專利名稱：一種強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑及其制備方法，更具體地說涉及一種由蛋白質(zhì)原料和輔料原料，不經(jīng)過蒸煮滅菌，直接由復(fù)合益生菌種經(jīng)微生物固態(tài)發(fā)酵而獲得的強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
動(dòng)物的集約化養(yǎng)殖存在諸多問題，動(dòng)物的免疫力低下，蛋白質(zhì)的沉積率下降，動(dòng)物生長(zhǎng)速度緩慢，斷奶仔豬拉稀，死亡率高等。目前，防治和治療動(dòng)物疾病的主要措施是在動(dòng)物出現(xiàn)疾病癥狀前后使用抗生素，能夠起到明顯的作用，但抗生素同時(shí)也給腸道和自身免疫系統(tǒng)造成了損傷，抗生素所造成的抗藥性和耐藥性使集約化養(yǎng)殖的動(dòng)物更容易大面積得病死亡。
通過添加單一免疫增強(qiáng)劑或促生長(zhǎng)劑，效果不好，添加成本高，又不能同時(shí)解決動(dòng)物養(yǎng)殖其它方面的問題，比如同時(shí)解決斷奶仔豬拉稀和免疫增強(qiáng)的問題。
微生態(tài)飼料添加劑是通過微生物發(fā)酵、酶工程等生物技術(shù)手段，產(chǎn)生免疫強(qiáng)化物質(zhì)，免疫能量物質(zhì)，促生長(zhǎng)物質(zhì)，大量維生素和益生物質(zhì)，長(zhǎng)期使用，能夠緩和增強(qiáng)動(dòng)物自身免疫機(jī)能，具有后效效果，可部分與抗生素配合使用，也可全部替代飼用抗生素，消除藥殘，敏化病原微生物，改善畜產(chǎn)品的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的為提供一種由蛋白質(zhì)原料和輔料原料，不經(jīng)過蒸煮滅菌，直接由復(fù)合益生菌種經(jīng)微生物固態(tài)發(fā)酵而獲得的強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑。
本發(fā)明的另一目的為提供上述強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下實(shí)施本發(fā)明的原料為
蛋白質(zhì)原料豆粕、玉米蛋白粉、菌體蛋白粉、酒精糟粕中的一種或幾種；其它輔料原料玉米淀粉、麩皮、廢糖蜜、次粉中的一種或幾種。
根據(jù)上述原料，本發(fā)明的配方按質(zhì)量百分比為豆粕 72～86％；玉米蛋白粉1.5～3％；菌體蛋白粉10～15％；酒精糟粕 0～5％；玉米淀粉 1～2％；麩皮 0～1％；廢糖蜜0.5～1％；次粉 0～1％。
上述原料均可在原料市場(chǎng)購(gòu)得。
首先，微生物實(shí)驗(yàn)室用保藏的四種益生菌種黃短桿菌、芽孢桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、酵母菌生產(chǎn)發(fā)酵菌種，四種菌種懸液各0.05～0.07％(相對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)后液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種的體積比)，種子生產(chǎn)車間用四個(gè)發(fā)酵菌種分別投入種子發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種，微生物菌種液體經(jīng)過配料，四種液體菌種的用量相對(duì)于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量分別為2～3％，2～3％，2～3％，1～2％，自來(lái)水40～45％，加入上述原料中的廢糖蜜，調(diào)節(jié)pH值至4.0～5.0，直接接入投入混合機(jī)和經(jīng)過配比的其它發(fā)酵蛋白質(zhì)原料和輔料，混合3～5分鐘，下料發(fā)酵，發(fā)酵溫度控制在25～38℃，固態(tài)發(fā)酵3～5天，SLY.DP-1000型氣流流化床干燥，干燥出風(fēng)溫度45-52℃，進(jìn)風(fēng)溫度125～140℃，0.8目篩網(wǎng)粉碎，計(jì)量包裝得成品，測(cè)定免疫多糖的總含量0.3～1.0％，免疫能量物質(zhì)L-谷氨酰胺含量0.3～1.0％，賴氨酸含量≥4.0％，氨基氮為0.5～1.0％，總氮≥10.0％，水分≤12.0％。
黃短桿菌、芽孢桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、酵母菌的培養(yǎng)基分別按照中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的2號(hào)、44號(hào)、100號(hào)、77號(hào)培養(yǎng)基配制。
數(shù)據(jù)的測(cè)定方法
1、固定化酶測(cè)定L-谷氨酰胺含量1.1工作原理SBA是利用固定化酶測(cè)定物質(zhì)濃度，在SBA-40型生物傳感儀左右電極上分別安裝L-Gln酶膜和Glu酶膜測(cè)定L-Gln。L-Gln酶膜對(duì)L-Gln和Glu均有響應(yīng)；而Glu酶膜只對(duì)Glu有響應(yīng)，經(jīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，可以消除Glu對(duì)L-Gln測(cè)定的干擾。
1.2儀器與試劑SBA-40型生物傳感儀；L-Gln酶膜，谷氨酸酶膜；L-Gln，谷氨酸(Sigma公司)。
1.3方法與結(jié)果1.3.1測(cè)定方法用Glu標(biāo)準(zhǔn)液將儀器兩側(cè)顯示器的顯示值定標(biāo)為(100，100)；進(jìn)L-Gln標(biāo)準(zhǔn)液，測(cè)量值為(a，0)；進(jìn)樣品，測(cè)量值為(b，c)；按以下公式計(jì)算L-Gln的濃度(g·L-1)＝(b-c)/a×標(biāo)準(zhǔn)液濃度×稀釋倍數(shù)；Glu的濃度(g·L-1)＝c/100×標(biāo)準(zhǔn)液濃度×稀釋倍數(shù)。
1.3.2標(biāo)準(zhǔn)溶液分別取L-Gln和Glu標(biāo)準(zhǔn)品適量，準(zhǔn)確稱定，加蒸餾水使溶解并均定量稀釋成1.0g·L-1的溶液。
1.3.3線性關(guān)系分別精密量取1.0g·L-1的L-Gln標(biāo)準(zhǔn)溶液12，10，8，6，4，2，1mL至50mL容量瓶中，用蒸餾水定容，進(jìn)樣25μL，以濃度為橫坐標(biāo)，測(cè)量值與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度相差百分?jǐn)?shù)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸(L-Gln濃度在0.8～2.0g·L-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系)，計(jì)算回歸方程。若樣品濃度偏高，應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)稀釋。
1.3.4樣品測(cè)定根據(jù)經(jīng)驗(yàn)估計(jì)樣品中含有L-谷氨酰胺的濃度，精確稱取細(xì)度為200目的樣品約2克，精確至0.0001g，充分溶解，使L-谷氨酰胺溶出，定容至10ml，配制L-谷氨酰胺濃度為0.8～2.0g·L-1范圍內(nèi)的樣品溶液，取離心上清液，進(jìn)樣25μL，用SBA-40型生物傳感儀和進(jìn)口生化分析儀測(cè)定發(fā)酵液中L-Gln的含量。
1.3.5結(jié)果與計(jì)算L-Gln的濃度(g·L-1)＝(b-c)/a×標(biāo)準(zhǔn)液濃度×稀釋倍數(shù)L-Gln的含量(％)＝100％×L-Gln的濃度(g·L-1)×1000/樣品質(zhì)量(g)2、苯酚硫酸法檢測(cè)免疫多糖含量2.1測(cè)定原理以葡聚糖為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，以苯酚硫酸法顯色測(cè)定吸光值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的粗多糖含量。
2.2材料與儀器濃硫酸，苯酚，無(wú)水乙醇，葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品。752-分光光度計(jì)，分析天平，離心機(jī)。
2.3實(shí)驗(yàn)方法2.3.1免疫多糖提取方法準(zhǔn)確稱取樣品2g(精確至0.0001g)，加適量水，沸水浴放置2h，冷卻后定容至100ml。
2.3.2樣品溶液的制備將上述100ml提取液過濾，棄去初濾液，吸取濾液10.0ml，加50ml無(wú)水乙醇，混勻，離心，去上清液，殘?jiān)?0ml80％乙醇洗滌三次，剩余殘?jiān)?mol/L硫酸10ml溶解后，加水定容至50ml，溶液3000r/min離心20min，上清液為待測(cè)樣品溶液。
2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確稱取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0.0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml于25ml比色管中，加水至2ml，加入苯酚溶液1.0ml，濃硫酸10ml，沸水浴放置2min，冷卻至室溫，在485nm處，1cm比色皿測(cè)定吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。
2.3.4多糖含量測(cè)定吸取樣品溶液1ml，于25ml比色管中，加水至2.0ml，加入苯酚溶液1.0ml，濃硫酸10ml，沸水浴放置2min，冷卻至室溫，在485nm處，1cm比色皿測(cè)定吸光度值。
2.4結(jié)果計(jì)算依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)吸光值查出多糖的濃度，計(jì)算多糖含量。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的產(chǎn)品作為飼料添加劑，可明顯增強(qiáng)動(dòng)物的免疫力，治療仔豬斷奶拉稀，提高機(jī)體蛋白的合成速度，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，發(fā)酵香味可促進(jìn)采食，促進(jìn)機(jī)體對(duì)礦物元素的吸收，調(diào)節(jié)機(jī)體的各種生理活動(dòng)及改善機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)免疫狀況，增加養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但不限制本發(fā)明實(shí)施例1稱取原料豆粕78公斤；玉米蛋白粉 3公斤；菌體蛋白粉 13公斤；酒精糟粕3公斤；玉米淀粉2.0公斤；麩皮0.5公斤；首先，微生物實(shí)驗(yàn)室用保藏的四種益生菌種黃短桿菌、芽孢桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、酵母菌生產(chǎn)發(fā)酵菌種，四種菌種懸液各480mL，種子生產(chǎn)車間用四個(gè)發(fā)酵菌種投入種子發(fā)酵罐分別發(fā)酵四個(gè)菌種，液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種各800L，微生物菌種液體經(jīng)過配料，液體菌種的比例相對(duì)于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量分別為2％，2％，2％，2％，自來(lái)水42％，加入0.5公斤廢糖蜜，調(diào)節(jié)pH值至4.3，直接接入投入混合機(jī)和經(jīng)過配比的其它發(fā)酵蛋白質(zhì)原料和輔料，混合3分鐘，下料發(fā)酵，發(fā)酵溫度控制在30-37℃，固態(tài)發(fā)酵3天，SLY.DP-1000型氣流流化床干燥，干燥出風(fēng)溫度48℃，進(jìn)風(fēng)溫度134℃，0.8目篩網(wǎng)粉碎，計(jì)量包裝得成品。
黃短桿菌、芽孢桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、酵母菌的培養(yǎng)基分別按照中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的2號(hào)、44號(hào)、100號(hào)、77號(hào)培養(yǎng)基配制。
苯酚硫酸法檢測(cè)免疫多糖含量(測(cè)定方法參照“粗多糖測(cè)定方法的研究”方法，胡居吾 江西食品工業(yè)2002年)免疫多糖的總含量≥0.3-1.0％；固定化酶測(cè)定L-谷氨酰胺的含量(測(cè)定方法參照“L-谷氨酰胺的含量測(cè)定法”方法，文加才 中國(guó)新藥雜志2002年第11卷5期)免疫能量物質(zhì)L-谷氨酰胺的總含量≥0.3-1.0％；利用甲醛法對(duì)成品進(jìn)行氨基氮測(cè)定(按照生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)表的方法，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1987年)氨基氮為0.5-1.0％；按照國(guó)家GB/T6432-1994的方法測(cè)定總氮總氮含量≥8.0％；按照國(guó)家GB/T6435-1994的方法測(cè)得含水量水分含量≤12.0％。
實(shí)施例2稱取原料豆粕 80公斤；菌體蛋白粉14公斤；玉米蛋白粉2公斤；玉米淀粉 2公斤；麩皮 1公斤；上述原料均從原料市場(chǎng)購(gòu)得。
首先，微生物實(shí)驗(yàn)室用保藏的四種益生菌種黃短桿菌、芽孢桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、酵母菌生產(chǎn)發(fā)酵菌種，四種菌種懸液各400mL。種子生產(chǎn)車間用四個(gè)發(fā)酵菌種投入種子發(fā)酵罐分別發(fā)酵四個(gè)菌種，液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種各800L，微生物菌種液體經(jīng)過配料，菌種比例相對(duì)于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量分別為2％，3％，2％，2％，自來(lái)水40％，加入1公斤廢糖蜜，調(diào)節(jié)pH值至4.6，直接接入投入混合機(jī)和經(jīng)過配比的發(fā)酵蛋白質(zhì)原料和輔料，混合5分鐘，下料發(fā)酵，發(fā)酵溫度控制在32-37℃，固態(tài)發(fā)酵4天，SLY.DP-1000型氣流流化床干燥，干燥出風(fēng)溫度45℃，進(jìn)風(fēng)溫度132℃，0.8目篩網(wǎng)粉碎，計(jì)量包裝得成品。
黃短桿菌、芽孢桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、酵母菌的培養(yǎng)基分別按照中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的2號(hào)、44號(hào)、100號(hào)、77號(hào)培養(yǎng)基配制。
苯酚硫酸法檢測(cè)免疫多糖含量(測(cè)定方法參照“粗多糖測(cè)定方法的研究”方法，胡居吾 江西食品工業(yè)2002年)免疫多糖的總含量≥0.3-1.0％；固定化酶測(cè)定L-谷氨酰胺的含量(測(cè)定方法參照“L-谷氨酰胺的含量測(cè)定法”方法，文加才 中國(guó)新藥雜志 2002年第11卷5期)免疫能量物質(zhì)L-谷氨酰胺的總含量≥0.3-1.0％；利用甲醛法對(duì)成品進(jìn)行氨基氮測(cè)定(按照生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)表的方法，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1987年)氨基氮為0.5-1.0％；按照國(guó)家GB/T6432-1994的方法測(cè)定總氮總氮含量≥8.0％；按照國(guó)家GB/T6435-1994的方法測(cè)得含水量水分含量≤12.0％。
實(shí)施例3稱取原料豆粕84公斤；菌體蛋白粉 12公斤；
玉米蛋白粉 1.7公斤；玉米淀粉1.5公斤；次粉1公斤；上述原料均從原料市場(chǎng)購(gòu)得。
首先，微生物實(shí)驗(yàn)室用保藏的四種益生菌種黃短桿菌、芽孢桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、酵母菌生產(chǎn)發(fā)酵菌種，四種菌種懸液各560mL。種子生產(chǎn)車間用四個(gè)發(fā)酵菌種投入種子發(fā)酵罐分別發(fā)酵四個(gè)菌種，液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種各800L，微生物菌種液體經(jīng)過配料，菌種比例相對(duì)于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量分別為3％，3％，2％，2％，自來(lái)水45％，加入0.8公斤廢糖蜜，調(diào)節(jié)pH值至4.8，直接接入投入混合機(jī)和經(jīng)過配比的其它發(fā)酵蛋白質(zhì)原料和輔料，混合4分鐘，下料發(fā)酵，發(fā)酵溫度控制在28-37℃，固態(tài)發(fā)酵5天，SLY.DP-1000型氣流流化床干燥，干燥出風(fēng)溫度50℃，進(jìn)風(fēng)溫度138℃，0.8目篩網(wǎng)粉碎，計(jì)量包裝得成品。
黃短桿菌、芽孢桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、酵母菌的培養(yǎng)基分別按照中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的2號(hào)、44號(hào)、100號(hào)、77號(hào)培養(yǎng)基配制。
苯酚硫酸法檢測(cè)免疫多糖含量(測(cè)定方法參照“粗多糖測(cè)定方法的研究”方法，胡居吾 江西食品業(yè)2002年)免疫多糖的總含量≥0.3-1.0％；固定化酶測(cè)定L-谷氨酰胺的含量(測(cè)定方法參照“L-谷氨酰胺的含量測(cè)定法”方法，文加才 中國(guó)新藥雜志 2002年第11卷5期)免疫能量物質(zhì)L-谷氨酰胺的總含量≥0.3-1.0％；利用甲醛法對(duì)成品進(jìn)行氨基氮測(cè)定(按照生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)表的方法，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1987年)氨基氮為0.5-1.0％；按照國(guó)家GB/T6432-1994的方法測(cè)定總氮總氮含量≥8.0％；按照國(guó)家GB/T6435-1994的方法測(cè)得含水量水分含量≤12.0％。
權(quán)利要求
1.一種由蛋白質(zhì)原料和輔料原料，不經(jīng)過蒸煮滅菌，直接由復(fù)合益生菌種經(jīng)微生物固態(tài)發(fā)酵而獲得的免疫多糖總含量0.3～1.0％，免疫能量物質(zhì)L-谷氨酰胺含量0.3～1.0％，賴氨酸含量≥4.0％，氨基氮0.5～1.0％，總氮10.0％，水分≤12.0％的強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑，上述含量均按質(zhì)量百分比計(jì)算。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑，其特征在于，所述的益生菌種為黃短桿菌、芽孢桿菌、谷氨酸棒狀桿菌和酵母菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑，其特征在于，所述的蛋白質(zhì)原料為豆粕、菌體蛋白粉、玉米蛋白粉、酒精糟粕中的一種或幾種；輔料為玉米淀粉、麩皮、廢糖蜜、次粉中的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑，其特征在于，蛋白質(zhì)原料和輔料原料的配比按質(zhì)量百分比計(jì)算為豆粕 72～86％；玉米蛋白粉1.5～3％；菌體蛋白粉10～15％；酒精糟粕 0～5％；玉米淀粉 1～2％；麩皮 0～1％；廢糖蜜0.5～1％；次粉 0～1％。
5.如權(quán)利要求1所述的強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑的制備方法，由以下步驟組成(1)用芽孢桿菌、黃短桿菌、酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌四種益生菌種生產(chǎn)種子發(fā)酵菌種；(2)用發(fā)酵菌種液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種，液體經(jīng)過配料，調(diào)節(jié)種子發(fā)酵菌種培養(yǎng)劑pH值至4.0～5.0；(3)蛋白質(zhì)原料和輔料不經(jīng)過蒸煮直接投入混合機(jī)，微生物菌種接入，混合3～5分鐘；(4)下料平鋪發(fā)酵，翻料控溫，發(fā)酵溫度控制在25～38℃，靜態(tài)固態(tài)發(fā)酵3～5天；(5)氣流流化床干燥，干燥出風(fēng)溫度45～52℃，進(jìn)風(fēng)溫度125～140℃；(6)0.8目篩網(wǎng)粉碎，計(jì)量包裝得成品。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑的制備方法，其特征在于，相對(duì)于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量，芽孢桿菌、黃短桿菌、酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌的接種用量分別為2～3％、2～3％、2～3％、1～2％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種強(qiáng)免疫促生長(zhǎng)飼料添加劑及其制備方法。該添加劑以豆粕、麩皮、玉米蛋白粉、玉米淀粉、酒精糟粕、菌體蛋白粉、廢糖蜜、次粉中的一種或幾種為原料，不經(jīng)蒸煮滅菌處理，由復(fù)合益生菌種經(jīng)微生物固態(tài)發(fā)酵而獲得。該添加劑免疫多糖總含量0.3～1.0％，免疫能量物質(zhì)含量0.3～1.0％，賴氨酸含量≥4.0％，氨基氮為0.5～1.0％，總氮≥10.0％，水分≤12.0％，可明顯增強(qiáng)動(dòng)物的免疫力，治療仔豬斷奶拉稀，提高機(jī)體蛋白的合成速度，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，發(fā)酵香味可促進(jìn)采食，促進(jìn)機(jī)體對(duì)礦物元素的吸收，調(diào)節(jié)機(jī)體的各種生理活動(dòng)及改善機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)免疫狀況，增加養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)A23K1/00GK101032281SQ20071003959
公開日2007年9月12日 申請(qǐng)日期2007年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月18日
發(fā)明者李亮, 陸克文, 許云英 申請(qǐng)人:上海邦成生物科技有限公司