專利名稱：一種紫嬌花花蕾的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組培技術(shù)，具體涉及一種紫嬌花花蕾的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
紫嬌花(Tulkighia violacea Harv. (Liliaceae)，別名野蒜或非洲小百合，原產(chǎn) 南非，為石蒜科紫嬌花屬多年生常綠球根花卉。該植物成株叢生狀，株高45 60cm ；葉狹 長線形，光滑，深綠色，含韭味；細(xì)長而直立的花莖自葉叢中抽出，頂端著生數(shù)十朵淡紫色小 花，頗為美麗。傘形花序高于葉叢IOcm以上，小花淡紫色，長2cm，具香味；適宜庭院栽植、 盆栽或切花。紫嬌花在華東地區(qū)5月開花，花期延續(xù)到11月；近年來紫嬌花憑借其獨(dú)特的 觀賞價(jià)值以及較強(qiáng)的適應(yīng)性在園林綠化中應(yīng)用廣泛。但由于傳統(tǒng)的分株繁殖和播種繁殖方 式，使其增殖系數(shù)低，增殖周期長，故而市場缺口較大。組織培養(yǎng)技術(shù)是大量快速繁殖優(yōu)良種質(zhì)的最有效途徑，同時(shí)也是植物進(jìn)行遺傳 改良的重要基礎(chǔ)。而查閱國內(nèi)外文獻(xiàn)資料關(guān)于紫嬌花組織培養(yǎng)文獻(xiàn)有少量，僅僅Martin Fellner (1994)研究了 pH值和蔗糖對(duì)紫嬌花成熟花粉粒分離原生質(zhì)體的影響。何月秋 (2010)初步探討了紫嬌花組織培養(yǎng)和植株再生的技術(shù)路線，但對(duì)其快繁的研究則未見報(bào) 道。因此，探索紫嬌花的組培關(guān)鍵技術(shù)，實(shí)現(xiàn)其規(guī)?；敝?，不但可豐富園林綠化植物品種， 滿足市場需求，也對(duì)石蒜科其它植物的組培技術(shù)研究具有重要的借鑒意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種紫嬌花花蕾的組織培養(yǎng)方法，該方法具有 滅菌效果較好，死亡率較低，原球莖質(zhì)量較好，且原球莖還可增殖的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為一種紫嬌花花蕾的組織培養(yǎng)方 法，包括下述步驟
a、于晴天中午采下形成一周以內(nèi)的紫嬌花花蕾，先用洗潔精浸泡15分鐘，后用流水沖 洗4 5次，再用質(zhì)量百分濃度為0. 1%的HgCl2和吐溫80的混合溶液浸泡10分鐘，無菌 水沖洗5 6次，得到無菌花蕾；
b、將上述無菌花蕾接種于含有6-芐基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)和蔗糖的誘導(dǎo)培養(yǎng)基 上，誘導(dǎo)培養(yǎng)85 95天，愈傷組織形成，得到愈傷花蕾，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤 的濃度為3. 0 mg/L，所述萘乙酸濃度為0. 5 mg/L，所述蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；
c、將上述愈傷花蕾接種于含有6-芐基嘌呤、萘乙酸和蔗糖的第一分化培養(yǎng)基上，分 化培養(yǎng)至原球莖形成，得到帶芽的原球莖，第一分化培養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤的濃度為 3. Omg/L，所述萘乙酸濃度為0. 2 mg/L，所述蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；
d、上述步驟b的誘導(dǎo)培養(yǎng)和步驟c的分化培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度都為M ^TC,光照都為 2000 Lux，每日光照時(shí)間都為16 h。將至少3個(gè)帶芽的原球莖一起接種于含有6-芐基嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸(IBA)和 蔗糖的第二分化培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為M ^°C，光照為2000 Lux，每日光照時(shí)間為16
3h條件下定期培育30天，第二分化培養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤的濃度為3. Omg/L，所述萘乙 酸濃度為0. 1 mg/L，所述吲哚丁酸濃度為0. 05 mg/L，所述蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；該 第二分化培養(yǎng)基可以讓原球莖大量增殖，若NAA、IBA濃度均低于0. 05mg. Γ1原球莖就不增 殖，若NAA濃度高于0. 2mg. L—1時(shí)，原球莖雖可形成大量愈傷組織但不易分化形成不定芽；通 過30天定期培育，可以讓原球莖增殖一次，若需繼續(xù)增殖，可重復(fù)定期培育，這樣就解決了 紫嬌花在組織培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的增殖能力逐漸降低的問題，提高了紫嬌花原球莖的增殖系 數(shù)。上述誘導(dǎo)培養(yǎng)基和第一、第二分化培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)液為MS (Murashige and Skoog)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于一種紫嬌花花蕾的組織培養(yǎng)方法，花蕾依次 通過洗潔精、0. 1% HgCl2和吐溫80的混合溶液浸泡獲得無菌花蕾，滅菌效果較好，后續(xù)培養(yǎng) 污染較少，而花蕾死亡率較低，再用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)形成愈傷組織，得到愈傷花蕾；然 后用第一分化培養(yǎng)基培養(yǎng)至原球莖形成，得到帶芽的原球莖；愈傷和原球莖的分級(jí)培育，原 球莖質(zhì)量較好，且原球莖還可增殖。因此本發(fā)明具有滅菌效果較好，死亡率較低，原球莖質(zhì) 量較好，且原球莖還可增殖的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。 實(shí)施例一種紫嬌花花蕾的組織培養(yǎng)方法，在晴天的中午，用剪刀將紫嬌花形成一周以內(nèi) 的花蕾小心剪下帶回，用洗潔精浸泡15分鐘，再流水沖洗4 5次，分裝好后移至超凈工作 臺(tái)采用質(zhì)量百分濃度為0. 1%的HgCl2和吐溫80的混合溶液浸泡10分鐘，無菌水沖洗5 6次，得到無菌花蕾，這樣處理滅菌效果較佳，死亡率也較低；將無菌花蕾作為誘導(dǎo)愈傷組 織的外植體，接種于含有6-BA、NAA和蔗糖的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為M ^TC,光照 為2000 Lux，每日光照時(shí)間為16 h條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)85 95天，50%以上已形成愈傷組織， 得到愈傷花蕾，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，6-芐基嘌呤的濃度為3.0 mg/L，萘乙酸濃度為0.5 mg/ L，蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；將已形成愈傷組織的愈傷花蕾再接種于含有6-BA、NAA和 蔗糖的第一分化培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為M ^°C，光照為2000 Lux，每日光照時(shí)間為16 h條件下分化培養(yǎng)至原球莖形成，得到帶芽的原球莖，第一分化培養(yǎng)基中，6-芐基嘌呤的 濃度為3. Omg/L，萘乙酸濃度為0. 2 mg/L，蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；再可以將3個(gè)帶芽 的原球莖為一組接入含有6-BA、NAA、IBA和蔗糖的第二分化培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為M ^°C，光照為2000 Lux，每日光照時(shí)間為16 h條件下定期培育30天，可以讓原球莖增殖一 次，第二分化培養(yǎng)基中，6-芐基嘌呤的濃度為3. Omg/L，萘乙酸濃度為0.1 mg/L，吲哚丁酸 濃度為0. 05 mg/L，蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；至少3個(gè)為一組定期培育可明顯提高紫嬌 花原球莖的增殖系數(shù)，若低于3個(gè)生長就較慢。若需讓原球莖繼續(xù)增殖，可以用第二分化培 養(yǎng)基重復(fù)定期培育，一塊帶芽的原球莖一年內(nèi)可繁殖出20萬株苗可用于生根的組培苗。
權(quán)利要求
1.一種紫嬌花花蕾的組織培養(yǎng)方法，其特征在于包括下述步驟a、于晴天中午采下形成一周以內(nèi)的紫嬌花花蕾，先用洗潔精浸泡15分鐘，后用流水沖 洗4 5次，再用質(zhì)量百分濃度為0. 1%的HgCl2和吐溫80的混合溶液浸泡10分鐘，無菌 水沖洗5 6次，得到無菌花蕾；b、將上述無菌花蕾接種于含有6-芐基嘌呤、萘乙酸和蔗糖的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)培養(yǎng) 85 95天，愈傷組織形成，得到愈傷花蕾，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤的濃度為3. 0 mg/L，所述萘乙酸濃度為0. 5 mg/L，所述蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；c、將上述愈傷花蕾接種于含有6-芐基嘌呤、萘乙酸和蔗糖的第一分化培養(yǎng)基上，分 化培養(yǎng)至原球莖形成，得到帶芽的原球莖，第一分化培養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤的濃度為 3. Omg/L，所述萘乙酸濃度為0. 2 mg/L，所述蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；d、上述步驟b的誘導(dǎo)培養(yǎng)和步驟c的分化培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度都為M ^TC,光照都為 2000 Lux，每日光照時(shí)間都為16 h。
2.如權(quán)利要求1所述的一種紫嬌花花蕾的組織培養(yǎng)方法，其特征在于將步驟c的至少 3個(gè)帶芽的原球莖一起接種于含有6-芐基嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸和蔗糖的第二分化培養(yǎng) 基上，在培養(yǎng)溫度為M ^°C，光照為2000 Lux，每日光照時(shí)間為16 h條件下定期培育30 天，第二分化培養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤的濃度為3. Omg/L，所述萘乙酸濃度為0. 1 mg/L, 所述吲哚丁酸濃度為0. 05 mg/L，所述蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種紫嬌花花蕾的組織培養(yǎng)方法，花蕾依次通過洗潔精、0.1%HgCl2和吐溫80的混合溶液浸泡獲得無菌花蕾，滅菌效果較好，后續(xù)培養(yǎng)污染較少，而花蕾死亡率較低，再用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)形成愈傷組織，得到愈傷花蕾；然后用第一分化培養(yǎng)基培養(yǎng)至原球莖形成，得到帶芽的原球莖；愈傷和原球莖的分級(jí)培育，原球莖質(zhì)量較好，且原球莖還可增殖。因此本發(fā)明具有滅菌效果較好，死亡率較低，原球莖質(zhì)量較好，且原球莖還可增殖的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102144549SQ20111002121
公開日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2011年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月19日
發(fā)明者何月秋, 林樂靜, 王志龍, 祝志勇 申請(qǐng)人:寧波城市職業(yè)技術(shù)學(xué)院