專利名稱：慈菇組培育苗方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種慈菇組培育苗方法。
背景技術：
慈菇(Sagittaria sagittrifolia L.)又名慈菇，植物分 類學上為澤瀉科水生草本植物，是人們喜食的一個水生蔬菜品種。慈菇人工栽 培已有上百年的歷史，傳統(tǒng)的栽培方法是保芽留種法，就是選取生長狀實的芽 莖作為下一代的種苗進行繁殖，屬無性繁殖。慈菇在種植過程中易感染病毒， 發(fā)病時在葉片和葉柄上形成黃白色的斑泡，以后瘤泡內充滿白色乳狀漿水，最 后乳狀漿水變成黑粉狀物，布滿整個葉片。傳統(tǒng)的保芽留種法，使病毒逐代積 累，逐年加重，引起慈燕種性退化、產量降低、品質變劣。目前種植戶采取慈 菇傳統(tǒng)自由留種，病毒感染面積大約占總面積的80%以上，使得慈菇生產水平 相對較低畝產量逐年降低。噴施農藥成本不斷攀升，而造成農藥殘留加重，影 響食用安全。
像雜交水稻一樣，利用組織培育的方法，選育出具有一代明顯生長優(yōu)勢的 種苗，在當代增加產量的方法已經在一些植物品種上得到應用。但是在某一具 體品種上如何進行培育卻是沒有一塵不變的路子可走的，必須針對特定品種的 生物學特性加以研究，開發(fā)出適合的工藝方法，才能產生像雜交稻那樣的效果。 慈菇的組培育苗到目前為止尚無人研究的報道，更無組培苗的生產和銷售出 現(xiàn)。這一問題尚待人們研究解決
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提出一種慈菇組培育苗方法，依該方法培育
出來的種苗具有長生旺、產量高、抗病能力強的特性，方法本身可操作性強， 種苗品質穩(wěn)定，以此彌補現(xiàn)有技術的不足。
本發(fā)明提出的這種慈菇組培育苗方法，其特征在于有如下步驟
(1)制備下列無菌培養(yǎng)基待用
誘導芽培養(yǎng)基MS + 6-BA 2-6mg/L + NAA 0. 5-1. 0mg/L +蔗糖30g/L、增 殖培養(yǎng)基MS + 6-BA 2-4mg/L + NAA 0. 1-0. 5mg/L +蔗糖30g/L、壯苗生根培 養(yǎng)基1/2 MS + NAA 0. l-O. 5mg/L +蔗糖15g/L;(2) 選取健壯的慈菇莖芽經消毒滅菌處理后先置入誘導芽培養(yǎng)基中，讓 其萌動生長，之后將莖芽和腋芽轉移到增殖培養(yǎng)基上增殖培養(yǎng)；
(3) 將上步增殖后植株2-3cm高的叢生苗接到壯苗生根培養(yǎng)基上繼續(xù)培 養(yǎng)，得到生根壯苗；
(4) 將上步得試管苗放在自然光下煉苗1周左右，取出洗去根部培養(yǎng)基， 無菌水中預培養(yǎng)，使其健壯生長得原原種幼苗；
(5) 將上步所得生長良好的原原種幼苗移栽大田，并進行常規(guī)水肥管理， 得原種苗。
選取生長健壯的原種苗果實的慈菇芽莖，植入大田中規(guī)模繁育培養(yǎng)，進行 常規(guī)田間管理，小苗成活到適栽尺寸后即成生產苗。
慈菇莖芽在第(2) - (3)步的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為pH5. 8-6.0，培養(yǎng) 溫度25-27。C，光照強度1500-2000LX，光照時間10-12小時/天。
第(2)步中慈菇莖芽的消毒做法是將莖芽放在燒杯里用肥皂水沖洗干 凈，再用自來水沖洗l小時，移入經消毒的河沙沙床預培15天后，取出用肥 皂水和自來水沖洗干凈，移入無菌接種箱內，浸泡在20%的次氯酸鈉溶液中5-10 分鐘，取出后用無菌水沖洗3-5次，再浸泡在重量百分濃度為0. 1%的升汞溶液 中8-10分鐘，取出后用無菌水沖洗3-5次。
第(2)步的培養(yǎng)時間20天(可以是15-25天)，第(3)步的培養(yǎng)時間 是25天(可以是20-30天)，第(3)步的培養(yǎng)時間是10-15天。
第(5)步移栽大田的原原種幼苗株高要求在8-15cm。
第(1)步中的培養(yǎng)注解MS的成分和用量(mg/L)為
認03 1900、 NH4Na, 1650、 KH2P04 170、 MgS04. 7H203 70、 CaC12. H204 40、 MnS04. 4H202 2 . 3、 ZnS04. 7H208 . 6貼0:,6. 2、 KI0. 83、 Na2M()04. 2H2oO. 25、 CuS04. 5H20 0.025、 C()Cl. 6H200 . 02 5、 Na2-EDTA37. 3、 FeS04. 4H2027. 8、維生素B力.5、維生 素BA 1、甘氨酸2、煙酸O. 5、肌醇IOO。
經第(2)后，增殖系數(shù)可達到3-4倍。第(3)步的10-15天后小苗基部 出現(xiàn)白色根突，隨后逐漸伸長，生根率達90%以上。
5本發(fā)明的實質是將被病毒污染了的、被長期抑制著的原有生長特性的慈菇 種苗進行脫毒處理，切斷病毒在慈菇代際間的傳遞，將品種原有的生長潛力和 抗病蟲害能力充分釋放，集中在生產苗這一代體現(xiàn)出來。本發(fā)明通過把現(xiàn)代植 物組培的理論與慈燕這一具體品種的生長習性的實際相結合，提出了適合的脫 毒組培慈菇生產苗的方法和工藝措施，解決了人們長期渴望解決而沒有很好解 決的問題。
本發(fā)明取得積極效果體現(xiàn)在
1、 生產苗的長勢明顯優(yōu)于傳統(tǒng)種苗，慈菇產量平均提高20-30%。
2、 生產苗的植株抗病蟲害能力強，常見病發(fā)病率較傳統(tǒng)種苗低50%以上， 蟲害少30%以上，施用農藥平均少80%。
3、 慈燕品質優(yōu)良，各種營養(yǎng)成分含量與傳統(tǒng)的大致相同或略優(yōu)。
4、 本發(fā)明的方法操作性強，種苗品質穩(wěn)定，培育成本低，容易推廣。


圖1是本發(fā)明的工藝流程原則框圖。
圖2是工廠化生產苗增育的工藝流程框圖。
圖2中，慈菇苗按2500株/畝計算；畝收慈菇球莖按30000個/畝計算。
具體實施方式
第一步選擇優(yōu)良的無性外植體(慈菇芽)莖芽，照上述方 法消毒處理，移入消毒的河沙沙床上預培15天后取出用肥皂水和自來水沖洗 千凈，移入無菌箱中浸泡于重量百分濃度為20%的次氯酸鈉溶液中5-10分鐘， 取出后無菌清水洗凈再用重量百分濃度為0. 1%的升汞溶液浸泡8-10分鐘，再 用無菌水沖洗干凈，依次在誘導芽培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根壯苗培養(yǎng)基中培 養(yǎng)得試管苗。試管苗再煉苗7天即得原原種幼苗。原原種幼苗移栽大田，迸行 常規(guī)水肥管理，所得果實，慈菇芽莖即為原種苗。原種苗已經是脫毒后的良種 苗，獲得了先天的優(yōu)良生長特性。原種苗經規(guī)模培育成小植株后就是可直接用 于生產的生產苗。與雜交稻種子有相類似的本質。
本例上述接種在誘導培育基的具體做法是截取已消毒的材料莖尖生長點 3-5mm接種到培養(yǎng)基上，6-8天莖尖轉綠基部組織膨大，生出小芽和匍匐莖。 20天左右有腋芽生出，這時移到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天左右，增殖系數(shù)達到3-4倍。植株生長明顯加快。接下來把2-3cm高的叢生苗移到壯苗生根培養(yǎng)基 中培養(yǎng)10-15天后有根突長出，生根率達到90%左右，此后，根系生長加快。 再后來的煉苗、移栽到原種苗的繁育步驟如上，此處不再贅述。這些步驟都是 在無菌條件進行的。
三種培養(yǎng)基是誘導芽培養(yǎng)基MS + 6-BA 2-6mg/L + NAA 0. 5-1. 0mg/L + 蔗糖30g/L、增殖培養(yǎng)基MS + 6-BA 2-4mg/L + NAA 0. 1-0. 5mg/L +蔗糖30g/L、 壯苗生根培養(yǎng)基1/2 MS + NAA 0. 1-0. 5mg/L +蔗糖15g/L。
其中培養(yǎng)注解MS的成分和用量(mg/L)為
KNO:, 1900、 NH4N0:, 1650、 Kfy^ 170、 MgS04. 7H20370、 CaC12. H20440、 MnS04. 4H2022. 3、 ZnS04. 7H208 , 6貼036 . 2、 KIO. 83、 Na2M。04. 2H200. 25、 CUS(V 5H20 0.025、 C。C1.6H200.025、 Na2-EDTA37. 3、 FeS04. 4H2027. 8、維生素B在5、維生 素B,O. 1、甘氨酸2、煙酸O. 5、肌醇IOO。
6-BA是六卞基氨基腺嘌呤，作為細胞分裂素用，NAA是萘乙酸，作為細胞 生長素用。
上述三種培養(yǎng)基中培養(yǎng)的條件均為為pH5. 8-6.0，培養(yǎng)溫度25-27。C，光 照強度1500-2000LX，光照時間10-12小時/天。其余條件同上。
以圖2所示的順序和數(shù)量，用9000個外殖體(普通慈燕芽)，經本例的 方法培育，獲得原種苗17000株，全部移栽到6.8畝大田，收獲慈菇種球20.4 萬個，全部栽種于81.6畝大田，又收獲245萬個慈菇種球。
經在小范圍內對比試驗，在水肥、氣候和土壤條件都相同時，用本發(fā)明組 培苗栽種的慈菇較之傳統(tǒng)同種慈菇長勢明顯，產量平均提高20-30%;植株抗病 蟲害能力強，常見病發(fā)病率較傳統(tǒng)種苗低50%以上，蟲害少30%以上，施用農 藥平均少80-90%;慈菇個頭大，無空隙，品質優(yōu)良，各種營養(yǎng)成分含量與傳統(tǒng) 的大致相同或略優(yōu)。
權利要求
1、一種慈菇組培育苗方法，其特征在于有如下步驟(1)制備下列無菌培養(yǎng)基待用誘導芽培養(yǎng)基MS+6-BA 2-6mg/L+NAA 0.5-1.0mg/L+蔗糖30g/L、增殖培養(yǎng)基MS+6-BA 2-4mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L+蔗糖30g/L、壯苗生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.1-0.5mg/L+蔗糖15g/L；(2)選取健壯的慈菇莖芽經消毒滅菌處理后先置入誘導芽培養(yǎng)基中，讓其萌動生長，之后將莖芽和腋芽轉移到增殖培養(yǎng)基上增殖培養(yǎng)；(3)將上步增殖后植株2-3cm高的叢生苗接到壯苗生根培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，得到生根壯苗；(4)將上步得試管苗放在自然光下煉苗1周左右，取出洗去根部培養(yǎng)基，無菌水中預培養(yǎng)，使其健壯生長得原原種幼苗；(5)將上步所得生長良好的原原種幼苗移栽大田，并進行常規(guī)水肥管理，得原種苗。
2、 根據(jù)權利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于選取生長健壯 的原種苗果實的慈菇芽莖，植入大田中規(guī)模繁育培養(yǎng)，進行常規(guī)田間管理，小 苗成活到適栽尺寸后即成生產苗。
3、 根據(jù)權利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于慈菇莖芽在第 (2) - (3)步的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為pH5. 8-6.0,培養(yǎng)溫度25-27°C，光照強度1500-2000LX,光照時間10-12小時/天。
4、 根據(jù)權利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于第(2)步中慈 菇莖芽的消毒做法是將莖芽放在燒杯里用肥皂水沖洗干凈，再用自來水沖洗 1小時，移入經消毒的河沙沙床預培15天后，取出用肥皂水和自來水沖洗干凈， 移入無菌接種箱內，浸泡在20%的次氯酸鈉溶液中5-10分鐘，取出后用無菌水 沖洗3-5次，再浸泡在重量百分濃度為O. 1%的升汞溶液中8-10分鐘，取出后 用無菌水沖洗3-5次。
5、 根據(jù)權利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于第(2)步的培養(yǎng)時間20天(可以是15-25天)，第(3)步的培養(yǎng)時間是25天(可以是20-30 天)，第(3)步的培養(yǎng)時間是10-15天。
6、 根據(jù)權利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于第(5)步移栽 大田的原原種幼苗株高要求在8-15cm。
7、 根據(jù)權利要求1所述的慈菇組培育苗方法，其特征在于第(1)步中的 培養(yǎng)注解MS的成分和用量(mg/L)為KN0:, 1900、 NE,N03 1 6 50、 KH2P04 170、 MgS04, 71^0370、 CaC12. H20440、 M S04. 4H2022. 3、 Z S0" 7H208. 6H3B036. 2、 KIO. 83、 Na2M。04. 2H200 . 25、 CuS(k 5H20 0.025、 C()Cl. 6H200 . 02 5、 Na2-EDTA37. 3、 FBS(K 4H2027. 8、維生素Bfi0. 5、維生 素BiO. 1、甘氨酸2、煙酸O. 5、肌醇IOO。
全文摘要
本發(fā)明是一種慈菇組培育苗方法，內容包括制備無菌的誘導芽培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和壯苗生根培養(yǎng)基；選取慈菇莖芽經消毒滅菌置入誘導芽培養(yǎng)基中，讓其萌動生長，之后又先后轉移到增殖培養(yǎng)基和壯苗生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)成試管苗；將試管苗煉苗1周左右，取出在無菌水中預培養(yǎng)，得原原種幼苗；將原原種幼苗移栽大田，并進行常規(guī)水肥管理，得原種苗，原種苗果實的慈菇芽莖，規(guī)模繁育培養(yǎng)即成生產苗。本發(fā)明通過對種苗組織的脫毒無菌培養(yǎng)，恢復品種原有的生長潛力和抗病蟲害能力，生產苗本代的慈菇產量平均提高20-30％，抗病蟲害能力明顯增強，施用農藥平均減少80％。方法操作性強，種苗品質穩(wěn)定，培育成本低，容易推廣。
文檔編號A01H4/00GK101554137SQ200910094348
公開日2009年10月14日 申請日期2009年4月9日 優(yōu)先權日2009年4月9日
發(fā)明者白永興 申請人:白永興