專利名稱：一種卵黃稀釋液的配制新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動(dòng)物生殖生物技術(shù)領(lǐng)域，適用于牛凍精生產(chǎn)中稀釋液的配制，主要提 供一種卵黃稀釋液的配制新方法。
背景技術(shù)：
稀釋液是牛冷凍精液生產(chǎn)中的主要和必要試劑，而卵黃稀釋液因?qū)佑懈玫?保護(hù)作用，廣泛使用于牛性控冷凍精液的生產(chǎn)中。卵黃稀釋液中有很多顆粒雜質(zhì)成分影響 稀釋液的質(zhì)量和產(chǎn)品的檢測(cè)，目前主要通過離心加過濾手段除去這些雜質(zhì)顆粒。因卵黃中 含有大量的有機(jī)成分，用0. 22 μ m的無菌濾器過濾，不但耗時(shí)耗力，而且成本高昂，為此開 發(fā)了該技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種用于牛凍精生產(chǎn)的卵黃稀釋液配制新方法，該技術(shù)原理是利用鹽 離子濃度對(duì)卵黃中顆粒成分的聚集起重要作用，低鹽離子濃度有助于顆粒的聚集，從而可 以通過離心去除大部分顆粒，這樣就可以省去過濾的步驟，降低成本，節(jié)省人力物力。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種卵黃稀釋液的配制新方法，其特 征在于它包括下述步驟1、卵黃的制備選取新鮮雞蛋，將蛋殼用75%的酒精消毒，在無菌條件下去蛋殼、 蛋清，用已滅菌濾紙將卵黃膜表面的蛋清吸干，用無菌注射器抽取卵黃；2、4. 6 倍 Tris-A 及 6 倍 Tris-B 母液的配制表1 IOOml 4. 6XTris-A 母液配方
權(quán)利要求
1. 一種卵黃稀釋液的配制新方法，其特征在于它包括下述步驟 1)卵黃的制備選取新鮮雞蛋，將蛋殼用75%的酒精消毒，在無菌條件下去蛋殼、蛋 清；用已滅菌濾紙將卵黃膜表面的蛋清吸干，用無菌注射器抽取卵黃；(2) 4. 6倍Tris-A及6倍Tris-B母液的配制IOOml 4.6XTris-A母液配方藥品名稱重量(g)Tris base16. 25檸檬酸7. 92D-Fructose5. 82IOOml 6XTris-B母液配方藥品名稱重量(g)Tris base21. 45檸檬酸11. 99D-Fructose8. 83按照上述配方用雙蒸水配制4. 6倍Tris-A母液，6倍Tris-B母液，分別調(diào)PH值為(6. 80 士 0. 02，用0. 22 μ m無菌濾器過濾；(3)0. 5倍Tris-A溶液和0. 5倍Tris-B溶液的配制用無菌水將4. 6倍Tris-A母液與 6倍Tris-B母液分別稀釋為0. 5倍Tris-A溶液和0. 5倍Tris-B溶液，配制好的溶液在4°C 環(huán)境下保存，備用；(4)Tris-A, Tris-B稀釋液的配制①Tris-A稀釋液的配制將0.5倍Tris-A溶液和卵黃按7 2的體積比加到一無菌容器中，于4°C環(huán)境下用磁力 攪拌器以400-500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌2小時(shí)，再靜置20h，然后將上清液4°C、3850g離心60min， 取上清液，并按1 9.4的體積比加入4.6倍Tris-A母液，搖勻，加入抗生素慶大霉素終 濃度500 μ g/ml ；林可霉素終濃度300 μ g/ml ；奇霉素終濃度600 μ g/ml ；泰樂菌素終濃度 100 μ g/ml，調(diào)PH值為6. 80 士 0. 02，于4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫虎赥ris-B稀釋液的配制將0.5倍Tris-B溶液和卵黃按7 2. 3的體積比加到一無菌容器中，于4°C環(huán)境下 用磁力攪拌器以400-500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌2小時(shí)，再靜置20h，然后將上清液(4°C、3850g離 心60min，取上清液，并按7 93的體積比加入6倍Tris-B母液，再加入無菌甘油，甘 油最終比例為12% (ν/ν)，搖勻，加入抗生素慶大霉素終濃度26. 6 μ g/ml ；林可霉素終 濃度15. 9μ g/ml ；奇霉素終濃度31. 9μ g/ml ；泰樂菌素終濃度5. 3 μ g/ml，調(diào)PH值為 6. 80 士 0. 02，于4°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?br> 全文摘要
一種卵黃稀釋液的配制新方法，屬于動(dòng)物生殖生物領(lǐng)域，它包括卵黃的制備；配制4.6倍Tris-A母液及6倍Tris-B母液，無菌過濾；用無菌水稀釋為0.5倍Tris-A和Tris-B溶液；分別和卵黃混合、攪拌、靜置、離心后收取上清液；用4.6倍Tris-A和6倍Tris-B母液分別調(diào)節(jié)上清液的濃度，使Tris-A和Tris-B達(dá)到1倍；分別加入抗生素及無菌甘油，調(diào)pH值，于4℃保存?zhèn)溆?。本發(fā)明省去過濾，方法簡(jiǎn)單，卵黃稀釋液顆粒少，保證冷凍精子的活率，提高凍精產(chǎn)品質(zhì)量，減少生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)A01N1/02GK101999342SQ201010299290
公開日2011年4月6日 申請(qǐng)日期2010年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月8日
發(fā)明者周文忠, 李喜和, 王麗霞, 胡樹香 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古蒙牛繁育生物技術(shù)股份有限公司