專利名稱：一種飼用小肽添加劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種飼用小肽添加劑及其制備方法，更具體地說涉及一種由蛋白質(zhì)原料和輔料，不經(jīng)過蒸煮滅菌，直接由復合益生菌種經(jīng)微生物固態(tài)發(fā)酵而獲得的無抗營養(yǎng)因子、富含小肽和益生物質(zhì)的飼用小肽添加劑及其制備方法。
背景技術：
肽是氨基酸通過肽鍵連接并具有一定聚合度的一類物質(zhì)的總稱，其聚合度與分子量介于蛋白質(zhì)和氨基酸之間。按其作用不同可分為兩大類功能肽和營養(yǎng)肽。功能肽即生物活性肽，它們能參與調(diào)節(jié)動物的某些生理活動或具有某些特殊功能。例如阿片肽、生長促進肽、免疫肽、抗菌肽和誘食肽等。營養(yǎng)肽不具有特殊的生理調(diào)節(jié)功能，但能迅速為動物腸道吸收利用，它們一般只含有2～15個氨基酸殘基，與蛋白質(zhì)和氨基酸相比，具有更大的營養(yǎng)優(yōu)勢。營養(yǎng)肽不需要水解，具有吸收速度快、吸收過程能耗低和利用率高等特點。
飼用小肽產(chǎn)品用于飼料添加劑，可提高機體蛋白的合成速度，發(fā)酵香味可促進采食，增強機體免疫功能，促進機體對礦物元素的吸收，調(diào)節(jié)機體的各種生理活動及改善機體的營養(yǎng)狀況。
飼用小肽的生產(chǎn)方法主要有三種蛋白質(zhì)水解法、微生物發(fā)酵法、化學合成法，這三種方法各有特點。飼用小肽生產(chǎn)方法的選擇主要取決于生產(chǎn)成本、產(chǎn)量產(chǎn)能、產(chǎn)品質(zhì)量、使用方式方法和用途?；瘜W合成法由于成本高、產(chǎn)能低，不適用于生產(chǎn)飼用小肽。因此目前，飼用小肽的工業(yè)化生產(chǎn)主要采用蛋白質(zhì)水解法和微生物發(fā)酵法。蛋白質(zhì)水解法生產(chǎn)飼用小肽產(chǎn)能較高，但原料成本高，產(chǎn)品性價比低，相對成本很高；小肽含量雖然比較高，但其較高肽含量所產(chǎn)生的苦味影響了產(chǎn)品的適口性，對動物采食量有較大的影響，其超強的吸濕性、較高的成本和適口性影響了其使用實用性、使用量和使用范圍。產(chǎn)品小肽的檢測方法常用HPLC或MS法，該方法需要昂貴的色譜儀，難于用于常規(guī)的定性和定量分析。其它顯色法測定肽含量波動較大，不適合用于低水平小肽含量的測定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的為提供一種由蛋白質(zhì)原料和輔料，不經(jīng)過蒸煮滅菌，直接由復合益生菌種經(jīng)微生物固態(tài)發(fā)酵而獲得的無抗營養(yǎng)因子，富含小肽和益生物質(zhì)的飼用小肽添加劑。
本發(fā)明的另一目的為提供上述飼用小肽添加劑的制備方法。
本發(fā)明的技術方案如下實施本發(fā)明的原料為蛋白質(zhì)原料和原料輔料。
蛋白質(zhì)原料為豆粕、玉米蛋白粉、菌體蛋白粉、酒精糟粕中的一種或幾種；其它輔料原料為玉米淀粉、麩皮、廢糖蜜、次粉中的一種或幾種。
根據(jù)上述原料，實施本發(fā)明的原料配方按質(zhì)量百分比為豆粕 56～78％；玉米蛋白粉3～5％；菌體蛋白粉10～15％；酒精糟粕 5～10％；玉米淀粉 3～5％；麩皮 0～3％；廢糖蜜1～3％；次粉 0～3％。
上述原料均可在原料市場購得。
首先，微生物實驗室用保藏的三種益生菌種乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌生產(chǎn)發(fā)酵菌種，乳酸菌液體1～1.25％(相對于擴大培養(yǎng)后液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種的體積百分比)，酵母菌和芽孢桿菌各三個斜面，所用酵母菌和芽孢桿菌的菌種懸液各0.05～0.07％(相對于擴大培養(yǎng)后液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種的體積百分比)。種子生產(chǎn)車間用三個發(fā)酵菌種，投入種子發(fā)酵罐分別擴大培養(yǎng)，發(fā)酵三個菌種，液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種，微生物菌種液體經(jīng)過配料，三種液體菌種的用量相對于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量分別為2～3％、2～3％、4～6％，自來水40～45％；加入上述原料中的廢糖蜜，調(diào)節(jié)pH值至4.0～5.0，直接接入投入混合機和經(jīng)過配比的其它發(fā)酵蛋白質(zhì)原料和輔料，混合3～5分鐘，下料發(fā)酵，發(fā)酵溫度控制在30～40℃，固態(tài)發(fā)酵3～5天，SLY.DP-1000型氣流流化床干燥，干燥出風溫度45～52℃，進風溫度125～140℃，0.8目篩網(wǎng)粉碎，計量包裝得成品，測定小肽的總含量≥15.0％，分子量小于20000Dalton，氨基氮為0.5～1.0％，總氮≥8.0％，乳酸含量≥3.0％，水分≤12.0％。
上述乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌的培養(yǎng)基分別按照中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的316號、77號、44號培養(yǎng)基配制。
數(shù)據(jù)的測定方法1、隆丁法測定總肽含量1.1測定原理高分子含氮物質(zhì)在酸性溶液中，易為單寧酸沉淀。而鉬酸鈉可同時沉淀高、中分子含氮物質(zhì)，低分子含氮物則不為上述物質(zhì)所沉淀。因此，測定單寧酸沉淀樣品后濾液的含氮量，用總氮減去此值即得到高分子含氮物質(zhì)的量。再測鉬酸鈉沉淀樣品后所得濾液的含氮物質(zhì)的量，即為低分子含氮物質(zhì)的量。用單寧酸沉淀樣品所得濾液的含氮物質(zhì)的量減去低分子含氮物質(zhì)的量，即為中分子含氮物質(zhì)的量。
1.2試劑1)H2SO4比重1.40；2)單寧酸溶液16.000g單寧酸溶于100.00ml水；3)鉬酸鈉溶液50.000g鉬酸鈉溶于100.00ml水。
1.3操作1)精確稱量2.500克樣品，精確到0.001克，質(zhì)量計為DW，測總粗蛋白含量記為W；2)用單寧酸沉淀稱量定量濾紙，精確到0.001克，精確稱量2.500克經(jīng)過超微粉碎的發(fā)酵豆粕產(chǎn)品(含200.00mg左右的氮)于500ml的容量瓶中，精確到0.001克，加去離子水450.00ml，充分振搖溶解，過夜后，加比重1.40的H2SO4，10.00ml，搖勻。
置于20℃水浴中，保溫15～20min，加25.00ml單寧酸溶液，加水到刻度，搖勻，立即用折疊濾紙抽濾，用去離子水清洗3次。
取濾渣，烘至絕干，質(zhì)量計為DX，精確稱重，測粗蛋白含量，其粗蛋白含量記為X。
3)用鉬酸鈉沉淀稱量定量濾紙，精確到0.001克，精確稱量2.500克經(jīng)過超微粉碎的發(fā)酵豆粕產(chǎn)品(含200.00mg左右的氮)于500ml的容量瓶中，精確到0.001克，加水到430.00ml左右，充分振搖溶解，過夜后，加25.00ml鉬酸鈉溶液，搖勻。
置于20℃水浴中，保溫15～20min，加25.00ml比重1.40的H2SO4，加水到刻度，搖勻，立即用折疊濾紙抽濾，用去離子水清洗3次。
取濾渣，烘至絕干，精確稱重，質(zhì)量計為DY，測粗蛋白含量，其粗蛋白含量記為Y。
1.4計算高分子蛋白物質(zhì)占總蛋白的百分比＝X*Dx/W*Dw*100％；中分子蛋白物質(zhì)占總蛋白的百分比＝(Y*Dy-X*Dx)/W*Dw*100％；低分子蛋白物質(zhì)占總蛋白的百分比＝(W*Dw-Y*Dy)/W*Dw*100％。
小肽物質(zhì)占總蛋白的被分比＝中、低分子蛋白物質(zhì)占總蛋白百分比之和。
2、垂直型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析小肽分子量和抗營養(yǎng)因子2.1實驗原理SDS-PAGE是PAGE的一種特殊形式。SDS是帶負電荷的陰離子去污劑。用SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)分子量時，蛋白質(zhì)需經(jīng)過樣品溶解液處理，在樣品溶解液中含有巰基乙醇及SDS，各種蛋白質(zhì)在巰基乙醇作用下，還原成單鏈，再進一步與SDS結合形成帶大量負電荷的SDS-蛋白質(zhì)復合物。因此，各種蛋白質(zhì)分子在SDS-PAGE中，只能按其分子量大小而分離。
電泳分離后，不同蛋白質(zhì)分子量的條帶經(jīng)過染色，顯示出不同的條帶分布，與顯色的標準分子量條帶相比較，得出樣品中蛋白質(zhì)的分子量分布范圍。
2.2實驗材料(1)0.2mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖液稱取無水磷酸氫二鈉(AR)Na2HPO420.44克(或Na2HPO4·12H2O51.58克或Na2HPO4·2H2O 25.63克)，再稱取磷酸二氫鈉(AR)NaH2PO4·2H2O 8.74克(或NaH2PO4·H2O 7.73克)，溶于去離子水(或重蒸水)中，并定容至1000ml。
(2)液體樣品溶解液0.01mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖液內(nèi)含2％SDS、2％巰基乙醇、20％甘油(或40％蔗糖)、0.04％溴酚藍。此緩沖液用來溶解標準蛋白質(zhì)及待測固體蛋白質(zhì)樣品，配制方法如表1。
表1 連續(xù)體系樣品溶解液配制(0.01mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖液)

注液體樣品與樣品溶解液等體積混合，若樣品為固體，則用稀一半的樣品溶解液。
(3)凝膠貯液稱丙烯酰胺(Acr)30克，N，N’-亞甲基雙丙烯酰胺(Bis)0.8克，加重蒸水至100ml，過濾后置棕色瓶，4℃貯存可用1-2個月。
(4)凝膠緩沖液稱0.2克SDS，加0.2mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖液至100ml，過濾后置棕色瓶，4℃貯存，用前，稍加溫使SDS溶解。
(5)1％TEMED取1ml N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(TEMED)，加重蒸水至100ml，置棕色瓶，4℃貯存。
(6)10％過硫酸銨稱過硫酸銨(AP)10克，加重蒸水至100ml，此液應每周新配，置棕色瓶，4℃貯存。
(7)電極緩沖溶液(0.1％SDS，0.1mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖液)稱1克SDS，加500ml的0.2mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖液，再用蒸餾水定容至1000ml。
(8)1％瓊脂(糖)稱瓊脂(糖)1克，加100ml上述電極緩沖溶液使其溶解，4℃貯存。
(9)10％濃度SDS-連續(xù)體系凝膠表2 SDS-連續(xù)體系凝膠配制

注使用工具是1ml取液槍，50ul取液，一次性槍頭廢棄。
(10)配制0.5～1mg/1ml低分子量標準蛋白試劑樣品溶解液稱10mg低分子量標準蛋白試劑，加10ml 0.2mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖液，溶解。
(11)固定液取50％甲醇454ml，冰乙酸46ml，混均。
(13)染色液稱0.125克考馬斯亮藍R250，加上述固定液250ml，過濾后應用。
(14)脫色液冰乙酸75ml，甲醇50ml，加蒸餾水定容至1000ml。
2.3實驗內(nèi)容(1)配膠及凝膠板的制備配膠根據(jù)所測蛋白質(zhì)分子量范圍，選擇適宜的分離膠濃度。選擇SDS-PAGE連續(xù)系統(tǒng)的配制方法，見表2。電極緩沖液為0.1mol/L pH7.2磷酸緩沖液，內(nèi)含0.1％SDS。
(2)SDS-連續(xù)體系凝膠板的制備將凝膠密封框(其中0.75mm的密封條為淺綠色，1.0mm的密封條為藍色，1.5mm的密封條為深灰色)放在平玻璃上，然后將凹型玻璃與平玻璃重疊，將兩塊玻璃立起來使其底端接觸桌面，用手將兩塊玻璃板夾住放入電泳槽內(nèi)，然后插入斜槭板到適中程度，即可罐膠。
按表2配制20ml濃度為10％的SDS-連續(xù)體系凝膠溶液，用細長頭滴管將分離膠混合液加到兩塊玻璃板的縫隙內(nèi)直至距離短玻璃板上緣0.5cm處，插入樣品槽模板。為防止?jié)B漏，可在上、下電極槽中加入蒸餾水，但不能超過短板，以防凝膠被稀釋，約30min，凝膠聚合，繼續(xù)放置20～30min后，倒去上下電極槽中的蒸餾水，小心拔出梳形樣品槽模板，用窄條濾紙吸去殘余水分，注意不要弄破凹形加樣槽的底面，倒入電極緩沖液即可準備加樣。
注意凝膠聚集后，輕輕取下梳子，用手夾住兩塊玻璃板，上提斜槭板，使其松開，然后取下玻璃膠室，去掉凝膠密封框，注意在上述過程中手始終給玻璃膠室一個夾緊力，再將玻璃膠室凹面朝里置入電泳槽。插入斜槭板，將緩沖液加至內(nèi)槽玻璃凹口以上，外槽緩沖液加至距平玻璃上沿3mm處即可電泳。同時注意避免在膠室下端出現(xiàn)氣泡。
(3)制備液體樣品發(fā)酵豆粕固體樣品經(jīng)過超微粉碎，過100目。取1克樣品，用100ml的0.2mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖液溶解，4000r/min離心10min。取0.5ml上清液，加入0.5ml液體樣品溶解液，溶解后，將其轉移到帶塞小離心管中，輕輕蓋上蓋子(不要塞緊，以免加熱時進出)，在100℃沸水浴中保溫3min，取出冷卻即為液體樣品。注如處理好的樣品暫時不用，可放在-20℃冰箱保存較長時間，使用前在100℃沸水浴中加熱3min，以除去亞穩(wěn)態(tài)聚合。
(4)加樣一般每個凹形樣品槽內(nèi)，只加一種樣品或已知分子量的混合標準蛋白質(zhì)，加樣體積要根據(jù)凝膠厚度及樣品濃度靈活掌握，一般加樣體積為10～15ul(即2～10ug蛋白)，如樣品較稀，加樣體積可達100ul，如樣品槽中有氣泡，可用注射器針頭挑除。加樣時，將微量注射器的針頭通過電極緩沖液伸入加樣槽內(nèi)，盡量接近底部，輕輕推動微量注射器，注意針頭勿碰破凹形槽膠面。由于樣品溶解液中含有比重較大的蔗糖和甘油，因此樣品溶液會自動沉降在凝膠表面形成樣品層。
(5)預電泳分離膠聚合后是否預電泳應根據(jù)需要而定，SDS連續(xù)系統(tǒng)預電泳采用30mA，60～120min。
(6)連續(xù)系統(tǒng)電泳在電極槽中倒入0.1％SDS pH7.2 0.1mol/L磷酸鹽緩沖液，連接電泳儀與電泳槽，打開電源，將電流調(diào)到20mA，待樣品進入分離膠后，將電流調(diào)至50mA，待染料前沿遷移至距硅橡膠框底邊1～1.5cm處，停止電泳，一般需5～6h。
(7)凝膠板剝離與固定電泳結束后，取下凝膠模，卸下硅橡膠框，用不銹鋼藥鏟或鑷子撬開短玻璃板，再凝膠板切下一角作為加樣標志，在兩側溴酚藍染料區(qū)帶中心，插入細銅絲作為前沿標記。將凝膠板放在大培養(yǎng)皿內(nèi)，加入固定液，固定過夜。
(8)染色與脫色將染色液倒入培養(yǎng)皿中，染色1h左右，用蒸餾水漂洗數(shù)次，再用脫色液脫色，直到蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰，即可計算相對遷移率。
2.4結果和分析在大豆蛋白中大多數(shù)大豆抗營養(yǎng)因子的分子量集中在35000～600000之間，豆粕發(fā)酵后的電泳圖片顯示(1)分子量在43,000以上的大分子蛋白質(zhì)大部分被分解；(2)分子量在20,100～43,000的大分子幾乎全部被分解；(3)肽多樂中大多數(shù)蛋白分子量在14,400以下。結果說明，大豆蛋白中大豆抗營養(yǎng)因子在肽多樂中基本被分解了，發(fā)酵后的產(chǎn)品中的小肽蛋白含量在20000Dalton以下。
本發(fā)明的有益效果
本發(fā)明提供了一種原料不用蒸煮滅菌，用微生物固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)飼用小肽產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝和方法。本發(fā)明的產(chǎn)品為一種無抗營養(yǎng)因子，富含小肽和益生物質(zhì)的飼用小肽產(chǎn)品，用于飼料添加劑，可提高機體蛋白的合成速度，發(fā)酵香味可促進采食，增強機體免疫功能，促進機體對礦物元素的吸收，調(diào)節(jié)機體的各種生理活動及改善機體的營養(yǎng)狀況。
本發(fā)明提供了常規(guī)的化學分析方法，改造的隆丁法測定總肽含量，垂直型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析小肽分子量和抗營養(yǎng)因子，方法簡便，成本低，適用于有能力測定粗蛋白含量的大多數(shù)企業(yè)使用。
具體實施例方式
下面結合具體的實施例子對本發(fā)明作進一步描述，但不限制本發(fā)明實施例1稱取原料豆粕76公斤；玉米蛋白粉 3公斤；菌體蛋白粉 10公斤；酒精糟粕5公斤；玉米淀粉3公斤；麩皮1公斤；次粉1公斤。
上述原料均從原料市場購得。
首先，微生物實驗室用保藏的三種益生菌種乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌生產(chǎn)發(fā)酵菌種，乳酸菌液體10L，酵母菌和芽孢桿菌各三個斜面，所用酵母菌和芽孢桿菌的菌種懸液各480mL，種子生產(chǎn)車間用三個發(fā)酵菌種，投入1000升種子發(fā)酵罐，三個發(fā)酵罐分別發(fā)酵三個菌種，液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種各800升，微生物菌種液體經(jīng)過配料，液體菌種的比例相對于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量分別為2％、2％、4％，自來水40％，加入1公斤廢糖蜜，調(diào)節(jié)pH值至4.5，直接接入投入混合機和經(jīng)過配比的其它發(fā)酵蛋白質(zhì)原料和輔料，混合3分鐘，下料平鋪50cm發(fā)酵，靜態(tài)發(fā)酵，翻料降溫，發(fā)酵溫度控制在37～40℃，固態(tài)發(fā)酵3天，SLY.DP-1000型氣流流化床干燥，干燥出風溫度48℃，進風溫度134℃，0.8目篩網(wǎng)粉碎，計量包裝得成品。
上述乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌的培養(yǎng)基分別按照中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的316號、77號、44號培養(yǎng)基配制。
隆丁法測定總肽含量(測定方法參考“生物化學實驗技術教程”方法，趙亞華編著，華南理工大學出版社，2000年發(fā)表的測定方法)測定小肽的總含量≥15.0％；垂直型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析小肽分子量和抗營養(yǎng)因子(測定方法按照“生物化學與分子生物學實驗技術教程”方法，楊建雄編著，科學出版社，2002年發(fā)表的方法測定)小肽分子量小于20000Dalton，無抗營養(yǎng)因子；利用甲醛法對成品進行氨基氮測定(按照生物化學實驗發(fā)表的方法，上海科學技術出版社，1987年)氨基氮為0.5～1.0％；按照國家GB/T6432-1994的方法測定總氮總氮含量≥8.0％；按照酸堿滴定的方法測定乳酸含量≥3.0％；按照國家GB/T6435-1994的方法測得含水量水分含量≤12.0％。
實施例2稱取原料豆粕 75公斤；玉米蛋白粉5公斤；菌體蛋白粉15公斤；玉米淀粉 3公斤；麩皮 2公斤。
上述原料均從原料市場購得。
首先，微生物實驗室用保藏的三種益生菌種乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌生產(chǎn)發(fā)酵菌種，乳酸菌液體8L，酵母菌和芽孢桿菌各三個斜面，所用酵母菌和芽孢桿菌的菌種懸液各400mL。種子生產(chǎn)車間用三個發(fā)酵菌種，投入1000升種子發(fā)酵罐，三個發(fā)酵罐分別發(fā)酵三個菌種，液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種各800升，微生物菌種液體經(jīng)過配料，液體菌種的比例相對于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量分別為3％、3％、5％，自來水45％，加入1.5公斤廢糖蜜，調(diào)節(jié)pH值至4.3，直接接入投入混合機和經(jīng)過配比的其它發(fā)酵蛋白質(zhì)原料和輔料，混合5分鐘，下料平鋪80cm發(fā)酵，靜態(tài)發(fā)酵，翻料降溫，發(fā)酵溫度控制在35～40℃，固態(tài)發(fā)酵4天，SLY.DP-1000型氣流流化床干燥，干燥出風溫度46℃，進風溫度124℃，0.8目篩網(wǎng)粉碎，計量包裝得成品。
上述乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌的培養(yǎng)基分別按照中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的316號、77號、44號培養(yǎng)基配制。
隆丁法測定總肽含量(測定方法參考“生物化學實驗技術教程”方法，趙亞華編著，華南理工大學出版社，2000年發(fā)表的測定方法)測定小肽的總含量≥15.0％；垂直型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析小肽分子量和抗營養(yǎng)因子(測定方法按照“生物化學與分子生物學實驗技術教程”方法，楊建雄編著，科學出版社，2002年發(fā)表的方法測定)小肽分子量小于20000Dalton，無抗營養(yǎng)因子；利用甲醛法對成品進行氨基氮測定(按照生物化學實驗發(fā)表的方法，上海科學技術出版社，1987年)氨基氮為0.5～1.0％；按照國家GB/T6432-1994的方法測定總氮總氮含量≥8.0％；按照酸堿滴定的方法測定乳酸含量≥3.0％；按照國家GB/T6435-1994的方法測得含水量
水分含量≤12.0％。
實施例3稱取原料豆粕75公斤；菌體蛋白粉 15公斤；酒精糟粕5公斤；麩皮2公斤；次粉3公斤。
上述原料均為從原料市場購得。
首先，微生物實驗室用保藏的三種益生菌種乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌生產(chǎn)發(fā)酵菌種，乳酸菌液體9L，酵母菌和芽孢桿菌各三個斜面，所用酵母菌和芽孢桿菌的菌種懸液各560mL。種子生產(chǎn)車間用三個發(fā)酵菌種，投入1000升種子發(fā)酵罐，三個發(fā)酵罐分別發(fā)酵三個菌種，液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種各800升，微生物菌種液體經(jīng)過配料，液體菌種的比例相對于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量分別為2％、3％、6％，自來水43％，加入2.0公斤廢糖蜜，調(diào)節(jié)pH值至4.8，直接接入投入混合機和經(jīng)過配比的其它發(fā)酵蛋白質(zhì)原料和輔料，混合4分鐘，下料平鋪90cm發(fā)酵，靜態(tài)發(fā)酵，翻料降溫，發(fā)酵溫度控制在36～40℃，固態(tài)發(fā)酵5天，SLY.DP-1000型氣流流化床干燥，干燥出風溫度50℃，進風溫度138℃，0.8目篩網(wǎng)粉碎，計量包裝得成品。
上述乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌的培養(yǎng)基分別按照中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的316號、77號、44號培養(yǎng)基配制。
隆丁法測定總肽含量(測定方法參考“生物化學實驗技術教程”方法，趙亞華編著，華南理工大學出版社，2000年發(fā)表的測定方法)測定小肽的總含量≥15.0％；垂直型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析小肽分子量和抗營養(yǎng)因子(測定方法按照“生物化學與分子生物學實驗技術教程”方法，楊建雄編著，科學出版社，2002年發(fā)表的方法測定)
小肽分子量小于20000Dalton，無抗營養(yǎng)因子；利用甲醛法對成品進行氨基氮測定(按照生物化學實驗發(fā)表的方法，上?？茖W技術出版社，1987年)氨基氮為0.5～1.0％；按照國家GB/T6432-1994的方法測定總氮總氮含量≥8.0％；按照酸堿滴定的方法測定乳酸含量≥3.0％；按照國家GB/T6435-1994的方法測得含水量水分含量≤12.0％。
權利要求
1.一種由蛋白質(zhì)原料和輔料原料，不經(jīng)過蒸煮滅菌，直接由復合益生菌種經(jīng)微生物固態(tài)發(fā)酵而獲得的小肽的總含量15.0％，分子量＜20000Dalton，氨基氮為0.5～1.0％，總氮≥8.0％，乳酸含量≥3.0％，水分≤12.0％的飼用小肽添加劑，上述含量均按質(zhì)量百分比計算。
2.根據(jù)權利要求1所述的飼用小肽添加劑，其特征在于，所述的益生菌種為乳酸菌、酵母菌和芽孢桿菌。
3.根據(jù)權利要求1所述的飼用小肽添加劑，其特征在于，所述的蛋白質(zhì)原料為豆粕、菌體蛋白粉、玉米蛋白粉、酒精糟粕中的一種或幾種；輔料為玉米淀粉、麩皮、廢糖蜜、次粉中的一種或幾種。
4.根據(jù)權利要求3所述的飼用小肽添加劑，其特征在于，蛋白質(zhì)原料和輔料原料的配比按質(zhì)量百分比計算為豆粕56～76％；玉米蛋白粉 3～5％；菌體蛋白粉 10～15％；酒精糟粕5～10％；玉米淀粉3～5％；麩皮0～3％；廢糖蜜 1～3％；次粉0～3％。
5.如權利要求1所述的飼用小肽添加劑的制備方法，由以下步驟組成(1)用乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌三種益生菌種生產(chǎn)種子發(fā)酵菌種；(2)用發(fā)酵菌種液態(tài)生產(chǎn)微生物菌種，液體經(jīng)過配料，調(diào)節(jié)種子發(fā)酵菌種培養(yǎng)劑pH值至4.0～5.0；(3)蛋白質(zhì)原料輔料不經(jīng)過蒸煮直接投入混合機，微生物菌種接入，混合3～5分鐘；(4)下料平鋪發(fā)酵，翻料控溫，發(fā)酵溫度控制在30～40℃，靜態(tài)固態(tài)發(fā)酵3～5天；(5)氣流流化床干燥，干燥出風溫度45～52℃，進風溫度125～140℃；(6)0.8目篩網(wǎng)粉碎，計量包裝得成品。
6.根據(jù)權利要求5所述的飼用小肽添加劑的制備方法，其特征在于，相對于蛋白質(zhì)原料和輔料的總重量，乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌的接種用量分別為2～3％、2～3％、4～6％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種無抗營養(yǎng)因子、富含小肽和益生物質(zhì)的飼用小肽添加劑及其制備方法。該飼用小肽添加劑由豆粕、麩皮、玉米蛋白粉、玉米淀粉、酒精糟粕、菌體蛋白粉、廢糖蜜、次粉中的一種或幾種為原料，不經(jīng)過蒸煮滅菌處理，直接由復合益生菌種經(jīng)微生物固態(tài)發(fā)酵，去除植物蛋白原料中的多種抗營養(yǎng)因子，同時產(chǎn)生小肽、乳酸和多種益生物質(zhì)，小肽的總含量≥15.0％，分子量＜20000Dalton，氨基氮為0.5～1.0％，總氮≥8.0％，乳酸含量≥3.0％，水分≤12.0％。該添加劑可提高機體蛋白的合成速度，發(fā)酵香味可促進采食，增強機體免疫功能，促進機體對礦物元素的吸收，調(diào)節(jié)機體的各種生理活動及改善機體的營養(yǎng)狀況。
文檔編號A23K1/00GK101032280SQ20071003959
公開日2007年9月12日 申請日期2007年4月18日 優(yōu)先權日2007年4月18日
發(fā)明者李亮, 陸克文, 許云英 申請人:上海邦成生物科技有限公司