專利名稱：一種膽汁排泄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型及建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種膽汁排泄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型及建立方法。
背景技術(shù)：
膽汁排泄是大多數(shù)藥物及其代謝物腎外排泄的最主要途徑之一。機(jī)體中許多重要的物質(zhì)如維生素A、D、E、性激素、甲狀腺激素經(jīng)膽汁排泄均較顯著。分子量300以上并有極性基團(tuán)的藥物和代謝物亦主要從肝分泌進(jìn)入膽汁排泄。膽汁排泄速率和程度受藥物的理化性質(zhì)(分子量、化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性等)和某些生物學(xué)因素(動(dòng)物種屬、年齡、性別、膽汁流量、藥物生物轉(zhuǎn)化過程等)的影響。同時(shí)由于藥物在體內(nèi)存在腸肝循環(huán)，通過膽汁排泄研究對闡明藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)過程均具有重要意義。藥物及其代謝物的腸肝循環(huán)在藥物的遲滯排泄中起著重要作用，使某些藥物的藥代動(dòng)力學(xué)曲線常出現(xiàn)雙吸收峰的特征。研究表明已烯雌酚、消炎痛、氯霉素、紅霉素、嗎啡等均可形成腸肝循環(huán)。目前，藥物膽汁排泄研究的動(dòng)物模型一般使用麻醉大鼠作膽管插管引流，手術(shù)完成后給藥，并以合適的時(shí)間間隔分段收集膽汁，進(jìn)行藥物測定。大鼠屬嚙齒目動(dòng)物，成年雄性大鼠體重可達(dá)300g 400g，雌性大鼠可達(dá)180g 270g。且大鼠無膽囊，它們的總膽管括約肌阻力很少，肝分泌的膽汁通過總膽管進(jìn)入十二指腸，受十二指腸端括約肌的控制。利用大鼠模型對多種生物技術(shù)藥物包括蛋白質(zhì)和多肽進(jìn)行藥物膽汁排泄的研究，如重組人生長激素、重組人胸腺素、重組人內(nèi)皮抑素等藥物。但根據(jù)SFDA和ICH-6有關(guān)生物技術(shù)藥物非臨床評價(jià)指導(dǎo)原則中規(guī)定，由于生物技術(shù)藥物大多僅作用于特定的受體產(chǎn)生藥效或毒性作用，很難與其它受體發(fā)生作用，所以選擇相關(guān)動(dòng)物(即在動(dòng)物體內(nèi)具有生物活性)用于藥代動(dòng)力學(xué)及非臨床安全性評價(jià)至關(guān)重要?；瘜W(xué)藥物以代謝過程的差異來判斷相關(guān)動(dòng)物，通常使用大鼠和犬進(jìn)行評價(jià)，但對生物技術(shù)藥物而言，除非其在大鼠或犬體內(nèi)具有生物活性， 否則是不合適的。特別是干擾素類藥物，對大鼠、倉鼠、豚鼠等多種動(dòng)物進(jìn)行了藥效學(xué)相關(guān)動(dòng)物篩選。結(jié)果表明，倉鼠、豚鼠為干擾素類藥物的藥效學(xué)相關(guān)動(dòng)物。倉鼠體型較小，取血困難及動(dòng)物來源受限較，難以滿足臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究的要求。豚鼠為嚙齒目動(dòng)物，體型適中，易于購買和飼養(yǎng)，是一種理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在醫(yī)藥學(xué)和生物學(xué)研究方面起著重要的作用。由于豚鼠有膽囊，因此其膽汁排泄模型的建立方法與大鼠較為不同。對于一些不以大鼠為藥效學(xué)相關(guān)動(dòng)物的藥物而言，豚鼠模型的建立填補(bǔ)了這類藥物膽汁排泄研究的空白，完善了臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究的試驗(yàn)技術(shù)和方法。本發(fā)明建立了豚鼠膽管插管的動(dòng)物模型， 并已應(yīng)用于聚乙二醇化重組集成干擾素變異體注射液和15Val-重組人集成干擾素α注射液的膽汁排泄研究。當(dāng)前，國內(nèi)外均未見利用豚鼠建立膽管插管的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型進(jìn)行藥物膽汁排泄研究的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種膽汁排泄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立方法。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案1.將豚鼠麻醉(20%烏拉坦，1.2g/kg，i.p.)后，仰位固定于固定板上，將劍突上下的腹部被毛用剃毛刀剃干凈。常規(guī)消毒后，以劍突為中心點(diǎn)在腹部正中線使用手術(shù)刀縱向切開皮膚(切口長度2.5 3. 0cm)。使用眼科鑷子提起腹肌，14cm直尖頭手術(shù)剪剪開腹肌，切口長度約2. 5cm左右；用酒精棉將手術(shù)切口周圍和手術(shù)者的手指消毒后，兩手手指夾住切口的兩側(cè)稍向前方推并壓迫腹部，暴露膽囊。輕輕將透明的膽囊拉出，剝離膽囊管周圍膜樣結(jié)締組織，并將膽囊管近膽總管一端用7#手術(shù)縫合線結(jié)扎后，回復(fù)原位。2.膽總管開口于十二指腸，使用止血鉗分離膽總管周圍膜樣結(jié)締組織。將其近十二指腸端用眼科彎尖頭手術(shù)剪作一斜向切口，插入外徑為1.5mm的聚乙烯導(dǎo)管，深度為 6-7mm, 7#手術(shù)縫合線結(jié)扎固定后，回復(fù)原位。3.檢查腹腔及結(jié)扎部，常規(guī)縫合肌層與皮層，消毒，并使用生理鹽水浸濕的醫(yī)用紗布覆蓋創(chuàng)面。將收集膽汁的導(dǎo)管口保留在外。手術(shù)完成后立即給藥，并于合適的時(shí)間間隔分段收集膽汁，測定藥物或代謝物的濃度。如在收集過程中動(dòng)物清醒，可補(bǔ)充適量麻醉劑。本發(fā)明利用豚鼠模型進(jìn)行膽汁排泄研究，對豚鼠膽囊進(jìn)行結(jié)扎，使膽汁從肝臟分泌后不經(jīng)膽囊貯存，直接進(jìn)入膽總管。繼而進(jìn)行膽總管插管，將膽汁引流至5ml離心管中以備后續(xù)分析。該模型手術(shù)過程簡便、快速、成功率高?？蓪δ懼兴幬飳?shí)時(shí)排泄量、排泄速率、累積排泄量及累積排泄速率進(jìn)行綜合分析。


圖1是豚鼠皮下注射PEG-IFN-SA 18. 6 μ g/kg后膽汁排泄曲線；圖2是豚鼠膽汁排泄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的示意圖；1 膽囊管結(jié)扎處2 膽總管插管處3 膽管插管4 收集的膽汁圖3是是豚鼠膽囊管結(jié)扎后的照片；1為膽囊管結(jié)扎處圖4是豚鼠膽總管插管后的照片；1為膽總管插管處圖5是豚鼠膽汁排泄試驗(yàn)動(dòng)物模型建立后，收集膽汁的照片。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:本實(shí)施例利用本發(fā)明建立的豚鼠膽汁排泄研究模型，適用于藥物臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究，建立該模型的具體方法如下1.健康豚鼠6只，雌雄各半，體重300 400g ；2.制備動(dòng)物模型(1)將豚鼠麻醉(20%烏拉坦，1.2g/kg，i.p.)后，仰位固定于固定板上，將劍突上下的腹部被毛用剃毛刀剃干凈。常規(guī)消毒后，以劍突為中心點(diǎn)在腹部正中線使用手術(shù)刀縱向切開皮膚(切口長度2.5 3. 0cm)。使用眼科鑷子提起腹肌，14cm直尖頭手術(shù)剪剪開腹肌，切口長度約2. 5cm左右；用酒精棉將手術(shù)切口周圍和手術(shù)者的手指消毒后，兩手手指夾住切口的兩側(cè)稍向前方推并壓迫腹部，暴露膽囊。輕輕將透明的膽囊拉出，剝離膽囊管周圍
權(quán)利要求
1.一種膽汁排泄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型及建立方法，其特征在于按以下步驟(1)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉、固定、腹部被毛剃除、常規(guī)消毒、腹部正中線縱向切開皮膚然后暴露膽囊。剝離膽囊管周圍膜樣結(jié)締組織，將膽囊管近膽總管一端結(jié)扎后回復(fù)原位；(2)膽總管開口于十二指腸，分離膽總管周圍膜樣結(jié)締組織。將其近十二指腸端作一斜向切口，插入導(dǎo)管，結(jié)扎固定后回復(fù)原位；(3)檢查腹腔及結(jié)扎部，常規(guī)縫合肌層與皮層，消毒，并使用生理鹽水浸濕的醫(yī)用紗布覆蓋創(chuàng)面。將收集膽汁的導(dǎo)管口保留在外。手術(shù)完成后立即給藥，合適的時(shí)間間隔分段收集膽汁，測定藥物或代謝物的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膽汁排泄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，其特征在于所述的動(dòng)物為豚鼠。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膽汁排泄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于對豚鼠膽囊進(jìn)行結(jié)扎，使膽汁從肝臟分泌后不經(jīng)膽囊貯存，直接進(jìn)入膽總管。繼而進(jìn)行膽總管插管， 將膽汁引流至5ml離心管中，以備后續(xù)分析。
4.權(quán)利要求1-3所述方法所建立的豚鼠膽汁排泄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種膽汁排泄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型及建立方法，屬于生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的特征是選取豚鼠作為動(dòng)物模型，對豚鼠膽囊進(jìn)行結(jié)扎，使膽汁從肝臟分泌后不經(jīng)膽囊貯存，直接進(jìn)入膽總管。繼而進(jìn)行膽總管插管，將膽汁引流至5ml離心管中，以備后續(xù)分析。該模型手術(shù)過程簡便、快速、成功率高，特別是針對干擾素類等生物技術(shù)藥物以豚鼠為具有藥理活性的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型而言，是一種理想的研究膽汁排泄的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
文檔編號(hào)A61D1/00GK102440848SQ20101029920
公開日2012年5月9日 申請日期2010年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月8日
發(fā)明者劉昌孝, 司端運(yùn), 宋紫輝, 張宗鵬, 張春云, 張駿, 王海榮, 申文晉, 蔡永明, 項(xiàng)宗尚 申請人:天津市新藥安全評價(jià)研究中心, 天津藥物研究院