專利名稱：一種杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及杉木無(wú)性繁殖技術(shù)，具體涉及一種杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
杉木(Cunninghamia lanceolata)是裸子植物杉科(Taxodiaceae)的常綠大喬木， 性喜溫暖濕潤(rùn)氣候，生長(zhǎng)迅速，樹(shù)干通直，高達(dá)30m，胸徑2. 5 3m。杉木材質(zhì)輕軟、細(xì)致、紋理直，易加工；供建筑、橋梁、造船、電焊、坑木、木椿等用，并可作造紙、紡織等原料；樹(shù)皮及根、葉入藥，能祛風(fēng)燥濕、收斂止血；種子含油約20%，供制肥皂。杉木是我國(guó)南方主要造林樹(shù)種和最重要的商品用材樹(shù)種，栽培歷史悠久，其造林面積和林分蓄積均居我國(guó)人工林的首位。近年來(lái)隨著經(jīng)營(yíng)水平的不斷提高，良種壯苗得到高度重視。南方杉木產(chǎn)區(qū)選育了大量杉木優(yōu)良無(wú)性系，并利用組織培養(yǎng)快繁技術(shù)對(duì)這些優(yōu)良無(wú)性系進(jìn)行了無(wú)性育苗造林，取得了顯著的增產(chǎn)效果。但由于不同杉木優(yōu)良無(wú)性系在生根性狀遺傳和生理基礎(chǔ)的差異性，導(dǎo)致不同杉木無(wú)性系在同一組培配方條件下成功率和有效率方面存在很大的差異，極大地影響了優(yōu)良杉木無(wú)性系組培苗培育以及推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，進(jìn)而解決杉木不同優(yōu)良無(wú)性系在組織培養(yǎng)條件下組培苗的生根困難問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)建立杉木穩(wěn)定高效的組培體系，為加快杉木組培苗產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供技術(shù)支撐。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下 一種杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，包括以下步驟
(1)選取杉木優(yōu)良無(wú)性系原株的樹(shù)干的基部萌條為組織培養(yǎng)材料，接入繼代增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化出不定芽，然后將不定芽轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基上進(jìn)行伸長(zhǎng)培養(yǎng); 繼代增殖培養(yǎng)基配方為3/4MS + 6BA0. 3mg · L—1 + NAAO. 02mg · L—1 +蔗糖3% ；
(2)步驟(1)的不定芽伸長(zhǎng)到2 3cm時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)，得生根試管苗； 誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基以1/2MS或1/4MS為基本培養(yǎng)基，在其中添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和2%蔗糖；植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為 IBA0. 05 0. 4mg · Γ1、NAAO. 05 0. 4mg · Γ1、ΙΑΑΟ. Γ . Omg · L、或 IBAO. 05 0· 4mg · Γ1 與 NAAO. 05 0· 4mg · Γ1 的混合；
(3)移栽生根試管苗，選用黃土、泥炭土3 1比例混合后用作移栽基質(zhì)。優(yōu)選步驟(2)中，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為1/2MS，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為 ΙΒΑΟ. Γ0. 4mg · L-1 或 NAAO. Γθ. 2mg · Γ1。優(yōu)選驟(2)中，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為1/4MS，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為ΙΒΑ0. Γθ. 2mg · L—1 或 NAAO. 05 0. 2mg · Γ1。優(yōu)選步驟(2)中，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為1/2MS，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為 ΙΒΑ0. 05 0. 2mg · Γ1 與 NAAO. 05 0. 4mg · Γ1 的混合。優(yōu)選步驟(2)中，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為1/4MS，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為ΙΒΑ0. 05 0. 2mg · Γ1 與 ΝΑΑ0. 05 0. 4mg · Γ1 的混合。優(yōu)選步驟(3)中，在移栽生根試管苗前一周，將生根試管苗放入自然光照下進(jìn)行煉苗，逐日松開(kāi)培養(yǎng)瓶封口膜直至最后撤去。優(yōu)選步驟(3)中，試管苗的根長(zhǎng)度不小于1cm。優(yōu)選步驟(3)中，試管苗的根長(zhǎng)度為1 3cm。在組培過(guò)程中，試管苗生根受培養(yǎng)基、激素以及培養(yǎng)條件等多種因素的影響。一般而言，試管苗生根均需要在低鹽培養(yǎng)基中進(jìn)行。這是由于鹽濃度變化導(dǎo)致培養(yǎng)基滲透壓變化，從而影響試管苗對(duì)營(yíng)養(yǎng)吸收和向培養(yǎng)基中釋放物質(zhì)。而且鹽濃度的變化也使植株體內(nèi)氮濃度下降到一個(gè)適合生根的有利水平。本申請(qǐng)中，洋062、洋061、洋021、洋023的試管苗在1/4MS的培養(yǎng)基上生根效果較好，其生根率最高可分別達(dá)到93. 3%,56. 7%,70%,90%, 但洋020的試管苗在1/2MS的基本培養(yǎng)基上生根較好，最高生根率為100%。試管苗移栽成活率高低是鑒定發(fā)根質(zhì)量和發(fā)根技術(shù)最有效的依據(jù)，本申請(qǐng)杉木試管苗的移栽成活率達(dá)70%以上，可說(shuō)明杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法所培養(yǎng)的杉木試管苗不定根為高質(zhì)根。有益效果與現(xiàn)有技術(shù)中的杉木組培方法相比，本發(fā)明的杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法優(yōu)勢(shì)在于有效解決了杉木不同優(yōu)良無(wú)性系在組織培養(yǎng)條件下組培苗的生根困難問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)建立杉木穩(wěn)定高效的組培體系，生根率最高可達(dá)到100% (洋020)，為加快杉木組培苗產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供技術(shù)支撐，能夠產(chǎn)生很好的社會(huì)效益，具有很好的經(jīng)濟(jì)前景。


圖1是洋062的生根圖； 圖2是洋020的生根圖3是洋061的生根圖； 圖4是洋021的生根圖； 圖5是洋023的生根圖； 圖6是試管苗移栽成活圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。以下實(shí)施例采用南京林業(yè)大學(xué)和福建合作選育的福建洋口林場(chǎng)杉木優(yōu)良無(wú)性系無(wú)菌苗，本申請(qǐng)將各樣品分別簡(jiǎn)稱為洋062、洋020、洋061、洋023和洋021。這些材料起源于南林一福建合作開(kāi)展的第二代遺傳改良計(jì)劃中選擇的優(yōu)良家系中的優(yōu)良個(gè)體，繁殖成無(wú)性系后進(jìn)行了 10多年的無(wú)性系測(cè)定，再選擇后作為優(yōu)良無(wú)性系加速繁殖。所有組織培養(yǎng)材料均起源于無(wú)性系原株的樹(shù)干的基部萌條。以下各實(shí)施例使用的培養(yǎng)條件(除特殊指明)為培養(yǎng)基中均附加瓊脂0.6%， pH5. 8，光照(20001x) 14h/d，培養(yǎng)溫度 25°C左右。實(shí)施例1芽的分化和伸長(zhǎng)
將各組織培養(yǎng)材料(洋062、洋020、洋061、洋023和洋021)分別放入繼代增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化出不定芽，繼代增殖培養(yǎng)基配方采用3/4MS + 6BA0. 3 mg · L—1 +
4NAAO. 02mg · Γ1 +蔗糖3%。將經(jīng)誘導(dǎo)分化的不定芽轉(zhuǎn)入無(wú)任何生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行伸長(zhǎng)培養(yǎng)。實(shí)施例2誘導(dǎo)生根
當(dāng)實(shí)施例1的各不定芽長(zhǎng)到2 3cm時(shí)，將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基培養(yǎng)其生根。在生根培養(yǎng)基中添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和蔗糖2%，觀察統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)指標(biāo)包括不定根的誘導(dǎo)頻率(％)=長(zhǎng)出不定根的不定芽數(shù)/接種不定芽數(shù)X 100% ；平均不定根數(shù)=不定根的總數(shù) /誘導(dǎo)出不定根的不定芽數(shù)；不定根的形成能力(RFC) =平均不定根數(shù)X不定根的誘導(dǎo)頻率。在洋062培養(yǎng)中，生根培養(yǎng)基及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的選取情況及其對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，從表中可見(jiàn)，以附加NAA的培養(yǎng)基生根最好，當(dāng)NAA濃度<0. 2mg -L"1時(shí)，生根率與NAA濃度成正相關(guān)；當(dāng)NAA濃度>0. 2mg-r1時(shí)，為負(fù)相關(guān)；而當(dāng)NAA濃度等于0. 2mg-r1 時(shí)，生根率最高為46.7%。附加IAA的培養(yǎng)基效果最差。在相同濃度的NAA水平下，1/4MS 培養(yǎng)基中生根率明顯高于1/2MS培養(yǎng)基；在相同濃度的IBA水平下，1/4MS培養(yǎng)基中生根率也明顯高于1/2MS培養(yǎng)基。其中以1/4MS附加NAAO. 2mg · Γ1培養(yǎng)基效果最好，生根率為 56. 7%，外植體長(zhǎng)勢(shì)良好。 表1洋062生根培養(yǎng)基及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的選取情況及其對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表
權(quán)利要求
1.一種杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟(1)選取杉木優(yōu)良無(wú)性系原株的樹(shù)干的基部萌條為組織培養(yǎng)材料，接入繼代增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化出不定芽，然后將不定芽轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基上進(jìn)行伸長(zhǎng)培養(yǎng); 其中，繼代增殖培養(yǎng)基配方為3/4MS + 6BA0. 3mg · L-1 + NAAO. 02mg · L-1 +蔗糖3% ；(2)步驟(1)的不定芽伸長(zhǎng)到2 3cm時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)，得生根試管苗； 誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基以1/2MS或1/4MS為基本培養(yǎng)基，在其中添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和2%蔗糖；植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為 ΙΒΑ0. 05 0. 4mg · Γ1、NAAO. 05 0. 4mg · Γ1、ΙΑΑΟ. Γ . Omg · L、或 IBAO. 05 0· 4mg · Γ1 與 NAAO. 05 0· 4mg · Γ1 的混合；(3)移栽生根試管苗，選用黃土、泥炭土3 1比例混合后用作移栽基質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，其特征在于步驟(2)中，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為1/2MS，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為ΙΒΑΟ. Γ0. 4mg · L-1或NAAO. Γθ. 2mg · L-1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，其特征在于步驟(2)中，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為1/4MS，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為ΙΒΑ0. Γ0. 2mg · L—1或NAAO. 05 0. 2mg · L—1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，其特征在于步驟(2)中，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為1/2MS，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為ΙΒΑ0. 05 0. 2mg · L-1與ΝΑΑ0. 05 0. 4mg · L-1的混合ο
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，其特征在于步驟(2)中，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為1/4MS，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為ΙΒΑ0. 05 0. 2mg · L-1與ΝΑΑ0. 05 0. 4mg · L-1的混合ο
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，其特征在于步驟(3)中，在移栽生根試管苗前一周，將生根試管苗放入自然光照下進(jìn)行煉苗，逐日松開(kāi)培養(yǎng)瓶封口膜直至最后撤去。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，其特征在于步驟(3)中，試管苗的根長(zhǎng)度不小于1cm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，其特征在于步驟(3) 中，試管苗的根長(zhǎng)度為1 3cm。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟選取杉木優(yōu)良無(wú)性系原株的樹(shù)干的基部萌條為組織培養(yǎng)材料，接入繼代增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化出不定芽，然后將不定芽轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基上進(jìn)行伸長(zhǎng)培養(yǎng)；不定芽長(zhǎng)到2～3cm時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)，得生根試管苗；移栽生根試管苗，選用黃土、泥炭土31比例混合后用作移栽基質(zhì)。與現(xiàn)有技術(shù)中的杉木組培方法相比，本發(fā)明的杉木無(wú)性系離體生根培養(yǎng)方法優(yōu)勢(shì)在于有效解決了杉木不同優(yōu)良無(wú)性系在組織培養(yǎng)條件下組培苗的生根困難問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)建立杉木穩(wěn)定高效的組培體系，生根率最高可達(dá)到100％(洋020)，為加快杉木組培苗產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供技術(shù)支撐。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102217539SQ201110129388
公開(kāi)日2011年10月19日 申請(qǐng)日期2011年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月19日
發(fā)明者施季森, 程強(qiáng), 鄭仁華, 陳金慧 申請(qǐng)人:南京林業(yè)大學(xué)