專利名稱：馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法。屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
馬鈴薯是茄科茄屬一年生草本，其塊莖可供食用，是重要的糧食、蔬菜兼用作物。 據(jù)報道，我國馬鈴薯種植面積已達520余萬公頃，占世界總種植面積的四分之一。但平均單產(chǎn)只有15噸/公頃，大大落后于發(fā)達國家平均45噸/公頃的水平。造成單產(chǎn)低的重要原因之一，是馬鈴薯病毒病對種薯侵染所致。馬鈴薯在營養(yǎng)繁殖時易受病毒浸染，并且在植株內(nèi)增殖、轉(zhuǎn)運和積累于所結(jié)塊莖中，隨著世代傳遞，病毒危害逐年加重，一般可減產(chǎn)50%以上。研究發(fā)現(xiàn)，在植物界大約有30多種病毒感染馬鈴薯，并引起品種退化。隨著馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展，為了篩選出高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的脫病原菌的馬鈴薯株系，現(xiàn)在廣泛采用組織培養(yǎng)方法，產(chǎn)生健康脫毒試管苗。但在繼代培養(yǎng)中，組培苗葉子卻現(xiàn)葉肉缺失，葉片變黃，嚴重致葉片脫落甚至萎焉等現(xiàn)象，但是培養(yǎng)基表面未見真菌和細菌，這嚴重阻礙了組培苗的擴繁，國內(nèi)尚未有過此類報道。通過長期的觀察，發(fā)現(xiàn)在葉片缺失處的微小物體可以長大，變成了翅膀為淺褐色的昆蟲。之后將成蟲制成玻片，在顯微鏡底下根據(jù)昆蟲分類索引進行分類，認為是薊馬，經(jīng)鑒定，確認為是蔥薊馬Thrips tabaci (Lindeman)屬纟嬰翅目，薊馬科,也叫煙薊馬，瓜薊馬，俗稱雞虱子，生活史為卵、若蟲和成蟲。蔥薊馬通常危害大田作物，如棉花、煙草、瓜類、 馬鈴薯、甘藍、甜菜、蔥、洋蔥、蒜、韭菜等20余種，是一種雜食性害蟲。蔥薊馬對組培苗的危害未見有報導，有可能蔥薊馬是從植株組織培養(yǎng)的源頭微莖尖剝離或外植體消毒的環(huán)節(jié)入侵，該蟲卵非常小，抗逆性強，經(jīng)得住殺菌劑的消毒，使其成了無菌昆蟲，該蟲可以孤雌生殖，由于生長溫度與組培苗生長溫度相同，因此在培養(yǎng)瓶中能夠生存。蔥薊馬在無菌培養(yǎng)瓶中的生長，不僅降低了組培苗的成品率，而且也浪費了人力、 物力和財力，大大增加了生產(chǎn)成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述不足，提供一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，可以在組織培育過程中防治蔥薊馬。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述方法包括以下工藝步驟
步驟一、外植體鈍化處理
取馬鈴薯塊莖放在溫箱內(nèi)，每天交替進行12小時12 15°C和12小時35 36°C變溫鈍化處理，處理時間為15 20天，變溫鈍化處理之后馬鈴薯塊莖上便長出O. 2^0. 5毫米的薯芽， 薯芽上有小葉，然后用消毒過的手術(shù)刀將薯芽切除下來。步驟二、薯芽消毒處理
將步驟一切下的薯芽放在容器內(nèi)，添加f 2g/L加酶洗衣粉，蒙上紗布，用自來水連續(xù)沖洗2 3小時；隨后用75%酒精浸泡3(Γ40秒做表面消毒；然后在5%漂白粉液中浸泡5 10 分鐘，或者用O. 05 O. 2%HgCl2浸泡30秒 2分鐘，或者用含O. 5 O. 75%NaC103浸泡5 10分鐘；再用無菌水沖洗4飛次；最后用消毒后的濾紙吸干薯芽表面水分。步驟三、莖尖剝離
超凈臺內(nèi)，在雙筒解剖鏡1(Γ40倍下用鑷子和手術(shù)刀將薯芽上小葉剝?nèi)?，然后切下薯芽的頂芽葉原基。步驟四、愈傷組織誘導
將步驟三切下的薯芽的頂芽葉原基放在含有專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。一個培養(yǎng)瓶內(nèi)放置廣2個頂芽葉原基，培養(yǎng)瓶放置在培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)室溫度為25°C，光照為200(T3000Lux， 光照時間為16小時/天，3(Γ40天后頂芽葉原基上產(chǎn)生愈傷組織。步驟五、繼代培養(yǎng)
步驟四產(chǎn)生的愈傷組織在5(Γ60天后出現(xiàn)生長點，每個生長點在4個月后分化成3 4 棵幼苗；將每棵幼苗轉(zhuǎn)接到含有改良培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)，每個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)接15 20株幼苗；改良培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)添加了殺蟲劑；幼苗在培養(yǎng)瓶中生長2(Γ30天后長成完整的植株，隨后可以移栽到網(wǎng)室進行無土栽培。本發(fā)明馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，所述步驟五中所述殺蟲劑為吡蟲啉或者康福多或者抗虱丁。本發(fā)明馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，所述殺蟲劑吡蟲啉為可濕性粉劑或者所述殺蟲劑康福多為水分散劑或者所述殺蟲劑抗虱丁為可濕性粉劑。本發(fā)明馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，所述殺蟲劑吡蟲啉可濕性粉劑的濃度為10%或者所述殺蟲劑康福多水分散劑的濃度為40%或者所述殺蟲劑抗虱丁可濕性粉劑的濃度為 10%。本發(fā)明馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，所述殺蟲劑10%吡蟲啉可濕性粉劑在改良培養(yǎng)基中的濃度為O. 5^2g/L或者所述殺蟲劑40%康福多水分散劑在改良培養(yǎng)基中的濃度為 O. ri. 2g/L或者所述殺蟲劑10%抗虱丁可濕性粉劑在改良培養(yǎng)基中的濃度為O. 2 lg/L。本發(fā)明馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，步驟四中的專用培養(yǎng)基為MS+6-BA1. (Γ2. 5mg/ L+NAA0. Γθ. 3mg/L 或者 MS+NAA2 3mg/L。本發(fā)明馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，所述步驟五中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。本發(fā)明的有益效果是
在培養(yǎng)基中添加殺蟲劑可有效的防治蔥薊馬對組培苗的侵害，在組培苗繼代培養(yǎng)中， 不再出現(xiàn)葉肉缺失、葉片變黃脫落等癥狀，使組培苗能茂盛健康的生長，提高了組培苗的成品率，節(jié)省了人力、物力和財力，降低了生產(chǎn)成本。
具體實施例方式下面為本發(fā)明馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法
步驟一、外植體鈍化處理
取馬鈴薯塊莖放在溫箱內(nèi)，每天交替進行12小時12 15°C和12小時35 36°C變溫鈍化處理，處理時間為15 20天，變溫鈍化處理之后馬鈴薯塊莖上便長出O. 2^0. 5毫米的薯芽， 薯芽上有小葉，然后用消毒過的手術(shù)刀將薯芽切除下來。
步驟二、薯芽消毒處理
將步驟一切下的薯芽放在容器(燒杯或者瓶皿)內(nèi)，添加f2g/L加酶洗衣粉，蒙上紗布， 用自來水連續(xù)沖洗2 3小時；隨后用75%酒精浸泡3(Γ40秒做表面消毒；然后在5%漂白粉液中浸泡5 10分鐘，或者用O. 05 O. 2%HgCl2浸泡30秒 2分鐘，或者用含O. 5 O. 75%NaC103 浸泡5 10分鐘；再用無菌水沖洗4飛次；最后用消毒后的濾紙吸干薯芽表面水分。步驟三、莖尖剝離
超凈臺內(nèi)，在雙筒解剖鏡1(Γ40倍下用鑷子和手術(shù)刀將薯芽上小葉剝?nèi)?，然后切下薯芽的頂芽葉原基。步驟四、愈傷組織誘導
將步驟三切下的薯芽的頂芽葉原基放在含有專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，專用培養(yǎng)基為 MS+6-BA1. (Γ2. 5mg/L+NAA0. Γθ. 3mg/L 或者 MS+NAA2 3mg/L。一個培養(yǎng)瓶內(nèi)放置 I 2 個頂芽葉原基，培養(yǎng)瓶放置在培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)室溫度為25°C，光照為200(T3000Lux，光照時間為 16小時/天，30^40天后頂芽葉原基上產(chǎn)生愈傷組織。步驟五、繼代培養(yǎng)
步驟四產(chǎn)生的愈傷組織在50飛0天后出現(xiàn)生長點，每個生長點在4個月后分化成3 4 棵幼苗。將每棵幼苗轉(zhuǎn)接到含有改良培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)，每個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)接15 20株幼苗。改良培養(yǎng)基是在MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)添加了殺蟲劑，所述殺蟲劑為O. 5^2g/L的10%吡蟲啉可濕性粉劑或者O. ri. 2g/L的40%康福多水分散劑或者O. 2 lg/L的10%抗虱丁可濕性粉劑。 幼苗在培養(yǎng)瓶中生長20 30天后長成完整的植株，隨后可以移栽到網(wǎng)室進彳丁無土栽培。本發(fā)明中提到的百分比除了 75%酒精為體積比，其余均為質(zhì)量比。
權(quán)利要求
1.一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，其特征在于包括以下工藝步驟步驟一、外植體鈍化處理馬鈴薯塊莖變溫鈍化處理之后，馬鈴薯塊莖上長出帶有小葉的薯芽，然后將薯芽切除下來；步驟二、薯芽消毒處理將步驟一切下的薯芽進行消毒處理；步驟三、莖尖剝離將薯芽上小葉剝?nèi)ィ缓笄邢率硌康捻斞咳~原基；步驟四、愈傷組織誘導將步驟三切下的薯芽的頂芽葉原基放在含有專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中進行誘導產(chǎn)生愈傷組織；步驟五、繼代培養(yǎng)步驟四產(chǎn)生的愈傷組織分化成幼苗，然后將每棵幼苗轉(zhuǎn)接到含有改良培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)；改良培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)添加了殺蟲劑；幼苗在培養(yǎng)瓶中生長2(Γ30天后長成完整的植株，隨后可以移栽到網(wǎng)室進行無土栽培。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，其特征在于殺蟲劑為吡蟲啉或者康福多或者抗風丁。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述殺蟲劑吡蟲啉為可濕性粉劑或者所述殺蟲劑康福多為水分散劑或者所述殺蟲劑抗虱丁為可濕性粉劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述殺蟲劑吡蟲啉可濕性粉劑的濃度為10%或者所述殺蟲劑康福多水分散劑的濃度為40%或者所述殺蟲劑抗虱丁可濕性粉劑的濃度為10%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述殺蟲劑10%吡蟲啉可濕性粉劑在改良培養(yǎng)基中的濃度為O. 5^2g/L或者所述殺蟲劑40%康福多水分散劑在改良培養(yǎng)基中的濃度為O. ri. 2g/L或者所述殺蟲劑10%抗虱丁可濕性粉劑在改良培養(yǎng)基中的濃度為O. 2 lg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，其特征為其中的專用培養(yǎng)基為 MS+6-BA1. 0 2· 5mg/L+NAA0. Γθ. 3mg/L 或者 MS+NAA2 3mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，其特征為其中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為 MS培養(yǎng)基。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法，它包括以下步驟首先對外植體進行鈍化處理，之后切下薯芽；接著對薯芽進行消毒，再切下薯芽的頂芽葉原基；然后將頂芽葉原基轉(zhuǎn)接到專用培養(yǎng)基上使其產(chǎn)生愈傷組織；隨后愈傷組織分化出幼苗，再將幼苗轉(zhuǎn)接到含有殺蟲劑的MS培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)；最后幼苗長成植株，可以移栽到網(wǎng)室進行無土栽培。本發(fā)明一種馬鈴薯的組織培養(yǎng)方法中在MS培養(yǎng)基內(nèi)添加殺蟲劑后不僅提高了組培苗的成品率，而且節(jié)省了人力、物力和財力，降低了生產(chǎn)成本。
文檔編號A01H4/00GK102577960SQ20121004545
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月27日
發(fā)明者吳春苗, 居玉玲, 李克寧, 黃醒詩 申請人:江陰沃土農(nóng)業(yè)生物科技開發(fā)有限公司