專利名稱：蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)基，尤其涉及一種蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
蝴蝶蘭是世界上栽培范圍最廣泛的洋蘭品種之一，有"洋蘭皇后"的美稱，蝴蝶蘭花型大，花期長，色彩艷麗，變化無窮，是最為普及的觀賞性洋蘭品種。 蝴蝶蘭單株性比較強，在栽培過程中很少會產(chǎn)生分株。目前用組織培養(yǎng)無性繁殖是當今蝴蝶蘭工廠化生產(chǎn)常用的方法之一，即所謂克隆繁殖，具有繁殖快、數(shù)量大和小苗品種純的優(yōu)點?？梢哉f，當今花卉市場上出售的蝴蝶蘭基本都是用組織培養(yǎng)繁殖的組培苗培育的。利用蝴蝶蘭花梗側(cè)芽、葉片、莖尖等外植體，經(jīng)消毒處理后接種到培養(yǎng)基上，可誘導出營養(yǎng)芽或原球莖。再進一步于培養(yǎng)基中進行大量增殖、分化培養(yǎng)，這樣就可培養(yǎng)出大量的植株。通過克隆繁殖的蝴蝶蘭苗生長、開花比較整齊一致，可完全保存母株的花色性狀。
—般蝴蝶蘭工廠均采用常規(guī)MS培養(yǎng)基，其特點是無機鹽含量較高，特別是硝酸鹽和銨鹽含量大，可滿足植物組織生長發(fā)育對營養(yǎng)元素的需要。此外還要添加瓊脂作為凝固劑，防止組織沉沒缺氧死亡，同時操作簡便，不像液體培養(yǎng)基需要振蕩培養(yǎng)。固體培養(yǎng)基中瓊脂的使用量一般在6 10g/L，過高則培養(yǎng)基太硬，不利于營養(yǎng)物質(zhì)的擴散、吸收；過低則凝固效果不好，不能支持培養(yǎng)物。但是用量適當?shù)沫傊灿幸欢ㄈ秉c，最顯著的就是培養(yǎng)物與培養(yǎng)基的接觸面小，營養(yǎng)物質(zhì)擴散速度慢，影響了養(yǎng)分的吸收利用；而且培養(yǎng)物排出的代謝產(chǎn)物容易富集再接觸面，擴散慢，對培養(yǎng)物產(chǎn)生了一定的毒害作用。本發(fā)明使用高保水性高吸水性樹脂SAR部分代替瓊脂，再配以適量的納米Ag20顆粒，可以減少固體培養(yǎng)基的上述消極作用。這些內(nèi)容尚未見諸于報道。
蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基，包括MS培養(yǎng)基

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基。
1)采用高吸水性樹脂SAR部分代替瓊脂，既能培養(yǎng)基達到合適的凝固性，對培
養(yǎng)物有適宜的支持作用，又能使得營養(yǎng)物質(zhì)在吸水性樹脂中容易擴散，提高養(yǎng)分的吸收效率； 2)培養(yǎng)物在培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的代謝物容易透過高吸水性樹脂滲透、擴散，降低培養(yǎng)物接觸面的毒素濃度，利于成活； 3)添加納米Ag20顆粒，幫助分解培養(yǎng)物的代謝產(chǎn)物，并有效抑制外植體內(nèi)生菌類造成的污染。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作更詳細的描述，本發(fā)明的范圍不受這些實施例的限制，所有在不偏離本發(fā)明核心內(nèi)容的基礎(chǔ)上所做的修改和改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。本發(fā)明的范圍在權(quán)利要求書中詳細提出。
實施例1 蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分如下
NH4N03 :1650mg/L KN03 :1900mg/LCaCl2 H20 :440mg/L MgS04 7H20 :370mg/L
KH2P04 :170mg/L KI :0.83mg/LH3B03 :6. 2mg/L MnS04 4H20 :22. 3mg/LZnS04 7H20 :8. 6mg/L Na2Mo04 5H20 :0. 25mg/L
CuS04 5H20 :0. 025mg/L CoCl2 6H20 :0. 025mg/L
FeS04 H20 :27. 8mg/L Na2EDTA 2H20 :37. 3mg/L
肌醇100. Omg/L 煙酸0. 5mg/L 鹽酸吡哆醇0. 5mg/L鹽酸硫胺素0. lmg/L
甘氨酸2. Omg/L 在上述MS培養(yǎng)基基礎(chǔ)上還添加了 淀粉接枝丙烯腈高吸水性樹脂0. 5g/L和納米Ag20 :lmg/L。
輔助劑如下蔗糖3% ;瓊脂:6. 5g/L ;香蕉汁:150g/L ;6-芐基嘌呤:3mg/L ;活性炭0. 5g/L。
實施例2 蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分如下
NH4N03 :1650mg/L 認03 :1900mg/L
4
CaCl2·心0440mg／LMgS04·7H20370mg／L
KH。PO。1 70mg／LKI0．83mg／L
H313036．2mg／LMnS04·4H2022．3mg／L
ZnS04·7H208．6mg／LNa2M004·5H200．25mg／L
CuS04·5H200．025mg／L CoCl2·6H200．025mg／L
FeS04·心027．8mg／LNa2EDTA·2H2037．3mg／L
肌醇100．Omg／L煙酸0．5mg／L
鹽酸吡哆醇0．5mg／L鹽酸硫胺素0．1mg／L
甘氨酸2．Omg／L
在上述Ms培養(yǎng)基基礎(chǔ)上還添加了聚丙烯酸鈉1．Og／L和納米Ag，0lmg／L。
輔助劑如下蔗糖3％；瓊脂6．Og／L；香蕉汁150g／L；6一芐基嘌呤3mg／L；活性炭0．5g／L。
實施例3
蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分如下
NH4N031650mg／LKN031900mg／L
CaCl2·心0440mg／LMgS04·7H20370mg／L
K兒PO。170mg／LKI0．83mg／L
H313036．2mg／LMnS04·4H2022．3mg／L
ZnS04·7H208．6mg／LNa2M004·5H200．25mg／L
CuS04·5H200．025mg／L CoCl2·6H200．025mg／L
FeS04·心027．8mg／L Na2EDTA·2H2037．3mg／L
肌醇100．Omg／L煙酸0．5mg／L
鹽酸吡哆醇0．5mg／L鹽酸硫胺素0．1mg／L
甘氨酸2．Omg／L
在上述Ms培養(yǎng)基基礎(chǔ)上還添加了聚丙烯酰胺0．8g／L和納米Ag，0lmg／L。
輔助劑如下蔗糖3％；瓊脂6．2g／L；香蕉汁150g／L；6一芐基嘌呤3mg／L；活性炭0．5g／L。
實施例4
蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分如下
NH4N031650mg／LKN031900mg／L
CaCl2·心0440mg／LMgS04·7H20370mg／L
KH。PO。1 70mg／LKI0．83mg／L
H313036．2mg／LMnS04·4H2022．3mg／L
ZnS04·7H208．6mg／LNa2M004·5H200．25mg／L
CuS04·5H200．025mg／LCoCl2·6H200．025mg／L
FeS04·心027．8mg／LNa2EDTA·2H2037．3mg／L
肌醇100．Omg／L煙酸0．5mg／L
鹽酸吡哆醇0．5mg／L鹽酸硫胺素0．1mg／L
甘氨酸2．Omg／L
1 :將花梗剪下，選取基部4 5節(jié)，每節(jié)帶芽切成約5厘米小段，除去節(jié)間苞片，以 0. 5%次氯酸鈉溶液消毒15分鐘，撈起再用滅菌水充分清洗，放在培養(yǎng)皿中，以解剖刀將二 端各切去0. 5厘米后，立即將其芽體朝上插入培養(yǎng)基中，培養(yǎng)出一定數(shù)量的母瓶，建立快繁 體系。光照:500Lux，溫度:25度。 2 :將母瓶按照45天為一個周期進行不斷的轉(zhuǎn)接工作，每次轉(zhuǎn)接都會有平均2倍的 增殖，這樣循環(huán)就起到了繁殖的作用。光照2000Lux，溫度25度。 3:將母瓶內(nèi)的苗分成單株，將其接種到另一個培養(yǎng)瓶內(nèi)，平鋪于配制好的培養(yǎng)基 上，封口消毒即可。使其長高長大。光照2000Lux，溫度25度。
4 :將經(jīng)過壯苗后的單株苗接種到生根培養(yǎng)基中，使其進一步長高長大，同時長出 發(fā)達的根系，最終培養(yǎng)成為一棵有根有葉的完整植株。光照2000Lux，溫度25度。
選擇成活率、染菌率作為考察培養(yǎng)基指標。從表1的結(jié)果可以看出，實施例1 5 中采用高吸水性樹脂和Ag20的培養(yǎng)基種苗的成活率普遍比普通培養(yǎng)基高1 3個百分點， 并且染菌率也有很明顯的下降，其中Ag20的用量以1 5mg/L為宜，當其用量太大達到為 10mg/L(對比例2)會對成活率有負面影響。
表l
條件成活率％染菌率％
SARAg20
實施例1淀粉接枝丙烯腈0.5 g/L1982.5
實施例2聚丙烯酸鈉1.0 g/L1972.3
實施例3聚丙烯酰胺:0.8g/L1972.4
實施例4聚丙烯酰胺0.8g/L962.1
實施例5聚乙烯醇0.5g/L1982.3
對比例1- 953.0
對比例2聚丙烯酰胺0.8g/L10892.0
權(quán)利要求
一種蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基，包括MS培養(yǎng)基NH4NO31650mg/LKNO31900mg/LCaCl2·H2O440mg/L MgSO4·7H2O370mg/LKH2PO4170mg/L KI0.83mg/LH3BO36.2mg/L MnSO4·4H2O22.3mg/LZnSO4·7H2O8.6mg/LNa2MoO4·5H2O0.25mg/LCuSO4·5H2O0.025mg/L CoCl2·6H2O0.025mg/LFeSO4·H2O27.8mg/LNa2EDTA·2H2O37.3mg/L肌醇100.0mg/L 煙酸0.5mg/L鹽酸吡哆醇0.5mg/L 鹽酸硫胺素0.1mg/L甘氨酸2.0mg/L其特征在于還包括高吸水性樹脂0.1～1g/L和納米Ag2O1～5mg/L。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基，其特征在于還包括以下輔助劑蔗糖3% 瓊脂5 10g/L香蕉汁150g/L 6-芐基嘌呤3mg/L 活性炭0. 5g/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基，其特征在于所述的高吸水性樹脂包括接枝淀粉、聚丙烯酸鹽、聚丙烯酰胺或聚乙烯醇。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蝴蝶蘭無性繁殖組織培養(yǎng)培養(yǎng)基。以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加了0.1～1g/L的高吸水性樹脂和1～5mg/L的抗菌劑納米Ag2O，還添加了蔗糖、瓊脂、香蕉汁、細胞分裂素6-芐基嘌呤。本發(fā)明采用高吸水性樹脂部分代替瓊脂，既能培養(yǎng)基達到合適的凝固性，對培養(yǎng)物有適宜的支持作用，又能使得營養(yǎng)物質(zhì)在吸水性樹脂中容易擴散，提高養(yǎng)分的吸收效率；培養(yǎng)物在培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的代謝物容易透過高吸水性樹脂滲透、擴散，降低培養(yǎng)物接觸面的毒素濃度；添加的納米Ag2O顆粒，幫助分解培養(yǎng)物的代謝產(chǎn)物，并有效抑制外植體內(nèi)生菌類造成的污染。
文檔編號A01H4/00GK101697710SQ20091015410
公開日2010年4月28日 申請日期2009年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月9日
發(fā)明者倪惠珠, 王猛, 榮松 申請人:浙江傳化生物技術(shù)有限公司;杭州華納化工有限公司