專(zhuān)利名稱(chēng)：布丘氏菌屬物種植酸酶變體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本文提供的技術(shù)涉及改善的布丘氏菌屬物種(Buttiauxella sp.)植酸酶變體，編 碼植酸酶的核酸，含有核酸的載體、宿主細(xì)胞，以及生產(chǎn)植酸酶的方法。本發(fā)明涵蓋的植酸 酶可用于多種用途，包括例如，淀粉液化的方法、醇發(fā)酵的方法和增強(qiáng)食品和動(dòng)物飼料中的 磷酸鹽消化的方法。背景植酸鹽是磷在谷類(lèi)植物和豆科植物中的主要儲(chǔ)存形式。然而，單胃動(dòng)物(例如， 豬、家禽和魚(yú))不能代謝或吸收植酸鹽(或植酸)，從而排出并在強(qiáng)家畜生產(chǎn)的區(qū)域造成磷 污染。此外，在單胃動(dòng)物中，植酸通過(guò)螯合金屬物質(zhì)，例如鈣、銅和鋅，還發(fā)揮抗?fàn)I養(yǎng)劑的作用。為了提供足夠的磷酸鹽供這類(lèi)動(dòng)物的生長(zhǎng)和健康，向其飲食中加入無(wú)機(jī)磷酸鹽。 此類(lèi)添加可以是昂貴的且進(jìn)一步增加了污染問(wèn)題。通過(guò)植酸酶的作用，通常水解植酸鹽產(chǎn)生較小的肌醇_磷酸鹽和無(wú)機(jī)磷酸鹽。植 酸酶可用作動(dòng)物飼料的添加劑，它們改善了動(dòng)物對(duì)有機(jī)磷的利用度，并降低了環(huán)境的磷酸 鹽污染(ffodzinski R J, Ullah A H. Adv Appl Microbiol. 42，263-302 (1996))。文獻(xiàn)中已描述了多種真菌(WyssM.等人，Appl. Environ. Microbiol. 65 (2)， 367-373(1999) ；Berka R. M.等人，Appl. Environ. Microbiol. 64 (11)，4423-4427 (1998)； Lassen S.等人，Appl. Environ. Microbiol. 67 (10)，4701-4707 (2001))和細(xì)菌(Greiner R.等 A, Arch. Biochem. Biophys. 303 (1) , 107-113 (1993) ；Kerovuo ^ K, Appl. Environ. Microbiol. 64 (6), 2079-2085 (1998) ；Kim H. W.等人，Biotechnol. Lett. 25， 1231-1234(2003) ；Greiner R.等人，Arch. Biochem. Biophys. 341 (2)，201-206 (1997)； Yoon S. J.等人，Enzyme and microbial technol. 18，449-454 (1996) ；Zinin N. V.等人， FEMSMicrobiol. Lett. 236，283-290 (2004))來(lái)源的植酸酶。發(fā)明概述在第一個(gè)方面，本公開(kāi)文本的實(shí)施方案提供了這樣的植酸酶變體，所述變體具有 不同于野生型布丘氏菌屬物種植酸酶(SEQ ID NO 1)的氨基酸序列，并具有一個(gè)或多個(gè)有 利的性質(zhì)。此類(lèi)性質(zhì)包括但不限于有利的熱穩(wěn)定性、溫度/活性譜；PH/活性譜；比活；和 PH/蛋白酶-敏感度。在其他方面，本公開(kāi)文本的實(shí)施方案涉及這樣的植酸酶變體，所述變體包括在選 自75、76和374的一個(gè)或多個(gè)位置上含有取代的植酸酶，其中，各位置對(duì)應(yīng)野生型布丘氏菌 屬物種植酸酶(SEQ ID NO 1)的氨基酸序列的位置。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)文本的實(shí)施方案提供編碼如本文所公開(kāi)的植酸酶變體的核酸，以及包括此類(lèi)核酸的載體和宿主細(xì)胞。在其他實(shí)施方案中，序列用于生產(chǎn)植酸酶變體的 方法。此外，本公開(kāi)文本的實(shí)施方案通常涉及植酸酶變體的用途，用于從任何植酸酶底 物中釋放磷，特別是從植酸鹽或植酸中釋放無(wú)機(jī)磷酸鹽。有利的，本公開(kāi)文本的植酸酶變體 可用于工業(yè)用途，包括例如淀粉液化的方法，和增加食品和動(dòng)物飼料中的磷酸鹽消化的方 法。有利的，根據(jù)本公開(kāi)文本的實(shí)施方案的植酸酶變體是有效的，用于醇發(fā)酵工藝和/或生產(chǎn)。在其他方面，本公開(kāi)文本涉及包含如本文所述的植酸酶變體的酶組合物，其中酶 組合物用于商業(yè)應(yīng)用，或在商業(yè)應(yīng)用中使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，酶組合物可以是動(dòng)物飼料 組合物。在其它實(shí)施方案中，酶組合物可用于淀粉水解(如液化)工藝。在有利的實(shí)施方 案中，變體和/或酶組合物可用于醇發(fā)酵工藝。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，包含本公開(kāi)文本中 所包括的植酸酶的酶組合物將包含其它的酶，例如葡糖淀粉酶、α-淀粉酶、蛋白酶、纖維素 酶、半纖維素酶、脂肪酶、果膠酶、支鏈淀粉酶、葡萄糖氧化酶、β葡糖苷酶、漆酶、氧化酶、角 質(zhì)酶、磷酸酶、其它植酸酶及其組合。在其他方面，本公開(kāi)文本的實(shí)施方案涉及在宿主細(xì)胞中生產(chǎn)植酸酶變體方法，通 過(guò)用DNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞以允許所述所述植 酸酶的表達(dá)和生產(chǎn)植酸酶，其中所述構(gòu)建體有利的包括在宿主細(xì)胞中具有轉(zhuǎn)錄活性的啟動(dòng) 子。方法還可以包括回收產(chǎn)生的植酸酶。在一個(gè)實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞是細(xì)菌，或植物細(xì) 胞，或真菌細(xì)胞(例如，木霉屬(Trichoderma)細(xì)胞，如里氏木霉(T.reesei))或酵母。在 本文描述的實(shí)施方案中，植酸酶變體的氨基酸序列與SEQ ID NO :1享有的最小百分比序列 同一性,例如，與SEQ ID NO :1至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少 97%、至少98%的氨基酸序列同一性。在本公開(kāi)文本的有利的實(shí)施方案中，植酸酶具有SEQ ID NO 2的序列。本發(fā)明的酶是權(quán)利要求和本文中定義的酶。本發(fā)明的酶還涵蓋了在表達(dá)過(guò)程中共 翻譯或翻譯后加工的活性多肽，例如通過(guò)信號(hào)肽切割。翻譯后切割還可以發(fā)生在C端。因 此，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，其有效的片段(也稱(chēng)為其功能片段)是通過(guò)天然的宿主或合適的 適當(dāng)表達(dá)宿主生產(chǎn)的成熟多肽。因此，在一個(gè)方面，植酸酶的特征是它包括這樣的氨基酸序列，所述序列是由全部 或部分編碼本文定義變體的核苷酸序列表達(dá)的或可由全部或部分編碼本文定義變體的核 苷酸序列表達(dá)的。通常，在一個(gè)方面，提供了植酸酶變體，與野生型布丘氏菌屬物種(Buttiauxella sp.)植酸酶(SEQ ID NO 1)相比，所述變體具有至少約5°C的改善的熱活性。在一個(gè)實(shí)施 方案中，與植酸酶SEQ ID NO :1相比，植酸酶的改善的熱活性是至少約17°C。在另一個(gè)實(shí) 施方案中，改善的熱活性的范圍是從約17°C至約21°C。在另一個(gè)實(shí)施方案中，改善的熱活 性的范圍是從約17. 4°C至約20. 2°C。通常，在其他方面，提供了熱穩(wěn)定的植酸酶變體，其在緩沖液中在pH5. 5時(shí)暴露在 升高的溫度下10分鐘后，能夠保留大于50%的活性，其中，升高的溫度比野生型布丘氏菌 屬物種植酸酶(SEQ ID NO 1)保留大于50%的活性時(shí)的溫度高至少約5°C。在一個(gè)方面， 升高的溫度是至少約20. 5°C或更高。在另一個(gè)方面，升高的溫度的范圍是從約20. 5°C至約27°C。在其他方面，升高的溫度的范圍是從約20. 2°C至約26. 8°C。通常，在另一個(gè)方面，提供的植酸酶變體具有植酸酶活性以及不同于野生型布丘 氏菌屬物種植酸酶氨基酸序列(SEQ ID NO 1)的氨基酸序列，其中植酸酶變體的氨基酸序 列包括在對(duì)應(yīng)SEQ ID N0:1的75、76、77、198、367或374位的一個(gè)或多個(gè)位置上的變異。 在一個(gè)實(shí)施方案中，植酸酶變體還包括一個(gè)或多個(gè)其它的變異，其中變異是92A、164E/S、 171I/V、192A或256A/E/P。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在75、76、77、198、367或374位上一處或 多處的變異分別是75P、76R、77S、198R、367L或374P，且植酸酶變體還包括一個(gè)或多個(gè)其它 的變異，其中變異是92A、164E/S、171V、192A或256A/E/P。在另一個(gè)實(shí)施方案中，植酸酶變 體還包括一個(gè)或多個(gè)其它的變異，其中一個(gè)或多個(gè)其它變異的位置是26、37、89、134、160、 176、178、188、190、207、209、211、235、261、270、303 或 318。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在位置 26、37、89、134、160、176、178、188、190、207、209、211、235、261、270、303 或 318 上的一個(gè)或 多個(gè)其它變異分別是 26E、037Y、089T、134I/V、160R、176K、178P、188N、190E、207E/T、209S、 211C、235V、261E、270K、303F或318D。在另一個(gè)實(shí)施方案中，植酸酶變體還包括一個(gè)或多個(gè) 其它的變異，其中一個(gè)或多個(gè)其它變異的位置是1、10、11、38、66、71、81、92、109、111、119、 120、121、141、142、152、155、193、214、239、245、248、255、268、277、283、285、287、288、293、 296、314、337、345、350、364、371、372、396、399、406 或 413。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在位置 1、 10、11、38、66、71、81、92、109、111、119、120、121、141、142、152、155、193、214、239、245、248、 255、268、277、283、285、287、288、293、296、314、337、345、350、364、371、372、396、399、406 或 413 上的一個(gè)或多個(gè)其它變異分別是 1S、10I、11I、38S、66E、71K、81A、92E、109Q、111G、 119N、120L、121E、141R、142L、152M、155E、193Q、211C、214V、235V、239K、245D、248L、255A、 261E、268A/T、270K、277T、283D、285K、287D、288A、293G 或 296S。通常，在另一個(gè)方面，提供的植酸酶變體具有植酸酶活性以及不同于野生型布丘 氏菌屬物種植酸酶氨基酸序列(SEQ ID NO 1)的氨基酸序列，其中植酸酶變體的氨基酸序 列與SEQ ID NO 1相比包括至少一個(gè)變異，其中植酸酶序列變異包括a)N37Y, S75P, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K198R, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pb)N37Y, G77S, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K198R, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pc) N37Y, S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I，H160R, F164E, T171I，T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pd)N37Y, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256P, A261E, N270K, A374Pe)S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171I, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pf)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171I, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pg)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, F164S, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Ph)S75P, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E,A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pi)S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, P367L, A374Pj)N37Y, A89T, D92A, T134I, F164E, T171I, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pk)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374P1)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Pm) N37Y, S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I，F(xiàn)164E, T171V, T176K, A178P, K207E，A209S， A235V, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Pη)Ν37Υ, S75P, Α89Τ, D92A, Τ134Ι, H160R, F164E, T171V, Τ176Κ, Α178Ρ, Κ207Ε, A209S, A235V, S248L, Q256Y, Α261Ε, Ν270Κ, Α374Ρο)Ν37Υ, Α89Τ, D92A, Τ134Ι, H160R, F164S, Τ171Ι, Τ176Κ, Α178Ρ, S188P, G192A, Κ207Ε, A209S, A235V, S248L, Q256E, Α261Ε, Ν270Κ, Α374Ρp)A89T, D92A, Τ134Ι, H160R, F164E, T171V, Τ176Κ, Α178Ρ, G192A, Κ207Ε, A209SA235V, S248L, Q256Y, Α261Ε, Ν270Κ, Α374Ρq)Ν37Υ, S75P, Α89Τ, D92A, Τ134Ι, H160R, F164S, T171V, Τ176Κ, Α178Ρ, S188P, Κ207Ε, A209S, S248L, Q256H, Α261Ε, Ν270Κ, Α374Ρr)Ν37Υ, S75P, Α89Τ, D92A, Τ134Ι, F164S, T171V, Τ176Κ, Α178Ρ, S188P, G192A, Κ207Ε, A209S, S248L, Q256A, Α261Ε, Ν270Κ, Α374Ρs)S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374P ；或t)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164S, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374P.在一個(gè)實(shí)施方案中，植酸酶序列變異包括N37Y、S75P、Q76R、A89T、D92A、T134I、 H160R、F164E、T171I、T176K、A178P、S188P、G192A、K207E、A209S、A235V、S248L、Q256Y、 A261E、N270K、A374P。還提供了植酸酶，其與本文公開(kāi)的植酸酶具有至少最小的百分比序列同一性和/ 或百分比同源性，其中最小百分比同一性和/或同源性是至少50%、至少60%、至少75%、 至少80%、至少85%、至少90%、至少93%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或 至少99%。通常，在一個(gè)方面，提供了植酸酶變體，其具有植酸酶活性以及不同于野生型布丘 氏菌屬物種植酸酶氨基酸序列(SEQ ID NO 1)的氨基酸序列，其中植酸酶變體的氨基酸序 列與SEQ ID NO :1相比包括至少一個(gè)變異，其中變體具有在下列位置中至少任一處的變 異:70、193、197、221和407。在一個(gè)實(shí)施方案中，變體具有至少下列的變異:N70Y、H193R、 F197E、S221P 和 A407P。通常，在另一個(gè)方面，提供了編碼本文公開(kāi)的任何植酸酶的核酸。在另一個(gè)方面， 提供了包括編碼本文公開(kāi)的任何植酸酶的核酸的載體。在其他方面，提供了包括本文所述核酸和/或載體的宿主細(xì)胞。通常，在另一個(gè)方面，提供了在宿主細(xì)胞中生產(chǎn)植酸酶變體的方法，所述變體是根 據(jù)本文公開(kāi)的變體，包括a)用DNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，所述DNA構(gòu)建體包括編碼本文公開(kāi)的任何植酸酶 變體的核酸，和b)在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞是真菌細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞或植物細(xì)胞。在一個(gè)方面，提供了本文公開(kāi)的方法制備的植酸酶。通常，在一個(gè)方面，包括本文公開(kāi)的至少一種植酸酶的酶組合物還包括一種或多 種葡糖淀粉酶、α -淀粉酶、蛋白酶、支鏈淀粉酶、異淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖 酶、環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶(cyclodextrin glycotransferase)、脂肪酶、漆酶、氧化酶、酯酶、角 質(zhì)酶、另一種植酸酶或其任意的組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包括α-淀粉酶。通常，在另一個(gè)方面，提供了如本文所述的植酸酶，或如本文所述的酶組合物在淀 粉液化、糖化、發(fā)酵或同時(shí)糖化-發(fā)酵中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，淀粉液化、糖化、發(fā)酵 或同時(shí)糖化-發(fā)酵是用于生產(chǎn)發(fā)酵醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，醇是乙醇或丁醇。在另一個(gè) 實(shí)施方案中，對(duì)底物進(jìn)行淀粉液化、糖化、發(fā)酵或同時(shí)糖化-發(fā)酵。在一個(gè)實(shí)施方案中，底物 包括淀粉。在另一個(gè)實(shí)施方案中，底物包括谷物(grain)或谷類(lèi)(cereal)。在其他實(shí)施方 案中，谷物或谷類(lèi)是小麥、大麥、黑麥、燕麥、玉米、高粱、玉米蛋白粉(corn gluten meal)、 干酒糟及可溶物(Distillers Dried Grain Solubles, DDGS)、小麥麩、粗小麥粉、碎麥粉、 稻、燕麥殼、棕仁、柑桔渣或其組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，稻包括米糠或稻殼。通常，在另一個(gè)方面，提供了如本文所述的至少一種植酸酶作為食品或飼料添加 劑的用途。在另一個(gè)方面，至少一種如本文公開(kāi)的植酸酶作為含有干酒糟及可溶物(DDGS) 的食品或飼料添加劑的用途。通常，在其他方面，提供了生產(chǎn)食品或動(dòng)物飼料的方法，包括將至少一種如本文公 開(kāi)的植酸酶，或如本文公開(kāi)的酶組合物，與另一種食品或飼料成分混合，形成所述食品或動(dòng) 物飼料的步驟。通常，提供了生產(chǎn)食品或動(dòng)物飼料的方法，包括將液體形式的至少一種如本文公 開(kāi)的植酸酶，或如本文公開(kāi)的酶組合物噴霧到所述食品或動(dòng)物飼料上的步驟。在一個(gè)方面， 生產(chǎn)食品或動(dòng)物飼料的方法包括將作為干產(chǎn)物的至少一種如本文公開(kāi)的植酸酶，或如本文 公開(kāi)的酶組合物與所述食品或動(dòng)物飼料混合的步驟。在另一個(gè)方面，提供了生產(chǎn)動(dòng)物飼料的方法，包括將至少一種如本文公開(kāi)的植酸 酶，或如本文公開(kāi)的酶組合物，與另一種食品或飼料成分混合，形成所述動(dòng)物飼料的步驟。 在其他方面，提供了生產(chǎn)動(dòng)物飼料的方法，包括將液體形式的至少一種如本文公開(kāi)的植酸 酶，或如本文公開(kāi)的酶組合物噴霧到所述動(dòng)物飼料上的步驟。在另一個(gè)方面，提供了生產(chǎn)動(dòng) 物飼料的方法，包括將作為干產(chǎn)物的至少一種如本文公開(kāi)的植酸酶，或如本文公開(kāi)的酶組 合物與所述動(dòng)物飼料混合的步驟。通常，在另一個(gè)方面，提供了食品或動(dòng)物飼料的組合物，包括i)至少一種如本文 公開(kāi)的植酸酶，或如本文公開(kāi)的酶組合物，和/或ii)通過(guò)如本文公開(kāi)的方法生產(chǎn)的食品或 動(dòng)物飼料。在其他方面，提供了動(dòng)物飼料組合物，包括i)至少一種如本文公開(kāi)的植酸酶，或如本文公開(kāi)的酶組合物，和/或ii)通過(guò)如本文公開(kāi)的方法生產(chǎn)的食品或動(dòng)物飼料。在一個(gè)方面，提供了至少一種如本文公開(kāi)的植酸酶，或如本文公開(kāi)的酶組合物在 食品或動(dòng)物飼料中的用途。在另一個(gè)方面，提供了至少一種如本文公開(kāi)的植酸酶，或如本文 公開(kāi)的酶組合物在動(dòng)物飼料中的用途。通常，在另一個(gè)方面，提供了降低動(dòng)物糞便中的磷水平的方法，特征是所述動(dòng)物是 用至少一種如本文公開(kāi)的植酸酶，或如本文公開(kāi)的酶組合物，或通過(guò)本文公開(kāi)的方法制備 的飼料，或如本文公開(kāi)的組合物喂養(yǎng)，其中所述植酸酶的量可有效地轉(zhuǎn)化所述動(dòng)物飼料中 含有的植酸鹽。通常，在一個(gè)方面，提供了至少一種如本文公開(kāi)的植酸酶，或如本文公開(kāi)的酶組合 物，或用通過(guò)本文公開(kāi)的方法制備的飼料，或如本文公開(kāi)的組合物的用途，用于生產(chǎn)動(dòng)物飼 料，降低用所述植酸酶多肽喂養(yǎng)的動(dòng)物糞便中的磷水平。附圖簡(jiǎn)述


圖1顯示了野生型布丘氏菌屬物種P1-29植酸酶(“BP-WT”)的氨基酸序列(SEQ ID NO :1)。圖2顯示了根據(jù)本公開(kāi)文本的一種有利變體的氨基酸序列(SEQ IDNO 2)。圖3顯示了野生型布丘氏菌屬物種P1-29的核酸序列(SEQ ID NO :3)。圖4顯示了圖2所示的根據(jù)本公開(kāi)文本的有利變體的核酸序列(SEQID NO 4)。圖5代表根據(jù)本發(fā)明的三種酶(BP 110、BP-Ill和BP-112)的氨基酸序列，以及 BP-17的序列和wt序列。圖6顯示了源自布丘氏菌屬的植酸酶、變體BP-17、BP 110、BP-111和BP-112、以 及Phyzyme XP、Natuphos和Ronozyme P對(duì)增加的胃蛋白酶濃度的抗性。數(shù)據(jù)相對(duì)于在不 含胃蛋白酶的條件下在PH 2孵育。A 所有的數(shù)據(jù)點(diǎn)；B:相同的數(shù)據(jù)但只顯示超過(guò)70%的
回收。
圖7顯示了實(shí)施例11中使用的飼料加工設(shè)備(飼料制粒(pelleting))的示意圖。
圖8顯示了I 據(jù)圖。
圖9顯示了I 據(jù)圖。
圖10顯示了ξ數(shù)據(jù)圖。
圖11顯示了 ξ數(shù)據(jù)圖。
圖12顯示了ξ數(shù)據(jù)圖。
圖13顯示了ξ數(shù)據(jù)圖。
圖14顯示了ξ數(shù)據(jù)圖。
圖15顯示了 HPLC數(shù)據(jù)圖。
圖16顯示了 HPLC數(shù)據(jù)圖。
發(fā)明的詳細(xì)描述
本文公開(kāi)了布丘氏菌屬物種植酸酶的變體，所述變體可用于工業(yè)應(yīng)用，包括淀粉
液化的方法、醇發(fā)酵和增加食品和動(dòng)物飼料中的磷酸鹽消化。特別地，根據(jù)本公開(kāi)文本的植 酸酶變體可非常有效的用于燃料乙醇生產(chǎn)工藝的淀粉液化步驟中的植酸鹽降解。本公開(kāi)文 本的變體包括在野生型布丘氏菌屬物種植酸酶(SEQ ID NO :1)的氨基酸序列上的一個(gè)或多 個(gè)變異(包括取代、插入和缺失)。在有利的實(shí)施方案中，變體的氨基酸序列包括與SEQ IDNO 1的氨基酸序列相比至少一個(gè)變異，所述至少一個(gè)變異是位于選自75、76和374位的1 個(gè)、2個(gè)或3個(gè)位置上，其中各個(gè)位置對(duì)應(yīng)于SEQID NO 1的氨基酸序列的位置。例如，在根據(jù)本公開(kāi)文本的實(shí)施方案的植酸酶變體中的變異有利地選自對(duì)應(yīng)于 SEQ ID NO 1 的 S75、Q76 和 A374。在本公開(kāi)文本的有利的實(shí)施方案中，植酸酶變體的變異是取代，所述取代可選自 S75P、Q76R和A374P，其中各個(gè)位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO :1的氨基酸序列的位置。在其他有利的實(shí)施方案中，根據(jù)本公開(kāi)文本的植酸酶變體包括其它的變異，位于 選自N37、G77、H160、F164、、T171、S188、G192、K198、A235、Q256 和 / 或 P367 的一個(gè)或多 個(gè)位置上，其中各個(gè)位置對(duì)應(yīng)于SEQ IDN0 1的氨基酸序列的位置。在其他有利的實(shí)施方案中，根據(jù)本公開(kāi)文本的植酸酶變體的變異是取代，所述取 代可位于選自N37Y、G77S、H160R、F164E、F164S、T171V、T171I、S188P、G192A、K198R、A235V、 Q256P、Q256A、Q256E和/或P367L的一個(gè)或多個(gè)位置上。在其他有利的實(shí)施方案中，根據(jù)本公開(kāi)文本的植酸酶變體包括其它的變異，位于 選自A89、D92、T134、F164、T176、A178、K207、A209、S248、Q256、A26E 和 / 或 N270 的一個(gè) 或多個(gè)位置上。此外，在其他有利的實(shí)施方案中，根據(jù)本公開(kāi)文本的植酸酶變體包括其它的變異， 位于選自A89T、D92A、T134I、F164S、T176K、A178P、K207E、A209S、S248L、Q256Y、A261E 和 /或N270K的一個(gè)或多個(gè)位置上。在其他有利的實(shí)施方案中，根據(jù)本公開(kāi)文本的植酸酶變體包括SEQ IDN0 2的序 列。根據(jù)本公開(kāi)文本的有利的植酸酶變體包括含有變異的序列，所述變異選自a)N37Y, S75P, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K198R, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pb)N37Y, G77S, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K198R, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pc) N37Y, S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I，H160R, F164E, T171I，T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pd)N37Y, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256P, A261E, N270K, A374Pe)S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171I, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pf)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171I, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pg)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, F164S, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Ph)S75P, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, S 188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pi)S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, P367L, A374P
j)N37Y, A89T, D92A, T134I, F164E, T171I, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pk)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374P1)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Pm) N37Y, S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I，F(xiàn)164E, T171V, T176K, A178P, K207E，A209S， A235V, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Pn)N37Y, S75P, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Po)N37Y, A89T, D92A, T134I, H160R, F164S, T171I, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256E, A261E, N270K, A374Pp)A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pq)N37Y, S75P, A89T, D92A, T134I, H160R, F164S, T171V, T176K, A178P, S188P, K207E, A209S, S248L, Q256H, A261E, N270K, A374Pr)N37Y, S75P, A89T, D92A, T134I, F164S, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Ps)S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Pt)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164S, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374P.本公開(kāi)文本的實(shí)施方案還包括序列a)至t)所述的任何植酸酶的變體，其具有植 酸酶活性以及這樣的氨基酸序列，所述氨基酸序列與序列a)至t)所述的各植酸酶變體相 比，具有至少50%、至少60%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少93%、至少 95%、至少96%、至少97%、至少98%和至少99%的百分比序列同一性和/或百分比同源性。本文中使用氨基酸的名稱(chēng)、三字母縮寫(xiě)或單字母縮寫(xiě)指代氨基酸。下表提供了標(biāo) 準(zhǔn)氨基酸及其縮寫(xiě)的列表。
丙氨酸AAla半胱氨酸CCys天冬氨酸DAsp谷氨酸EGlu苯丙氨酸FPhe
權(quán)利要求
1.與野生型布丘氏菌屬物種(Buttiauxellasp.)植酸酶(SEQ ID NO 1)相比，具有 至少約5°C的改善的熱活性的植酸酶變體。
2.權(quán)利要求1的植酸酶變體，其中與植酸酶SEQID NO :1相比，改善的熱活性是至少 約 17°C。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的植酸酶變體，其中改善的熱活性的范圍是從約17°C至約 21 °C。
4.權(quán)利要求1-3的任一項(xiàng)的植酸酶變體，其中改善的熱活性的范圍是從約17.4°C至約 20. 2V。
5.熱穩(wěn)定的植酸酶變體，其在pH5. 5在緩沖液中暴露在升高的溫度下10分鐘后，能 夠保留大于50%的活性，其中，升高的溫度是比野生型布丘氏菌屬物種植酸酶(SEQ ID NO 1)保留大于50%的活性的溫度高至少約5°C。
6.權(quán)利要求5的熱穩(wěn)定的植酸酶變體，其中升高的溫度是至少約20.5°C或更高。
7.權(quán)利要求5或權(quán)利要求6的熱穩(wěn)定的植酸酶變體，其中升高的溫度的范圍是從約 20. 5°C至約 27"C。
8.權(quán)利要求5-7的任一項(xiàng)的熱穩(wěn)定的植酸酶變體，其中升高的溫度的范圍是從約 20. 2°C至約 26. 8"C。
9.植酸酶變體，其具有植酸酶活性以及不同于野生型布丘氏菌屬物種植酸酶氨基酸序 列(SEQ ID NO 1)的氨基酸序列，其中植酸酶變體的氨基酸序列包含在對(duì)應(yīng)SEQ ID NO 1 的75、76、77、198、367或374位的一個(gè)或多個(gè)位置上的變異。
10.權(quán)利要求9的植酸酶變體，其中植酸酶變體還包括一個(gè)或多個(gè)其它的變異，其中變 異是 92A、164E/S、171I/V、192A 或 256A/E/P。
11.權(quán)利要求9或權(quán)利要求10的植酸酶變體，其中在75、76、77、198、367或374位上一 處或多處的變異分別是75P、76R、77S、198R、367L或374P，且植酸酶變體還包括一個(gè)或多個(gè) 其它的變異，其中變異是92A、164E/S、171V、192A或256A/E/P。
12.權(quán)利要求9-11的任一項(xiàng)的植酸酶變體，其中植酸酶變體還包括一個(gè)或多個(gè)其它的 變異，其中一個(gè)或多個(gè)其它變異的位置是26、37、89、134、160、176、178、188、190、207、209、 211、235、261、270、303 或 318。
13.權(quán)利要求12的植酸酶變體，其中在位置26、37、89、134、160、176、178、188、190、 207、209、211、235、261、270、303或318上的一個(gè)或多個(gè)其它的變異分別是26E、037Y、089T、 134I/V、160R、176K、178P、188N、190E、207E/T、209S、211C、235V、261E、270K、303F 或 318D。
14.權(quán)利要求9-13的任一項(xiàng)的植酸酶變體，其中植酸酶變體還包括一個(gè)或多個(gè)其它 的變異，其中一個(gè)或多個(gè)其它變異的位置是1、10、11、38、66、71、81、92、109、111、119、120、 121、141、142、152、155、193、214、239、245、248、255、268、277、283、285、287、288、293、296、 314、337、345、350、364、371、372、396、399、406 或 413。
15.權(quán)利要求14的植酸酶變體，其中在位置1、10、11、38、66、71、81、92、109、111、119、 120、121、141、142、152、155、193、214、239、245、248、255、268、277、283、285、287、288、293、 296、314、337、345、350、364、371、372、396、399、406 或 413 上的一個(gè)或多個(gè)其它的變異分 別是 1S、10I、11I、38S、66E、71K、81A、92E、109Q、111G、119N、120L、121E、141R、142L、152M、 155E、193Q、211C、214V、235V、239K、245D、248L、255A、261E、268A/T、270K、277T、283D、285K、287D、288A、293G 或 296S。
16.植酸酶變體，其具有植酸酶活性以及不同于野生型布丘氏菌屬物種植酸酶氨基酸 序列(SEQ ID NO 1)的氨基酸序列，其中植酸酶變體的氨基酸序列與SEQ ID N0:1相比包 括至少一個(gè)變異，且其中植酸酶序列變異包括a)N37Y,S75P, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K198R, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pb)N37Y,G77S, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K198R, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pc)N37Y,S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171I, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pd)N37Y,A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256P, A261E, N270K, A374Pe)S75P,Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171I, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pf)N37Y,Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171I, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pg)N37Y,Q76R, A89T, D92A, T134I, F164S, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Ph)S75P, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pi)S75P,Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, P367L, A374Pj)N37Y, A89T, D92A, T134I, F164E, T171I, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pk)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374P1)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Pm)N37Y, S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I, F164E, T171V, T176K, A178P, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Pη)N37Y, S75P, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Po)N37Y, A89T, D92A, T134I, H160R, F164S, T171I, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256E, A261E, N270K, A374Pρ) A89T，D92A, T134I，H160R，F(xiàn)164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374Pq)N37Y, S75P, A89T, D92A, T134I, H160R, F164S, T171V, T176K, A178P, S188P, K207E, A209S, S248L, Q256H, A261E, N270K, A374Pr)N37Y, S75P, A89T, D92A, T134I, F164S, T171V, T176K, A178P, S188P, G192A, K207E,A209S, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374Ps)S75P, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164E, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, S248L, Q256A, A261E, N270K, A374P ；或t)N37Y, Q76R, A89T, D92A, T134I, H160R, F164S, T171V, T176K, A178P, G192A, K207E, A209S, A235V, S248L, Q256Y, A261E, N270K, A374P。
17.權(quán)利要求16的植酸酶變體，其中植酸酶序列變異包括N37Y，S75P，Q76R，A89T， D92A，T134I，H160R，F(xiàn)164E，T171I，T176K，A178P，S188P，G192A，K207E，A209S，A235V，S248L， Q256Y, A261E, N270K, A374P。
18.植酸酶，其與權(quán)利要求1-17的植酸酶具有至少最小的百分比序列同一性和/或百 分比同源性，其中最小百分比同一性和/或同源性是至少50%、至少60%、至少75%、至少 80%、至少85%、至少90%、至少93%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少 99%。
19.植酸酶變體，其具有植酸酶活性以及不同于野生型布丘氏菌屬物種植酸酶氨基酸 序列(SEQ ID NO 1)的氨基酸序列，其中植酸酶變體的氨基酸序列與SEQ ID N0:1相比包 括至少一個(gè)變異，其中變體具有在下列位置中至少任一處的變異70、193、197、221和407。
20.權(quán)利要求19的植酸酶，其中變體具有至少下列的變異N70Y、H193R、F197E、S221P 和 A407P。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的植酸酶變體，其中所述植酸酶包括權(quán)利要求5-8和/ 或權(quán)利要求9-15和/或權(quán)利要求16或17和/或權(quán)利要求18和/或權(quán)利要求19或20的 任何一個(gè)或多個(gè)特征。
22.根據(jù)權(quán)利要求5-8的任一項(xiàng)的植酸酶變體，其中所述植酸酶包括權(quán)利要求1-4和/ 或權(quán)利要求9-15和/或權(quán)利要求16或17和/或權(quán)利要求18和/或權(quán)利要求19或20的 任何一個(gè)或多個(gè)特征。
23.根據(jù)權(quán)利要求9-15的任一項(xiàng)的植酸酶變體，其中所述植酸酶包括權(quán)利要求1-4和 /或權(quán)利要求5-8和/或權(quán)利要求16或17和/或權(quán)利要求18和/或權(quán)利要求19或20的 任何一個(gè)或多個(gè)特征。
24.根據(jù)權(quán)利要求16-17的任一項(xiàng)的植酸酶變體，其中所述植酸酶包括權(quán)利要求1-4和 /或權(quán)利要求5-8和/或權(quán)利要求9-15和/或權(quán)利要求18和/或權(quán)利要求19或20的任 何一個(gè)或多個(gè)特征。
25.根據(jù)權(quán)利要求18的植酸酶變體，其中所述植酸酶包括權(quán)利要求1-4和/或權(quán)利要 求5-8和/或權(quán)利要求9-15和/或權(quán)利要求16-17和/或權(quán)利要求19或20的任何一個(gè) 或多個(gè)特征。
26.根據(jù)權(quán)利要求19-20的任一項(xiàng)的植酸酶變體，其中所述植酸酶包括權(quán)利要求1-4和 /或權(quán)利要求5-8和/或權(quán)利要求9-15和/或權(quán)利要求16或17和/或權(quán)利要求18的任 何一個(gè)或多個(gè)特征。
27.編碼權(quán)利要求1-26的任一項(xiàng)的植酸酶的核酸。
28.包括權(quán)利要求27的核酸的載體。
29.包括權(quán)利要求27的核酸或權(quán)利要求28的載體的宿主細(xì)胞。
30.在宿主細(xì)胞中產(chǎn)生權(quán)利要求1-26的任一項(xiàng)的植酸酶變體的方法，其包括a)用DNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，所述DNA構(gòu)建體包括編碼權(quán)利要求1_26的任一項(xiàng)的植 酸酶的核酸，和b)在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
31.權(quán)利要求19的方法，其中宿主細(xì)胞是真菌細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞或植物細(xì)胞。
32.根據(jù)權(quán)利要求30或權(quán)利要求31的方法制備的植酸酶。
33.酶組合物，其包括權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng)的至少一種植酸酶，另外 包括一種或多種葡糖淀粉酶、α -淀粉酶、蛋白酶、支鏈淀粉酶、異淀粉酶、纖維素酶、半纖維 素酶、木聚糖酶、環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶、脂肪酶、漆酶、氧化酶、酯酶、角質(zhì)酶、另一種植酸酶或 其任意的組合。
34.權(quán)利要求33的酶組合物，其中包括α-淀粉酶。
35.根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的植酸酶，或權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組 合物在淀粉液化、糖化、發(fā)酵或同時(shí)糖化-發(fā)酵中的用途。
36.權(quán)利要求35的用途，其中淀粉液化、糖化、發(fā)酵或同時(shí)糖化-發(fā)酵是用于生產(chǎn)發(fā)酵醇。
37.權(quán)利要求36的用途，其中醇是乙醇或丁醇。
38.權(quán)利要求35-37任一項(xiàng)的用途，其中對(duì)底物進(jìn)行淀粉液化、糖化、發(fā)酵或同時(shí)糖 化-發(fā)酵。
39.權(quán)利要求38的用途，其中底物包括淀粉。
40.權(quán)利要求38或權(quán)利要求39的用途，其中底物包括谷物或谷類(lèi)。
41.權(quán)利要求40的用途，其中谷物或谷類(lèi)是小麥、大麥、黑麥、燕麥、玉米、高粱、玉米蛋 白粉、干酒糟及可溶物(DDGS)、小麥麩、粗小麥粉、碎麥粉、稻、燕麥殼、棕仁、柑桔渣或其組合。
42.權(quán)利要求41的用途，其中稻包括米糠或稻殼。
43.根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng)的至少一種植酸酶作為食品或飼料添 加劑的用途。
44.根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng)的至少一種植酸酶作為含有干酒糟及 可溶物(DDGS)的食品或飼料添加劑的用途。
45.生產(chǎn)食品或動(dòng)物飼料的方法，包括將根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng)的 至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組合物，與另一種食品或飼料成分 混合，形成所述食品或動(dòng)物飼料的步驟。
46.生產(chǎn)食品或動(dòng)物飼料的方法，包括將液體形式的根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32 的任一項(xiàng)的至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組合物噴霧到所述食 品或動(dòng)物飼料上的步驟。
47.生產(chǎn)食品或動(dòng)物飼料的方法，包括將作為干產(chǎn)物的根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求 32的任一項(xiàng)的至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組合物與所述食品 或動(dòng)物飼料混合的步驟。
48.生產(chǎn)動(dòng)物飼料的方法，包括將根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng)的至少一 種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組合物，與另一種食品或飼料成分混合， 形成所述動(dòng)物飼料的步驟。
49.生產(chǎn)動(dòng)物飼料的方法，包括將液體形式的根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一 項(xiàng)的至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組合物噴霧到所述動(dòng)物飼料 上的步驟。
50.生產(chǎn)動(dòng)物飼料的方法，包括將作為干產(chǎn)物的根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任 一項(xiàng)的至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組合物與所述動(dòng)物飼料混 合的步驟。
51.食品或動(dòng)物飼料的組合物，其包括i)根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng) 的至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組合物，和/或ii)通過(guò)根據(jù)權(quán) 利要求45-50的任一項(xiàng)的方法生產(chǎn)的食品或動(dòng)物飼料。
52.動(dòng)物飼料組合物，其包括i)根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng)的至少一 種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組合物，和/或ii)通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求 45-50的任一項(xiàng)的方法生產(chǎn)的食品或動(dòng)物飼料。
53.根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng)的至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求 33或權(quán)利要求34的酶組合物在食品或動(dòng)物飼料中的用途。
54.根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng)的至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求 33或權(quán)利要求34的酶組合物在動(dòng)物飼料中的用途。
55.降低動(dòng)物糞便中的磷水平的方法，特征是用根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的 任一項(xiàng)的至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求33或權(quán)利要求34的酶組合物，或根據(jù)權(quán)利要求 45-50的任一項(xiàng)的方法制備的飼料，或根據(jù)權(quán)利要求51-52的任一項(xiàng)的組合物喂養(yǎng)動(dòng)物，其 中所述植酸酶的量有效地轉(zhuǎn)化所述動(dòng)物飼料中含有的植酸鹽。
56.根據(jù)權(quán)利要求1-26或權(quán)利要求32的任一項(xiàng)的至少一種植酸酶，或根據(jù)權(quán)利要求 33或權(quán)利要求34的酶組合物，或根據(jù)權(quán)利要求45-50的任一項(xiàng)的方法制備的飼料，或根據(jù) 權(quán)利要求51-52的任一項(xiàng)的組合物的用途，用于制備動(dòng)物飼料，以降低用所述植酸酶多肽 喂養(yǎng)的動(dòng)物糞便中的磷水平。
57.基本上如本文所述，并參考附圖和/或序列表的植酸酶變體。
全文摘要
本發(fā)明提供了可用于工業(yè)應(yīng)用的布丘氏菌屬物種植酸酶的變體，所述應(yīng)用包括淀粉液化的方法、醇發(fā)酵的方法和增強(qiáng)食品和動(dòng)物飼料中的磷酸鹽消化的方法。
文檔編號(hào)A23K1/165GK102007211SQ200980113544
公開(kāi)日2011年4月6日 申請(qǐng)日期2009年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月18日
發(fā)明者B·勒斯奈爾, J·舍蒂, 派蘭格爾 K·舒爾策, M·佩普森, 伊薩克森 M·福斯科, O·肯施, S·達(dá)爾斯伽德 申請(qǐng)人:丹尼斯科美國(guó)公司