專利名稱：：一種天南星植物和微生物組合殺螺劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于消滅釘螺的滅螺劑，特別是指將一種從天南星植物塊莖中提取的富含甾體皂甙和草酸鈣針晶物質(zhì)與紫紅鏈霉菌稀釋液組合用于殺滅水陸兩棲釘螺的一種植物和微生物組合殺螺劑。
背景技術(shù)：
：血吸蟲病是嚴(yán)重危害人民身體健康和生命安全、影響經(jīng)濟(jì)社會發(fā)展的重大傳染病。釘螺是血吸蟲的唯一宿主，消滅了釘螺是血吸蟲病流行國家防治血吸蟲病的重要策略和措施。目前，化學(xué)滅螺劑在中國仍然是主要的滅螺藥物，然而，從多年的滅螺經(jīng)驗看，單靠化學(xué)滅螺很難阻斷血吸蟲病的轉(zhuǎn)播。如目前使用的氯硝柳胺是世界衛(wèi)生組織(WHO)自1972年以來唯一推薦使用的化學(xué)滅螺藥物，滅螺效果很好，但其存在致命弱點，即對兩棲類動物和魚類的毒性強(qiáng)，在有效滅螺濃度下，可引起兩棲類動物和魚類大量死亡，因此氯硝柳胺的使用受到限制，不能在魚、蟹等養(yǎng)殖區(qū)使用；同時，在浸殺釘螺時釘螺有上爬現(xiàn)象，從而導(dǎo)致滅螺效果的降低。所以，冊0推薦開發(fā)使用植物滅螺劑，但至今還沒有開發(fā)出一種能推廣使用的植物滅螺藥。其原因是植物如夾竹桃、羊蹄等對釘螺雖然具有緩慢而持久的毒殺作用，但要求的濃度較高，還未能解決釘螺上爬等問題。為了克服上述各自不足，我們將植物和微生物組合使用滅螺。通過試驗發(fā)現(xiàn)，不同的植物具有不同的協(xié)同或詰抗作用，其中發(fā)現(xiàn)天南星er"Z7esce/3sSchott)具有很強(qiáng)的滅螺效果，與我們當(dāng)前篩選的殺螺很強(qiáng)的夾竹桃相當(dāng)。且發(fā)現(xiàn)和微生物鏈霉菌10倍稀釋復(fù)配滅螺，其效果比夾竹桃和鏈霉菌復(fù)配效果好，0.1%濃度的復(fù)合滅螺效果相當(dāng)于單一成分天南星1%濃度和原菌液的滅螺效果，具有很好的協(xié)同作用，滅螺的濃度低，且解決了釘螺上爬問題，在24小時內(nèi)沒有釘螺上爬。天南星是廣泛生長于熱帶亞熱帶地區(qū)林下的一種耐陰植物，極易移栽和繁殖，這對生態(tài)工程滅螺林下的配種具有重要作用。它和鏈霉菌復(fù)合具有很好增效滅螺作用，對有效控制釘螺的繁衍和血吸蟲病的流行具有重要意義。jfe明內(nèi)容本發(fā)明的目的是尋找效果更好的新生物滅螺劑，提出了一種用天南星和鏈霉菌制備的組合殺螺劑及其制備方法。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，組合殺螺劑其配方為；1、比重為l.1—1.15的天南星濃縮液1-5%2、鏈霉菌液原液(含菌量為5xl08個/ml)1-1.5%，3、氮酮(農(nóng)藥級，》95%)0.5-1%4、其余為水以上為體積比，攪拌均勻后即為本發(fā)明組合殺螺劑。所述的天南星濃縮液的制備1)采集天南星新鮮塊莖，用清水洗凈；2)將上述原料加適量水?dāng)囁闄C(jī)粉碎，再用水浸泡48小時，過濾；3)慮渣用5倍水提取，過濾，提取3次后去除濾渣；4)合并濾液即得到含甾體皂甙和碳酸鈣針晶活性濾液，將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于60-8(TC減壓濃縮成比重為1.l一l.15濃縮液。所述的鏈霉菌液的配制1)將紫紅鏈霉菌菌種接種到高氏合成1號瓊脂平板或斜面培養(yǎng)基上作平板或斜面增菌培養(yǎng)，26—30。C培養(yǎng)，避光，48—96小時；2)菌液搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)用消毒300ml三角瓶，裝120ral搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)液，取0.5—lcm2擴(kuò)平板或斜面增菌活化菌株，紗布棉塞封瓶口，搖瓶轉(zhuǎn)速120—180轉(zhuǎn)/分，26—28'C，72—96小時，即得具有殺螺作用的紫紅鏈霉菌菌液。組合殺螺劑的使用方法使用時，所述的組合殺螺劑加約10倍的水?dāng)噭颍脟婌F器于洲灘、塘堰、稻田、溝渠兩旁孳生地噴灑滅螺。本發(fā)明的另一配方是天南星正丁醇相與鏈霉菌組合可濕性滅螺粉劑，其組成為1、天南星正丁醇提取物可濕性粉劑；2、鏈霉菌原液的干燥粉劑；3、氮酮(農(nóng)藥級，》95%)0.5-1%以上1和2按1-5:1的質(zhì)量比配比，加適量水溶解，氮酮按總體積含量為0.5-196的量加入。攪拌均勻后即為本發(fā)明組合殺螺粉劑。所述的天南星正丁醇相可濕性粉劑的制備1)用天南星塊莖洗凈，粉碎機(jī)粉碎，再用水浸泡48小時，過濾，得到含甾體皂甙活性濾液；2)上述濾液再用正丁醇萃取得到正丁醇相；3)蒸餾回收正丁醇；4)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于60-8(TC減壓濃縮、干燥，或用冷凍干燥法凍干，也可用噴霧千燥機(jī)于100-ll(TC條件下瞬間噴霧干燥，即得具有殺螺活性的天南星正丁醇提取物可濕性粉劑；所述的鏈霉菌液的配制同上，鏈霉菌液用冷凍干燥法凍干，得鏈霉菌原液的干燥粉劑；天南星正丁醇相與鏈霉菌組合可濕性滅螺粉劑的使用方法使用時將天南星正丁醇相與鏈霉菌組合可濕性滅螺粉劑加水溶解稀釋，濃度為40-100mg/L的水懸浮液。該水懸浮液用噴霧器于洲灘、塘堰、稻田、溝渠兩旁孳生地噴灑滅螺。綜上所述利用天南星和鏈霉菌組合可濕性殺螺劑，具有以下優(yōu)點1.資源豐富天南星在全國除部分干旱等地區(qū)外廣為分布，且繁殖容易，可種子和塊莖繁殖，目前全國已有天南星作為藥材的生產(chǎn)基地，所以取材容易。2.運輸方便本發(fā)明殺螺劑較為穩(wěn)定，便于生產(chǎn)、儲存、運輸和使用。3.符合環(huán)保要求該產(chǎn)品殺螺效果持續(xù)穩(wěn)定，對環(huán)境無污染，對人蓄和魚類無的毒害，符合環(huán)保要求4.成本低廉該產(chǎn)品綜合成本低于化學(xué)合成滅螺制劑，經(jīng)濟(jì)效應(yīng)、社會效應(yīng)和生態(tài)效應(yīng)明顯。本發(fā)明按WHO"殺螺劑實驗室終篩方法"中的浸泡法進(jìn)行殺螺試驗。結(jié)果表明，其中可濕性粉劑殺滅釘螺的作用與氯硝柳胺相比，可濕性粉劑可有效抑制釘螺的上爬，防止其逃逸殺傷。具體實施方式實施例1取天南星新鮮塊莖5kg，按天南星濃縮液的制備流程制備，得天南星濃縮液5000mL;鏈霉菌按鏈霉菌原液制備流程制備1000mL和另取氮酮各1000mL;其余為水。所有組份按組合配方配制天南星與鏈霉菌組合殺螺劑。實施例2天南星新鮮塊莖10kg，按天南星正丁醇相的制備流程制備，得天南星正丁醇提取物可濕性殺螺干粉2.72kg,使用時將粉劑加適量水溶解;另取鏈霉菌原液和氮酮各1000mL;其余為水。所有組份按組合配方配制天南星與鏈霉菌組合殺螺劑。應(yīng)用實施例參見附件1，對魚類的影響參見附件2，鏈霉菌的接種和培養(yǎng)見附件3。附件1本發(fā)明滅螺試驗(復(fù)試)的試驗報告實驗例1實驗采用浸泡法。實驗在溫度控制在(20±1)°C條件下進(jìn)行。取活釘螺100只為一組，每20個裝入一個尼龍網(wǎng)袋中，分別將各組(每組3袋或5袋)釘螺浸入盛有l(wèi)OOOml不同濃度的天南星單一成分及本發(fā)明組合殺螺劑水溶液的玻璃缸中，另設(shè)氯硝柳胺水溶液和無氯清水對照。處理ld、2d、3d后，將各處理中的釘螺隨機(jī)取出1袋，用無氯水沖洗數(shù)次，再放入清水中靜置1天，然后作存活檢査開庵爬行者為活螺，余下的用敲碎和解剖卸剌的方法，鑒別死活。實驗重復(fù)3次，取其平均值作為實驗結(jié)果(見表1)。表1本發(fā)明殺螺效果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>用不同濃度的天南星塊莖水提取物處理釘螺，在不同時間的處理下，釘螺死亡率隨處理濃度的增加，釘螺死亡率呈上升趨勢。而在與鏈霉菌稀釋液(原液稀釋10倍)組合殺螺處理中，釘螺死亡率顯著上升。與其單一成分相比，組合殺螺效果明顯高于單一成分效果，如0.1%濃度組合在處理ld后，釘螺死亡率達(dá)到90%以上，是單一成分同等濃度殺螺效果的4-5倍，相當(dāng)于單一成分1%濃度的滅螺效果。組合殺螺表現(xiàn)出明顯的協(xié)同殺螺作用(C(組合，A+B)。因此，本組合發(fā)明明顯提高了殺螺效率和降低了天南星的用藥量。實驗例2實驗采用浸泡法。實驗在溫度控制在(20±1)°C條件下進(jìn)行。取活釘螺100只為一組，每20個裝入一個尼龍網(wǎng)袋中，分別將各組(每組5袋)釘螺浸入盛有1000ml不同濃度的天南星正丁醇提取物單一組分及其本發(fā)明的正丁醇提取物與鏈霉菌組合殺螺劑水溶液的玻璃缸中，另設(shè)氯硝柳胺水溶液和無氯清水對照。于處理ld、2d、3d、4d和5d后，將各處理中的釘螺隨機(jī)取出1袋，用無氯水沖洗數(shù)次，再放入清水中靜置1天，然后作存活檢査開庵爬行者為活螺，余下的用敲碎和解剖卸刺的方法，鑒別死活。實驗重復(fù)3次，取其平均值作為實驗結(jié)果(見表1與表2)。表1天南星正丁醇提取物(mg/L)和鏈霉菌稀釋液(107個/mL)配伍滅螺效果(％)濃度及殺螺效果(％)__復(fù)合處ld2d3d4d5d_^_清水0氯硝賴卩74.8胺11.3B6.74016.48026.620028.740020.340+B30.880+B48.6200+B56.3400+BB表示菌液用不同濃度的天南星塊莖正丁醇提取物單一成分及其組合殺螺劑處理釘螺，在不同時間的處理下，釘螺死亡率規(guī)律仍然表現(xiàn)出隨處理濃度的增加，釘螺死亡率呈上升趨勢。但本發(fā)明的組合殺螺劑處理釘螺中，釘螺死亡率顯著上升。與其單一成分相比，組合殺螺效果明顯高于單一成分效果，即組合殺螺表現(xiàn)出明顯的協(xié)同殺螺作用(C(組合)〉A(chǔ)+B)。因此，本組合發(fā)明明顯提高了殺螺效率。表2氯硝柳胺是普遍使用的化學(xué)滅螺劑，將本發(fā)明的滅螺效果與之對照，可知80mg/L本發(fā)明復(fù)合殺螺劑水溶液與lppm氯硝柳胺溶液的滅螺效果相當(dāng)。不過本發(fā)明藥明藥效較氯硝柳胺略慢。用lppm氯硝柳胺溶液處理釘螺3天可達(dá)100%的死亡率，用80mg/L的本發(fā)明水溶液處理需要4天才能達(dá)到同樣的效果。000093.610010010020.333.346.678.626.730.651.367.623.333.757.871.940.863.387.394.460.710010010051.067.887.696.778.59410010086.310010010096.6100100100表2天南星正丁醇提取物(mg/L)和鏈霉菌稀釋液(107個/mL)配伍滅螺效果(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>附件2本發(fā)明的魚類毒性試驗1.魚類的急性毒性試驗將魚苗(鯽魚)放入四個濃度(40mg/L、80mg/L、200mg/L、400mg/L)的本發(fā)明水溶液中，每天觀察魚苗的反應(yīng)，無異?，F(xiàn)象發(fā)生，400mg/L游動也很輕快，72小時后統(tǒng)計魚苗無死亡，再觀察48小時后，仍無異常和死亡現(xiàn)象。2.魚類慢性毒性試驗將所買魚苗(鯽魚)放入本發(fā)明復(fù)合水劑的四個濃度(40mg/L、80mg/L、200mg/L400mg/L)和一個清水對照的處理中，30天后分別測量魚的體長、稱魚的體重，進(jìn)統(tǒng)計分析。所得數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析見下表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>在2對照組和處理組的鯽魚魚苗體重的方差分析<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>從以上的方差分析可知，F(xiàn)<F。.Q5，F(xiàn)<F。.<n，對照組和各濃度組飼養(yǎng)魚的無顯著差異:,可見本發(fā)明水溶液對鯽魚的體重增長無顯著影響。表3鯽魚魚苗飼養(yǎng)30天后的體長(cm)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表4對照組和處理組鯽魚魚苗體長的方差分析<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上方差分析可知，F(xiàn)<F。.。5，F(xiàn)<F。.D1，處理組和對照組的鯽魚魚苗體長無顯著差異，也就是說四個濃度的本發(fā)明水溶液對鯽魚魚苗的生長也無顯著影響。在上述四個濃度的本發(fā)明水溶液中對鯉魚魚苗的飼養(yǎng)也無顯著影響。通過實驗數(shù)據(jù)和方差分析，結(jié)果表明在對釘螺有較強(qiáng)殺滅效果的不同濃度本發(fā)明中詞養(yǎng)鯽魚一個月后，對鯽魚魚苗的生長發(fā)育均無顯著影響。附件3.菌種培養(yǎng)將紫紅鏈霉菌菌種接種到高氏合成1號瓊脂平板或斜面培養(yǎng)基上作平板或斜面增菌培養(yǎng)，26—30'C培養(yǎng)，避光，48—96小時；菌液搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)用消毒300ml三角瓶，裝120ml搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)液，取0.5—lcm2擴(kuò)平板或斜面增菌活化菌株，紗布棉塞封瓶口，搖瓶轉(zhuǎn)速120—180轉(zhuǎn)/分，26—28'C，72—96小時；得具有殺螺作用的紫紅鏈霉菌菌液；上述高氏合成1號瓊脂平板或斜面培養(yǎng)基是將可溶性淀粉8—12g、燕麥粉8—10g、硝酸鉀1—2g、磷酸氫二鉀0.5—lg、硫酸鎂0.5—0.8mg、氯化鈉0.5—0.8g、硫酸亞鐵8—12mg、瓊脂18—22g及水1000ml耐混合；搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)液是將可溶性淀粉、蔗糖、碳酸鈣、磷酸氫二鉀0.5—lg、硫酸鎂0.5—0.8mg、氯化鈉0.5—0.8g、燕麥粉8—10g、玉米粉、硫酸按、酵母粉、植物油、及水1000ml混合；將上述高氏合成1號瓊脂平板或斜面培養(yǎng)基和搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)液用氫氧化鈉或碳酸氫鈉調(diào)pH7.27.4,110—13FC滅菌20—30min,冷卻后至室溫備用。權(quán)利要求1、一種天南星植物和微生物組合殺螺劑，其特征在于其配方為a)、比重為1.1—1.15的天南星濃縮液1-5％，b)、鏈霉菌液原液(含菌量為5×108個/ml)1-1.5％，c)、氮酮(農(nóng)藥級，≥95％)0.5-1％，d)、其余為水，以上為體積比，攪拌均勻后即為本發(fā)明組合殺螺劑。2、一種天南星植物和微生物組合殺螺粉劑，其特征k于其配方為a)、天南星正丁醇提取物可濕性粉劑；b)、鏈霉菌原液的干燥粉劑；c)、氮酮(農(nóng)藥級，》95%)0.5-1%以上a)和b)按1-5:l的質(zhì)量比配比，加適量水溶解，氮酮按總體積含量為0.5-1%的量加入。攪拌均勻后即為本發(fā)明組合殺螺粉劑。全文摘要本發(fā)明提出了一種用天南星和鏈霉菌制備的組合殺螺劑，其配方為1.比重為1.1-1.15的天南星濃縮液1-5％，2.鏈霉菌液原液(含菌量為5×10⁸個/ml)1-1.5％，3.氮酮(農(nóng)藥級，≥95％)0.5-1％，4.其余為水。以上為體積比，攪拌均勻后即為本發(fā)明組合殺螺劑。本發(fā)明的另一配方是天南星正丁醇相與鏈霉菌組合可濕性滅螺粉劑，其組成為1.天南星正丁醇提取物可濕性粉劑，2.鏈霉菌原液的干燥粉劑，3.氮酮(農(nóng)藥級，≥95％)0.5-1％。以上1和2按1-5∶1的質(zhì)量比配比，加適量水溶解，氮酮按總體積含量為0.5-1％的量加入。攪拌均勻后即為本發(fā)明組合殺螺粉劑。本發(fā)明原料資源豐富，成本低廉，殺螺效果持續(xù)穩(wěn)定，符合環(huán)保要求。文檔編號A01N65/40GK101455212SQ200810246309公開日2009年6月17日申請日期2008年12月31日優(yōu)先權(quán)日2008年12月31日發(fā)明者楊金蓮,柯文山,馬安寧申請人:湖北大學(xué)