專利名稱::巨桉無性系wleg-17組培培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
:本發(fā)明涉及一種桉樹組培培養(yǎng)基,特別涉及巨桉無性系WLEG-17組培培養(yǎng)基。
背景技術(shù):
:桉樹是世界上三大速生樹種之一,其中,巨桉無性系WLEG-17(學(xué)名為EucaiyptusgrandisHillexMaiden)是我國南方熱帶、亞熱帶地區(qū)最為重要的速生豐產(chǎn)林造林品種,具有生長迅速、干形通直、樹形優(yōu)美、材質(zhì)好、抗病蟲、抗高溫干旱、較耐貧瘠等優(yōu)點(diǎn)。由于常規(guī)的扦插繁殖不能滿足大面積造林對(duì)巨桉無性系WLEG-17種苗的需求,因此,目前多利用組織培養(yǎng)忮術(shù)進(jìn)行工廠化繁育,以在短期內(nèi)獲得大量遺傳背景相同、生長勢強(qiáng)的優(yōu)良種苗。組織培養(yǎng)是否成功,在很大程度上取決于對(duì)培養(yǎng)基的選擇。目前,植物組織培養(yǎng)普遍使用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。其由大量元素(硝酸鉀、硝酸銨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和氯化鈣)、微量元素(碘化鉀、硼酸、硫酸錳、硫酸鋅、鉬酸鈉、碗酸銅和氯化鈷)、鐵鹽(乙二胺四乙酸二鈉和碗酸亞鐵)、有機(jī)物(肌醇、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸)、激素(6-芐氨基嘌呤和萘乙酸)、蔗糖和瓊脂組成大量元素保證植抹生長所需的礦質(zhì)營養(yǎng)并加速愈傷組織的生長;微量元素、鐵鹽和有機(jī)物給予植林全面的營養(yǎng)保證,確保植林正常生長;激素的調(diào)控使植林在離體條件下快速健壯生長;蔗糖為植林生長提供必需的碳源并調(diào)節(jié)滲透壓;瓊脂對(duì)植林起支持和固定作用。但是,采用MS培養(yǎng)基進(jìn)行巨桉無性系WLEG-17組織培養(yǎng)時(shí),常出現(xiàn)以下問題組培苗生長勢弱、葉片大、莖細(xì)小、伸長生長慢、多次繼代后易出現(xiàn)愈傷和玻璃化現(xiàn)象等。
發(fā)明內(nèi)容有鑒于此,為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足,本發(fā)明的目的在于對(duì)MS培養(yǎng)基進(jìn)行改進(jìn),提供一種適合巨桉無性系WLEG-17組培苗連續(xù)繼代、快速、高效、健壯生長的組培培養(yǎng)基。為達(dá)到此目的,本發(fā)明的巨桉無性系WLEG-17組培培養(yǎng)基,由具有以下濃度的組分組成硝酸鉀KN0319002375mg/L硝酸銨NH4N03273411mg/L磷酸二氫鉀KH2P04270338mg/L硫酸鎂MgS04'7H20480~540mg/L硝酸鈣Ca(N03)2'4H20300mg/L碘化鉀KI0.83mg/L硼酸H3B036.2mg/L硫酸錳MnS04.4H2022.3mg/L硫酸鋅ZnS04.7H208.6mg/L鉬酸鈉Na2Mo04,2H200.25mg/L硫酸銅CuS04.5H200.025mg/L氯化鈷CoCl2.6H200,025mg/L乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA'2H2037.3mg/L硫酸亞鐵FeS04'7H2。27.8mg/L肌醇100mg/L甘氨酸2mg/L.硫胺素VB!0.1mg/L鹽酸吡p多醇VB60.5mg/L煙酸VBs或VPP0.5mg/L核黃素VB26mg/L6-芐氨基嘌呤6-BA0.5mg/L萘乙酸NAA0.2mg/L嚴(yán)糖30000mg/L瓊脂4700mg/L進(jìn)一步,所述KN03的濃度為2138mg/L,NHtNOs的濃度為319411mg/L,KH2P04的濃度為304mg/L,MgS04'7H20的濃度為480mg/L。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明的巨桉無性系WLEG-17組培培養(yǎng)基,在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,通過調(diào)整大量元素的種類和濃度,添加有機(jī)附加成分核黃素,優(yōu)化激素調(diào)控和瓊脂濃度等,為巨桉無性系WLEG-17組培苗提供了均衡合理的營養(yǎng)需求,保證了其快速、高效、健壯生長,有效的控制了愈傷和玻璃化現(xiàn)象的產(chǎn)生。具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚,下面對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。1、實(shí)驗(yàn)材料以重慶高校園林花卉工程研究中心組培室中的巨桉無性系WLEG-17優(yōu)良單林離體芽器官誘導(dǎo)培養(yǎng)擴(kuò)繁而來的組培繼代苗為實(shí)驗(yàn)材料。2、實(shí)-險(xiǎn)方法根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和長期的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)確定巨桉無性系WLEG-17組培培養(yǎng)基的基礎(chǔ)配方(見表l),再采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),將基礎(chǔ)配方中4種大量元素成分的濃度分別按1/8的等差連續(xù)遞增兩次和遞減兩次,而其它組分及其濃度保持不變(見表2),觀察每種大量元素缺失或過量時(shí)組培繼代苗的生長情況,以優(yōu)化組;咅培^^基配方。表1巨桉無性系WLEG-17組培培養(yǎng)基的基礎(chǔ)配方組分濃度(mg/L)硝酸鉀KN031900硝酸銨NH4N03365大量元素磷酸二氫鉀KH2P04270硫酸鎂MgS04.7H20480硝酸4丐Ca(N03)2'4H20300橫化鉀KI0.83硼酸H3B036.2硫酸錳MnS04*4H2022.3微量元素硫酸鋅ZnS04.7H208.6鉬酸鈉Na2MoCV2H200.25硫酸銅CuS04'5H200.025氯化鈷CoCl2.6H200.025乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA'2H2037.3鐵鹽硫酸亞鐵FeS(V7H2027,8肌醇100甘氨酸2.硫胺素VBi0.1有機(jī)物鹽酸吡。多醇VB60.5煙酸VBs或VPP0.5核黃素VB266-千氨基噪呤6-BA0.5激素萘乙酸NAA0.2蔗糖30000瓊脂4700表2巨桉無性系WLEG-17組培培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)配方編號(hào)組分濃度(mg/L)*認(rèn)03KH2P04MgS04.7H20Ml(基礎(chǔ)配方)l卯0270480365M22375270480365M32138270480365M41663270480365M51425270480365M61900338480365M71900304480365M81900236480365M91900203480365M101900270600365Mil1900270540365M121900270420365M131900270360365M141900270480456M151900270480411M161900270480319M171900270480273*其余組分及其濃度同表1的基礎(chǔ)配方。選取生長一致且健壯的巨桉無性系WLEG-17優(yōu)良單株離體芽器官誘導(dǎo)培養(yǎng)擴(kuò)繁而來的組培繼代苗136瓶,接種于上述配方(表2的M1~M17)的組培培養(yǎng)基中,每種配方接種8瓶,連續(xù)繼代4次,每次繼代周期為20天,統(tǒng)計(jì)每種配方培養(yǎng)的組培苗的苗高、健壯程度、葉形葉色,在新生組培苗莖尖上是否產(chǎn)生愈傷,以及新生組培苗是否有玻璃化等。83、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)認(rèn)03對(duì)巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的影響調(diào)整基礎(chǔ)配方中KN03的濃度,其余組分及其濃度保持不變。結(jié)果見表3,當(dāng)KN03的濃度高于基礎(chǔ)配方時(shí),隨著濃度的增加,芽苗高度和健壯程度均呈現(xiàn)出先增高后降低的趨勢,其中配方M3的芽苗生長最高,平均高度達(dá)1.8cm且生長健壯,繼續(xù)增加KN03的濃度,芽苗高度逐漸降低且長勢變?nèi)?;?dāng)KN03的濃度低于基礎(chǔ)配方時(shí),隨著濃度的降低,芽苗高度呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢,且健壯程度逐漸變?nèi)?,葉色逐漸變紅;在這五個(gè)配方中,芽苗葉形均正常,且均無愈傷和玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生。綜合考慮,適合巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的KN03的較佳濃度為1900~2375mg/L,最佳濃度為2138mg/L。表3KN03對(duì)巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的影響配方苗高健壯程度葉形葉色愈傷玻璃化Ml1.5cm健壯正常綠色無無M21.6cm較壯正常綠色無無M31.8cm健壯正常綠色無無M41.4cm較弱正常少量偏紅無無M51.3cm最弱正常大部分偏紅無無2)KH2P04對(duì)巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的影響調(diào)整基礎(chǔ)配方中KH2P04的濃度,其余組分及其濃度保持不變。結(jié)果見表4,當(dāng)KH2P04的濃度高于基礎(chǔ)配方時(shí),隨著濃度的增加,芽苗高度逐漸增加,生長健壯,葉色正常,無愈傷和玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生,但配方M6有極小部分葉片偏大;當(dāng)KH2P04的濃度低于基礎(chǔ)配方時(shí),芽苗高度降低,生長健壯,葉形葉色正常,但有愈傷產(chǎn)生。綜合考慮,適合巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的KH2POJ々較佳濃度為270~338mg/L,最佳濃度為304mg/L。表4KH2PCMt巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3)MgS047H20對(duì)巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的影響調(diào)整基礎(chǔ)配方中MgS04.7H20的濃度,其余組分及其濃度保持不變。結(jié)果見表5,當(dāng)MgS04.7H20的濃度高于基礎(chǔ)配方時(shí),隨著濃度的增加,葉形呈現(xiàn)出逐漸減小的趨勢,且配方M10出現(xiàn)愈傷;當(dāng)MgS047H20的濃度低于^f出配方時(shí),芽苗高度降低,且隨著濃度的降低,葉形逐漸增大,葉色逐漸變黃;在這五個(gè)配方中,芽苗生長均健壯,且均無玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生。綜合考慮,適合巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的MgS04'7H20的4交佳濃度為480~540mg/L,最佳濃度為480mg/L。表5MgS04.7H20對(duì)巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>4)NKjNCMt巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的影響調(diào)整基礎(chǔ)配方中NH4N03的濃度,其余組分及其濃度保持不變。結(jié)果見表6,當(dāng)NH4N03的濃度高于基礎(chǔ)配方時(shí),芽苗高度基本一致,但隨著濃度的增加,葉形呈現(xiàn)出逐漸增大的趨勢,且配方M14有愈傷和玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生;當(dāng)NH4N03的濃度低于基礎(chǔ)配方時(shí),隨著濃度的降低,芽苗高度呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢;在這五個(gè)配方中,芽苗生長均健壯,葉色均正常。綜合考慮,適合巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的NH4N03的較佳濃度為273~411mg/L,最佳濃度為319~411mg/L。表6NH4N03對(duì)巨桉無性系WLEG-17組培繼代苗的影響配方苗高健壯程度葉形葉色愈傷玻璃化Ml1.5cm健壯正常綠色無無M141.5cm健壯葉片大綠色有有M151.4cm健壯正常綠色無無M161.4cm健壯正常綠色無無M171.1cm健壯正常綠色無無最后說明的是,以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制,盡管通過參照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述,但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變,而不偏離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神和范圍。權(quán)利要求1、巨桉無性系WLEG-17組培培養(yǎng)基,其特征在于由具有以下濃度的組分組成硝酸鉀KNO31900~2375mg/L硝酸銨NH4NO3273~411mg/L磷酸二氫鉀KH2PO4270~338mg/L硫酸鎂MgSO4·7H2O480~540mg/L硝酸鈣Ca(NO3)2·4H2O300mg/L碘化鉀KI0.83mg/L硼酸H3BO36.2mg/L硫酸錳MnSO4·4H2O22.3mg/L硫酸鋅ZnSO4·7H2O8.6mg/L鉬酸鈉Na2MoO4·2H2O0.25mg/L硫酸銅CuSO4·5H2O0.025mg/L氯化鈷CoCl2.6H2O0.025mg/L乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA·2H2O37.3mg/L硫酸亞鐵FeSO4·7H2O27.8mg/L肌醇100mg/L甘氨酸2mg/L鹽酸硫胺素VB10.1mg/L鹽酸吡哆醇VB60.5mg/L煙酸VB5或VPP0.5mg/L核黃素VB26mg/L6-芐氨基嘌呤6-BA0.5mg/L萘乙酸NAA0.2mg/L蔗糖30000mg/L瓊脂4700mg/L2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的巨桉無性系WLEG-17組培培養(yǎng)基,其特征在于所述KN03的濃度為2138mg/L,NH4N03的濃度為319411mg/L,KH2P04的濃度為304mg/L,MgS04'7H20的濃度為480mg/L。全文摘要本發(fā)明公開了巨桉無性系WLEG-17組培培養(yǎng)基,由具有以下濃度的組分組成KNO<sub>3</sub>1900~2375mg/L,NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub>273~411mg/L,KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>270~338mg/L,MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O480~540mg/L,Ca(NO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>·4H<sub>2</sub>O300mg/L,VB<sub>2</sub>6mg/L,6-BA0.5mg/L,NAA0.2mg/L,瓊脂4700mg/L,微量元素、鐵鹽與有機(jī)物的種類和濃度以及蔗糖濃度與MS培養(yǎng)基相同;本發(fā)明培養(yǎng)基在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,通過調(diào)整大量元素的種類和濃度,添加有機(jī)附加成分VB<sub>2</sub>,優(yōu)化激素調(diào)控和瓊脂濃度等,為巨桉無性系WLEG-17組培苗提供了均衡合理的營養(yǎng)需求,保證了其快速、高效、健壯生長,有效的控制了愈傷和玻璃化現(xiàn)象的產(chǎn)生。文檔編號(hào)A01H4/00GK101658137SQ20091010475公開日2010年3月3日申請(qǐng)日期2009年8月31日優(yōu)先權(quán)日2009年8月31日發(fā)明者劉奕清,呂玉奎,廖林正,陳澤雄,黃登艷申請(qǐng)人:重慶文理學(xué)院