǎng)方法，其特征是所述的飽和食鹽水溶液含0.1～0.5％的新潔爾滅。
全文摘要
本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種戶塵螨的培養(yǎng)方法。本方法通過采集含螨灰塵、初期小量培養(yǎng)和毛發(fā)針挑取塵螨進行大瓶大量培養(yǎng)及反復(fù)飽和鹽水浮聚法收獲等步驟，在可控的溫度和濕度下培養(yǎng)戶塵螨，達到較好效果。本方法避免了傳統(tǒng)方法挑取螨類費事、費時及采用開放式培養(yǎng)容器易造成污染、培養(yǎng)物繁殖速度慢，純度低的缺陷；采用的培養(yǎng)基方便易得，配比合理，培養(yǎng)物繁殖速度快，純度達90％以上。
文檔編號A01K67/00GK1666604SQ20051002363
公開日2005年9月14日 申請日期2005年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月26日
發(fā)明者范怡敏, 程訓(xùn)佳 申請人:復(fù)旦大學(xué)