專利名稱：一種生物廣譜殺菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物發(fā)酵工藝，具體地說，涉及一種新型生物廣譜殺菌劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
長期以來，由于大量使用化學(xué)農(nóng)藥而造成的環(huán)境污染問題日趨嚴(yán)重?；瘜W(xué)農(nóng)藥因其不具有選擇性，對有益的生物也會造成威脅。而且，很多化學(xué)農(nóng)藥是不可降解或難于降解的，容易在動植物體內(nèi)積累而造成污染物的富集。隨著公眾對“綠色食品”、“無公害食品”的要求越來越高，市場對無污染、可自然降解的生態(tài)農(nóng)藥需求量也逐漸增多。從農(nóng)藥科學(xué)的發(fā)展來看，在農(nóng)藥研制使用上“回歸自然” 及農(nóng)藥的“無公害化”，是社會和自然科學(xué)發(fā)展的必然趨勢，因此新型生物廣譜殺菌劑有著廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新型生物廣譜殺菌劑及其制備方法。為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種生物廣譜殺菌劑，其是由如下重量百分?jǐn)?shù)的原料經(jīng)發(fā)酵制成大蒜1_3%、洋蔥3-9%、苦瓜發(fā)酵液5-15%，其余為水。優(yōu)選發(fā)酵條件為 35-42°C，42-72h。優(yōu)選地，大蒜、洋蔥和苦瓜發(fā)酵液的重量比為1 3 5。所述苦瓜發(fā)酵液是按照如下步驟制備得到的(1)原料預(yù)處理將苦瓜清洗除雜； ⑵制漿將⑴中得到的苦瓜打漿；(3)過濾將(2)中得到的苦瓜漿過濾；(4)滅菌 將(3)中經(jīng)過過濾的苦瓜漿于120-125°C滅菌5-10min;(5)冷卻將中滅菌后的苦瓜漿冷卻至35-40°C ； (6)發(fā)酵向(5)中冷卻后的苦瓜漿中添加0. 005-0. 01倍其重量的二糖(如蔗糖、甜菜糖、紅糖、麥芽糖)、0. 003-0. 006倍其重量的液化淀粉芽孢桿菌原粉、 0. 002-0. 004倍其重量的側(cè)孢芽孢桿菌原粉、0. 001-0. 002倍其重量的地衣芽孢桿菌原粉、 0. 002-0. 004倍其重量的巨大芽孢桿菌原粉、0. 001-0. 002倍其重量的膠胨樣芽孢桿菌原粉、0. 003-0. 006倍其重量的枯草芽孢桿菌原粉、0. 002-0. 004倍其重量的蘇云金芽孢桿菌原粉、0. 002-0. 004倍其重量的氧化硫硫桿菌原粉，于35-40°C發(fā)酵對-4他；(7)貯藏將 (6)中發(fā)酵得到的苦瓜漿避光密封恒溫保存。優(yōu)選地，步驟O)中是將苦瓜漿分別經(jīng)60目、80目、100目、150目四次精磨制漿； 步驟⑶中是將苦瓜漿分別經(jīng)100目、150目、200目、250目四次過濾除渣；步驟(5)中冷卻后的苦瓜漿中添加0. 005倍其重量的二糖、0. 003倍其重量的液化淀粉芽孢桿菌原粉、 0. 002倍其重量的側(cè)孢芽孢桿菌原粉、0. 001倍其重量的地衣芽孢桿菌原粉、0. 002倍其重量的巨大芽孢桿菌原粉、0. 001倍其重量的膠胨樣芽孢桿菌原粉、0. 003倍其重量的枯草芽孢桿菌原粉、0. 002倍其重量的蘇云金芽孢桿菌原粉、0. 002倍其重量的氧化硫硫桿菌原粉。
前述的液化淀粉芽孢桿菌原粉、側(cè)孢芽孢桿菌原粉、地衣芽孢桿菌原粉、巨大芽孢桿菌原粉、膠胨樣芽孢桿菌原粉、枯草芽孢桿菌原粉、蘇云金芽孢桿菌原粉、氧化硫硫桿菌原粉均為市售商品。液化淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)原粉(商品編號HBQM11061)、側(cè)孢芽孢桿菌(Bacillus laterosporus)原粉(商品編號=HBQMl 1062), 地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)原粉(商品編號HBQM11063)、巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)原粉(商品編號HBQM11064)、膠胨樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)原粉(商品編號:HBQM11065)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)原粉 (商品編號:HBQM11068)、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)原粉(商品編號 HBQMl 1066)、氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxidans)原粉(商品編號=HBQMl 1067)，以上益生菌原粉購自湖北啟明生物工程有限公司。本發(fā)明還提供上述生物廣譜殺菌劑的制備方法，其是將大蒜、洋蔥、苦瓜發(fā)酵液與水按比例混合后進(jìn)行發(fā)酵。具體步驟為(1)原料預(yù)處理將大蒜、洋蔥清洗除雜；(2)打漿將(1)中得到的大蒜、洋蔥混合打漿；(3)過濾將( 中得到的蒜、蔥混合漿過濾除渣；(4)滅菌將(3)中經(jīng)過過濾的混合漿于85-100°C滅菌5-lOmin; 冷卻將中滅菌后的混合漿冷卻至 40-450C ； (6)混合向( 中冷卻后的混合漿中添加苦瓜發(fā)酵液和水，攪拌均勻；(7)發(fā)酵 將(6)中得到的混合液于35-42°C發(fā)酵42-7 ;(8)貯藏將(7)中發(fā)酵得到生物廣譜殺菌劑密封避光保存。優(yōu)選地，步驟O)中是將混合漿分別經(jīng)60目、80目、100目、150目四次精磨制漿； 步驟(3)中是將混合液分別經(jīng)100目、150目、200目、250目四次過濾除渣。本發(fā)明的生物廣譜殺菌劑以天然植物與益生菌為核心，純生物發(fā)酵制備，不添加任何化學(xué)合成成分，具有高效、無公害、無污染、無副作用，抗菌廣譜，藥效長的優(yōu)點，對細(xì)菌引發(fā)的多種病害具有預(yù)防和治療雙重作用等特點，可用于有機(jī)食品、綠色食品、出口農(nóng)產(chǎn)品的病害防治，是新一代綠色殺菌劑，可廣泛用于蔬菜、果樹、園藝花卉、茶園及大田農(nóng)林業(yè)的病害控制，對農(nóng)林作物多種病原真菌、細(xì)菌有明顯抑制消除作用。本發(fā)明的新型生物廣譜殺菌劑通過益生菌營養(yǎng)競爭進(jìn)行生長繁殖，從而占據(jù)生存空間的方式來阻止植物病原菌的生長，能在植物表面迅速形成一層高密保護(hù)膜，使病原菌得不到生存空間，從而保護(hù)作物免受病原菌危害。此外，其含有的抑菌物質(zhì)能夠有效抑制病菌孢子萌發(fā)和菌絲生長，從而達(dá)到預(yù)防與治療的目的，特別適用于綠色無公害農(nóng)產(chǎn)品及出口農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)，可滿足任何殘留檢測的要求。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。以下實施例使用的益生菌原粉購自湖北啟明生物工程有限公司。實施例1本發(fā)明生物廣譜殺菌劑及其制備1、苦瓜發(fā)酵液的制備原料重量配比苦瓜50kg，益生菌原粉800g，紅糖250g。制備方法，包括如下步驟(1)原料預(yù)處理將苦瓜清洗除雜；
(2)制漿將(1)中得到的苦瓜打漿，然后將苦瓜漿分別經(jīng)60目、80目、100目、150 目四次精磨制漿；(3)過濾將(2)中得到的苦瓜漿分別經(jīng)100目、150目、200目、250目四次過濾除渣；(4)滅菌將(3)中經(jīng)過過濾的苦瓜漿于120-125°C滅菌5-lOmin ；(5)冷卻將(4)中滅菌后的苦瓜漿冷卻至35_40°C ；(6)發(fā)酵按照每50kg苦瓜漿添加紅糖250g、液化淀粉芽孢桿菌原粉150g(商品編號HBQM11061)、側(cè)孢芽孢桿菌原粉IOOg(商品編號HBQM1106》、地衣芽孢桿菌原粉 50g(商品編號HBQM11063)、巨大芽孢桿菌原粉IOOg(商品編號HBQM11064)、膠胨樣芽孢桿菌原粉50g(商品編號HBQM11065)、枯草芽孢桿菌原粉150g(商品編號HBQM11068)、蘇云金芽孢桿菌原粉IOOg(商品編號HBQM11066)、氧化硫硫桿菌(商品編號HBQM11067)原粉IOOg的量，向(5)中冷卻的苦瓜漿中加入上述原料，于35°C發(fā)酵Mh;(7)貯藏將(6)中發(fā)酵得到的苦瓜漿避光密封恒溫保存。2、新型生物廣譜殺菌劑的制備原料重量配比大蒜1kg、洋蔥3kg、苦瓜發(fā)酵液5kg、水91kg。制作方法，包括如下步驟(1)原料預(yù)處理將大蒜、洋蔥清洗除雜；(2)打漿將⑴中得到的大蒜、洋蔥混合打漿，然后將混合漿分別經(jīng)60目、80目、 100目、150目四次精磨制漿；(3)過濾將(2)中得到的蒜、蔥混合漿分別經(jīng)100目、150目、200目、250目四次
過濾除渣；(4)滅菌將(3)中經(jīng)過過濾的混合漿于85_100°C滅菌5-lOmin ；(5)冷卻將(4)中滅菌后的混合漿冷卻至40_45°C ；(6)混合按照每4kg混合漿添加5kg苦瓜發(fā)酵液、91kg水的量，向(5)中的混合漿中加入，攪拌均勻；(7)發(fā)酵將(6)中得到的混合液于35°C發(fā)酵4 即可；(8)貯藏將(7)中發(fā)酵得到生物廣譜殺菌劑密封避光保存；(9)按NY/T1156. 17-2009農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準(zhǔn)則與CCGF402. 2-2010殺菌劑的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定檢驗。經(jīng)過檢測，實施例1得到的新型生物廣譜殺菌劑完全符合NY/T1156. 17-2009農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準(zhǔn)則與CCGF 402. 2-2010殺菌劑的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。 實施例2本發(fā)明生物廣譜殺菌劑及其制備1、苦瓜發(fā)酵液的制備原料重量配比苦瓜100kg，益生菌原粉1600g，麥芽糖500g。制作方法，包括如下步驟(1)原料預(yù)處理將苦瓜清洗除雜；(2)制漿將(1)中得到的苦瓜打漿，然后將苦瓜漿分別經(jīng)60目、80目、100目、150 目四次精磨制漿；(3)過濾將(2)中得到的苦瓜漿分別經(jīng)100目、150目、200目、250目四次過濾除渣；(4)滅菌將(3)中經(jīng)過過濾的苦瓜漿于120-125°C滅菌5-lOmin ；(5)冷卻將中滅菌后的苦瓜漿冷卻至35_40°C ；(6)發(fā)酵按照每IOOkg苦瓜漿添加麥芽糖500g、液化淀粉芽孢桿菌原粉300g (商品編號HBQM11061)、側(cè)孢芽孢桿菌原粉200g(商品編號HBQM1106》、地衣芽孢桿菌原粉 IOOg(商品編號HBQM11063)、巨大芽孢桿菌原粉200g(商品編號HBQM11064)、膠胨樣芽孢桿菌原粉IOOg(商品編號HBQM11065)、枯草芽孢桿菌原粉300g(商品編號HBQM11068)、 蘇云金芽孢桿菌原粉200g(商品編號HBQM11066)、氧化硫硫桿菌原粉200g(商品編號 HBQMl 1067)的量，向(5)中冷卻的豆?jié){中加入上述原料，于40°C發(fā)酵48h ；(7)貯藏將(6)中發(fā)酵得到的苦瓜漿避光密封恒溫保存。2、新型生物廣譜殺菌劑的制備原料重量配比大蒜^ig、洋蔥Wig、苦瓜發(fā)酵液10kg、水18^ig。制作方法，包括如下步驟(1)原料預(yù)處理將大蒜、洋蔥清洗除雜；(2)打漿將⑴中得到的大蒜、洋蔥混合打漿，然后將混合漿分別經(jīng)60目、80目、 100目、150目四次精磨制漿；(3)過濾將(2)中得到的蒜、蔥混合漿分別經(jīng)100目、150目、200目、250目四次
過濾除渣；(4)滅菌將(3)中經(jīng)過過濾的混合漿于85_100°C滅菌5-lOmin ；(5)冷卻將(4)中滅菌后的混合漿冷卻至40_45°C ；(6)混合按照每8kg混合漿添加IOkg苦瓜發(fā)酵液、182kg水的量，向(5)中的混合漿中加入，攪拌均勻；(7)發(fā)酵將(6)中得到的混合液于42°C發(fā)酵72h即可；(8)貯藏將(7)中發(fā)酵得到生物廣譜殺菌劑密封避光保存；(9)按NY/T1156. 17-2009農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準(zhǔn)則與CCGF402. 2-2010殺菌劑的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定檢驗。經(jīng)過檢測，實施例2得到的新型生物廣譜殺菌劑完全符合NY/T1156. 17-2009農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準(zhǔn)則與CCGF 402. 2-2010殺菌劑的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。實驗例1考察本發(fā)明的新型生物廣譜殺菌劑防治草莓白粉病的效果(1)試驗作物草莓，品種豐香；(2)防治對象草莓白粉??；(3)實驗地點北京大興龐各莊梨園村；(4)供試藥劑實施例1的生物廣譜殺菌劑原液，瑞士諾華公司生產(chǎn)的10% “世尚，，；(5)實驗處理①實施例1生物廣譜殺菌劑10倍稀釋液；②實施例1生物廣譜殺菌劑50倍稀釋液；③實施例1生物廣譜殺菌劑100倍稀釋液；④實施例1生物廣譜殺菌劑 150倍稀釋液；⑤實施例1生物廣譜殺菌劑200倍稀釋液；⑥10%“世高”水溶粉劑6000倍稀釋液；⑦空白對照；(6)實驗方法選擇前作是草莓，白粉病發(fā)生較重的地塊；田間試驗小區(qū)4次重復(fù)共28個小區(qū)，小區(qū)面積14mX 1. 2m = 16. 8m2。隨機(jī)排列，每小區(qū)種植草莓382株；施藥時間為2010年3月四日、4月5日、4月12日、4月19日共4次；用背負(fù)式手壓噴霧器施藥，每次噴藥時，徹底清洗噴霧器。施藥順序清水對照一實施例1的生物廣譜殺菌劑低濃度一實施例1的生物廣譜殺菌劑高濃度一洗凈噴霧器一10% “世高”;藥液現(xiàn)配現(xiàn)用，施藥時，試驗小區(qū)間用塑料薄膜隔離，預(yù)防藥液四處濺落。(7)調(diào)查及計算在施藥前(3月四日)，施藥中期G月12日)、施藥后G月沈日)進(jìn)行三次調(diào)查。調(diào)查時每試驗小區(qū)按對角線5點取樣，每點3株，每株各取3張復(fù)葉， 以復(fù)葉上每張小葉片白粉病斑面積占整個小葉片面積百分率分為0級無病斑；1級病斑面積占整個葉面積的5%以下；3級病斑面積占整個葉面積的6-15%;5級病斑面積占整個葉面積的16-25% ；7級病斑面積占整個葉面積的沈-50% ；9級病斑面積占整個葉面積的50%以上。計算方法
Σ (各級病葉數(shù)χ相對級數(shù)值)
病情指數(shù)=-xlOO
調(diào)查總數(shù)Χ9
CKq病指數(shù)沖^病指數(shù)防效(％) ι--}χ οο
CX1病指數(shù)XPk病指數(shù)(8)試驗各處理病情指數(shù)如表1所示。表1草莓實驗病情指數(shù)(％ )
處理施藥前施藥后14天施藥后27天新型生物廣譜殺菌劑10倍稀釋液2. 1154. 8381. 893新型生物廣譜殺菌劑50倍稀釋液0. 9856. 1336. 770新型生物廣譜殺菌劑100倍稀釋液0. 1455. 74010. 810新型生物廣譜殺菌劑150倍稀釋液5. 2252. 6982. 923新型生物廣譜殺菌劑200倍稀釋液5. 8423. 4784. 44510%世高6000倍稀釋液0. 9883. 62325. 598對照1. 91311. 17524.220 注以上數(shù)據(jù)為各次重復(fù)平均值。
病情指數(shù)表明，試驗期間空白對照的發(fā)病程度在原基礎(chǔ)上增長了 12. 7倍，有的對照小區(qū)病指高達(dá)39. 51 %。而施藥處理小區(qū)白粉病發(fā)病率都受到不同程度遏制，與對照小區(qū)相比差異達(dá)極顯著。(9)實驗各處理防效如表2所示。表2草莓實驗各處理防效(％ )
權(quán)利要求
1.一種生物廣譜殺菌劑，其特征在于，由如下重量百分?jǐn)?shù)的原料經(jīng)發(fā)酵制成大蒜 1-3 %、洋蔥3-9 %、苦瓜發(fā)酵液5-15 %，其余為水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺菌劑，其特征在于，大蒜、洋蔥和苦瓜發(fā)酵液的重量比為 1 · 3 · 5 ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺菌劑，其特征在于，發(fā)酵條件為35-42°C，42-72h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的殺菌劑，其特征在于，所述苦瓜發(fā)酵液是按照如下步驟制備得到的(1)原料預(yù)處理將苦瓜清洗除雜；(2)制漿將(1)中得到的苦瓜打漿；(3)過濾將O)中得到的苦瓜漿過濾；(4)滅菌將(3)中經(jīng)過過濾的苦瓜漿于120-125°C滅菌5-lOmin；(5)冷卻將中滅菌后的苦瓜漿冷卻至35-40°C；(6)發(fā)酵向(5)中冷卻后的苦瓜漿中添加0.005-0. 01倍其重量的二糖、0. 003-0. 006 倍其重量的液化淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)原粉、0. 002-0. 004倍其重量的側(cè)孢芽孢桿菌(Bacillus laterosporus)原粉、0. 001-0. 002倍其重量的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)原粉、0. 002-0. 004倍其重量的巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)原粉、0. 001-0. 002 倍其重量的膠胨樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus) 原粉、0. 003-0. 006倍其重量的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)原粉、0. 002-0. 004倍其重量的蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)原粉、0. 002-0. 004倍其重量的氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxidans)原粉，于:35-40°C發(fā)酵 24_48h。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的殺菌劑，其特征在于，步驟(6)發(fā)酵是向步驟(5)中冷卻后的苦瓜漿中添加0. 005倍其重量的二糖、0. 003倍其重量的液化淀粉芽孢桿菌原粉、0. 002倍其重量的側(cè)孢芽孢桿菌原粉、0. 001倍其重量的地衣芽孢桿菌原粉、0. 002倍其重量的巨大芽孢桿菌原粉、0. 001倍其重量的膠胨樣芽孢桿菌原粉、0. 003倍其重量的枯草芽孢桿菌原粉、0. 002倍其重量的蘇云金芽孢桿菌原粉、0. 002倍其重量的氧化硫硫桿菌原粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的殺菌劑，其特征在于，所述苦瓜發(fā)酵液，其制備步驟 ⑵中是將苦瓜漿分別經(jīng)60目、80目、100目、150目四次精磨制漿。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的殺菌劑，其特征在于，所述苦瓜發(fā)酵液，其制備步驟 ⑶中是將苦瓜漿分別經(jīng)100目、150目、200目、250目四次過濾除渣。
8.權(quán)利要求1-7任一項所述殺菌劑的制備方法，其特征在于，將大蒜、洋蔥、苦瓜發(fā)酵液與水按比例混合后進(jìn)行發(fā)酵。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，具體步驟為(1)原料預(yù)處理將大蒜、洋蔥清洗除雜；(2)打漿將(1)中得到的大蒜、洋蔥混合打漿；(3)過濾將O)中得到的蒜、蔥混合漿過濾除渣；(4)滅菌將(3)中經(jīng)過過濾的混合漿于85-100°C滅菌5-lOmin；(5)冷卻將中滅菌后的混合漿冷卻至40-45°C；(6)混合向(5)中冷卻后的混合漿中添加苦瓜發(fā)酵液和水，攪拌均勻；(7)發(fā)酵將(6)中得到的混合液于35-42°C發(fā)酵42-7池。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，步驟O)中是將混合漿分別經(jīng)60 目、80目、100目、150目四次精磨制漿；步驟(3)中是將混合液分別經(jīng)100目、150目、200 目、250目四次過濾除渣。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新型生物廣譜殺菌劑及其制備方法，其是由大蒜、洋蔥與苦瓜發(fā)酵液按照一定重量配比混合發(fā)酵而制得。本發(fā)明的生物廣譜殺菌劑以天然植物與益生菌為核心，純生物發(fā)酵制備，不添加任何化學(xué)合成成分，具有高效、無公害、無污染、無副作用，抗菌廣譜，藥效長的優(yōu)點，對細(xì)菌引發(fā)的多種病害具有預(yù)防和治療雙重作用等特點，可用于有機(jī)食品、綠色食品、出口農(nóng)產(chǎn)品的病害防治，是新一代綠色殺菌劑，可廣泛用于蔬菜、果樹、園藝花卉、茶園及大田農(nóng)林業(yè)的病害控制，對農(nóng)林作物多種病原真菌、細(xì)菌有明顯抑制消除作用。
文檔編號A01P1/00GK102210327SQ20111015349
公開日2011年10月12日 申請日期2011年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月9日
發(fā)明者郭正 申請人:北京融青生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司