專利名稱：沙塘鱧控溫流水孵化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于魚類受精卵孵化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法。
背景技術(shù)：
沙塘鱧(拉丁文:Odon tobutis obscurus ),屬魚盧形目，塘鱧科,沙塘鱧屬。俗稱:烏草包、草婆魚、土布魚、塘鱧、土才魚和土憨巴等等。在我國主要分布于長江中下游及其支流、錢塘江水系和閩江水系等廣大地區(qū)。沙塘鱧個體雖小，但其具有含肉量高、少刺、肉質(zhì)細嫩可口和營養(yǎng)豐富的特點。每百克沙塘鱧肉含蛋白質(zhì)18.39g、脂肪0.98g、鈣0.42g以及含有磷鐵和維生素等。沙塘鱧肉所含的人體必需的氨基酸和鮮味氨基酸均高于一般魚類，有滋補、益筋骨和腸胃以及治痔瘡等功效，妊娠期和產(chǎn)婦多食具有良好的保健作用，因而歷來為長江中、下游及南方諸省群眾所喜愛，是一種名貴的經(jīng)濟魚類。沙塘鱧喜生活于河溝及湖泊近岸多水草、瓦礫、石隙、破瓦罐和泥沙的底層，游泳力弱，以蝦和小魚為主要食物。一齡魚即達性成熟，3月下旬至6月初為產(chǎn)卵季節(jié)，卵粘性，常粘附于蛘殼、瓦片或石塊上。雄魚有守巢護卵習(xí)性，直至仔魚孵出。近年來，由于野生魚類資源的快速衰減，沙塘鱧捕獲量銳減，因此市場價格高達50 60元/kg (RMB),并且魚源緊張而并不能滿足人們的需求。

如業(yè)界所知之理，利用價格杠桿這一調(diào)節(jié)手段對日益減少的沙塘鱧資源實施救濟客觀上與事無補，只能算是一種消極應(yīng)對的權(quán)宜之計，最終導(dǎo)致沙塘鱧趨附于向枯竭。因此，人工繁殖沙塘鱧才是目前水產(chǎn)業(yè)界公認的并且企盼的積極應(yīng)對之策，因為，一可拯救頻頻減少的沙塘鱧資源；二可滿足人民群眾的需求。人工繁殖沙塘鱧的技術(shù)信息可以公開的中國專利文獻中見諸，典型的如CN100396177C介紹的“沙塘鱧人工繁殖方法及其孵化裝置”，該專利方法所包含的步驟依次為:“親魚培育、誘導(dǎo)同步產(chǎn)卵與授精、人工孵化和魚苗培育”，具體可參見該專利的說明書第2頁第2行至第16行。應(yīng)該說該專利技術(shù)方案能夠體現(xiàn)說明書第2頁第22行至第3頁第3行所述的長處。但是客觀上仍存在以下缺憾:如前述，沙塘鱧的卵為粘性，并且常粘附于蛘殼、瓦片或石塊之類的載體上，而粘性物質(zhì)(粘液)極易出現(xiàn)霉爛，從而殃及受精卵乃至殃及周圍的健康的受精卵。尤其是，當沙塘鱧產(chǎn)卵于前述載體上時，通常會出現(xiàn)重疊乃至堆積的情形，從而更易產(chǎn)生霉爛，影響孵化率。因此專利所稱的孵化率達85%是有商榷余地的。周知之理，孵化率是魚苗成苗率的前提條件，也就是說，只有提高孵化率，魚苗的成苗率才有保障，然而在已公開的專利和非專利文獻中，均未見諸有如何提高沙塘鱧的孵化率的技術(shù)啟示，為此本申請人進行了長期的探索與嘗試，找到了解決問題的辦法，下面將要介紹的技術(shù)方案便是在這種背景下產(chǎn)生的
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的任務(wù)在于提供一種沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，該方法能有效地避免受精卵霉爛而藉以顯著提高孵化率并且該方法操作簡便和適用性廣而能滿足產(chǎn)業(yè)化養(yǎng)殖要求。本發(fā)明的任務(wù)是這樣來完成的，一種沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，包括以下步驟:
A)受精卵獲取；人工授精法或自然產(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵，并且對人工授精法得到的沙塘鱧受精卵進行脫粘，所述自然產(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵是使用工具直接從附著物上取下由沙塘鱧自然產(chǎn)下的沙塘鱧受精卵塊；
B)孵化，提取少量沙塘鱧受精卵在顯微鏡下觀察，以確定受精卵的發(fā)育期，對原腸胚前期孵化采用靜水換水法孵化或流水曝氣法孵化，并且控制原腸胚前期孵化的水溫，對原腸胚后期孵化采用上流式流水孵化，并且控制原腸胚后期孵化的水溫，直至受精卵脫膜孵出沙塘鱧仔魚，所述孵化所用的容器為孵化桶；
C)收集沙塘鱧仔魚，用目數(shù)為60目的絹布制成的集苗箱帶水操作而收集沙塘鱧仔魚；
D)沙塘鱧仔魚培育，待仔魚出現(xiàn)鰾點時將其弓I入魚苗培育池中進行魚苗培育，得到沙塘鱧夏花苗種。在本發(fā)明的一個具體的實施例中，步驟A)中所述的人工授精法得到沙塘鱧受精卵的過程是:殺性腺成熟的雄性沙塘鱧取其精巢，并且將所取的精巢在生理鹽水中剪碎而得到成熟的精子，以擠卵法將性腺成熟的雌性沙塘鱧的卵子擠出，得到成熟的卵子，將精子與卵子混合，得到人工授精卵；所述的自然產(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵的過程是:將沙塘鱧雌雄親魚按比例放入同一養(yǎng)殖池中，由其自由交配并產(chǎn)卵于附著物上。

在本發(fā)明的另一個具體的實施例中，步驟A)中所述的脫粘是指先將所述人工授精法得到的所述沙塘鱧受精卵引入盛有脫粘液的容器中輕攪3-5min，而后用紗布過濾，所述的工具為小刀。在本發(fā)明的又一個具體的實施例中，所述的脫粘液由粉碎并且過篩的干粘土與水按重量比為20: 100構(gòu)成。在本發(fā)明的再一個具體的實施例中，步驟B)中所述的確定受精卵的發(fā)育期是指確定受精卵已受精并完成受精卵細胞分裂、已完成囊胚階段并且胚胎發(fā)育正常。在本發(fā)明的還有一個具體的實施例中，步驟B)中所述的控制原腸胚前期孵化的水溫是將水溫控制為20-21°C ;所述的控制原腸胚后期孵化的水溫是將水溫控制為27-28°C。在本發(fā)明的更而一個具體的實施例中，步驟B)中所述的上流式流水孵化是指對孵化容器采用下進水上溢水的方式孵化；所述的靜水換水法孵化是將受精卵放入容器中，控制水位15-20cm,每天換水2次,早上I次、下午I次,換水時水溫一致,換水量為80% ;所述的流水曝氣法孵化是將受精卵放入容器中24小時循環(huán)流水，控制水位15-20cm，并保持24小時對容器中的水體進行充氣增氧，充氣量以水面上有少量小氣泡為準。在本發(fā)明的進而一個具體的實施例中，所述的生理鹽水的質(zhì)量百分比濃度為0.7-0.8%。本發(fā)明提供的技術(shù)方案不僅解決了沙塘鱧受精卵易霉爛的技術(shù)問題，而且能縮短沙塘鱧受精卵的孵化時間，提高沙塘鱧受精卵孵化率(70%以上);方法具有操作簡便而不苛刻并且適用性廣而能滿足產(chǎn)業(yè)化批量繁殖要求；由于人工授精法得到的受精卵的正常孵化時間長，易出現(xiàn)霉菌感染而發(fā)生霉爛，因而本發(fā)明對原腸胚前、后期孵化的水溫進行控制，從而能抑制霉菌繁殖并快速分解壞卵，避免霉爛蔓延并且縮短孵化時間。
具體實施例方式為了使專利局的審查員尤其是公眾能更好地理解本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)和全面地運用本發(fā)明的技術(shù)方案，申請人將結(jié)合下面給出的實施例作更為詳細的說明，但實施例并不是對本發(fā)明方案的限制，任何依據(jù)本發(fā)明方案而作出的僅僅為形式而非實質(zhì)性的變化，則均應(yīng)視為未脫離本發(fā)明的保護范圍。實施例1:
A)受精卵獲??；自然產(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵，具體是使用小刀片直接從附著物上將卵塊剝離取下，自然產(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵的過程是:將沙塘鱧雌雄親魚按比例(雌雄比為2: I)放入同一養(yǎng)殖池中，由 其自由交配并產(chǎn)卵于附著物上，附著物如置于養(yǎng)殖池中的蛘殼、瓦片和石塊等等，得到沙塘鱧受精卵；
B)孵化，取少量沙塘鱧受精卵置于顯微鏡下觀察，以確定受精卵的發(fā)育期或稱發(fā)育程度，這里所講的確定受精卵的發(fā)育期是指確定受精卵已受精并且完成受精卵細胞分裂、已完成囊胚階段并且胚胎發(fā)育正常，對于原腸胚前期孵化采用靜水換水法孵化或流水曝氣法孵化，并且控制原腸胚前期孵化的水溫為20°C，對原腸胚后期孵化采用下進水上溢水的方式孵化，并且將原腸胚后期孵化的水溫控制為28°C，直至受精卵脫膜孵出沙塘鱧仔魚，前述孵化所用的容器為孵化桶，前述的靜水換水法孵化是將受精卵放入腳盆狀的容器中，控制水位深度15-20 cm,每天換水兩次,早上一次和下午一次，換水時水溫一致，換水量為80%,前述的流水曝氣法孵化是將受精卵放入腳盆狀容器中24小時循環(huán)流水，控制水位深度15-20 Cm，并且保持24h對容器中的水體進行充氣增氧，充氣量以水面上出現(xiàn)少量小氣泡為
且；
C)收集沙塘鱧仔魚，用目數(shù)為60目的絹布制成的集苗箱帶水操作而收集沙塘鱧仔魚；D )沙塘鱧仔魚培育，待仔魚出現(xiàn)鰾點時將其引入魚苗培育池中進行魚苗培育，
得到沙塘鱧夏花苗種，由于魚苗培育屬于公知技術(shù)，例如可參見發(fā)明專利申請公布號CN101933477A,因此申請人不再贅述。實施例2:
A)受精卵獲??；人工授精法得到沙塘鱧受精卵，人工授精方法是選擇雌雄性腺同步成熟的親魚，先將雄親魚的腹部剖開，取出精巢，將精巢引入盛有質(zhì)量百分比濃度為0.7%的5ml生理鹽水的燒杯中(該5ml的生理鹽水是針對一尾雄親魚的一對精巢的用量)，燒杯的容量為100ml，并且用剪子和鑷子將精巢剪碎(撕碎)，再將精子置入顯微鏡下察看，以確認精子的活力(活動情況)，在確認獲得較好的精子(活動精子占70%以上)后，再提取腹部飽滿的雌性沙塘鱧親魚，輕輕按壓雌魚腹部擠出粘性卵子至前述的已盛有精子的燒杯中，并且一邊擠一邊搖動燒杯，使精卵結(jié)合，得到受精卵即得到人工授精的受精卵，并將該受精卵倒入由干粘土與水按重量比為20: 100構(gòu)成的脫粘液中，用諸如雞、鴨、鵝之類的家禽的羽毛輕輕攪動3-5min (3-5分鐘)，而后用紗布過濾，收得到脫粘受精卵；
B)孵化，取少量受精卵在顯微鏡下觀察，以確定其發(fā)育程度，原腸胚前期適當控制水溫21°C并用靜水換水法或流水曝氣法孵化，原腸胚后期逐漸加溫至27°C，并進行上流式流水孵化，孵化桶內(nèi)受精卵的密度優(yōu)選為15粒/ml，由于受精卵在孵化桶內(nèi)處于懸浮狀態(tài)，因此流水孵化采用底部進水而上部溢水，溢水口使用60目的窗紗網(wǎng)阻擋，以避免受精卵及剛孵出的仔魚苗隨水逃逸，在孵化過程中，孵化的溫度是這樣來控制的:在受精卵開始孵化時將孵化溫度控制為21°C，而在3天后受精卵發(fā)育至原腸胚期將溫度控制為27V，經(jīng)16d (16天)后，仔魚苗孵化出膜，即得到沙塘鱧仔魚苗也即沙塘鱧魚苗，孵化率達70% ；
C)收集沙塘鱧仔魚，用目數(shù)為60目的絹布制成集苗箱放入集苗池中，保證集苗網(wǎng)箱中水體不少于箱體的I / 4，帶水操作收集孵出的沙塘鱧仔魚；
D)沙塘鱧仔魚苗培育，待由步驟C)得到的沙塘鱧仔魚苗出現(xiàn)鰾點時將其轉(zhuǎn)移至魚苗培育池中按已有技術(shù)中普遍使用的魚苗培育方式進行培育，得到沙塘鱧夏花種苗。本實施例中未涉及的內(nèi)容如靜水換水法以及流水曝氣法孵化同對實施例1的描述。實施例3:
僅將步驟A)中的生理鹽水的質(zhì)量百分比濃度改為0.8%，生理鹽水的量改為8ml (針對一尾雄親魚的一對精巢的用量)；將用羽毛輕攪的時間改為3min ;將步驟B)中的孵化桶內(nèi)的受精卵的密度改為20粒/ml，將受精卵開始孵化時的孵化溫度改為20°C，而在3天后受精卵發(fā)育至原腸胚期的溫度改為28°C，孵化時間改為15d (15天)，孵化率為71%。其余均同對實施例2的描述。實施例4:
僅將步驟A)受精卵由自然產(chǎn)卵法得到，即將雌雄親魚按雌:雄=2:1比例放入同一養(yǎng)殖池中，讓其自已交配產(chǎn)卵，每天檢查產(chǎn)卵附著物(河蛘殼)，發(fā)現(xiàn)有卵塊及時取出，自然產(chǎn)卵法中用小刀片直接從附著物(河蛘 殼)上將卵塊剝離取下；步驟B)取少量受精卵在顯微鏡下觀察，確定其發(fā)育階段，原腸胚前期適當控制水溫21°C并用靜水換水法或流水曝氣法孵化，原腸胚后期逐漸加溫至27°C，并進行上流式流水孵化，孵化時間為16d (16天)，孵化率為73%。其余均同對實施例1的描述。
權(quán)利要求
1.一種沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，其特征在于包括以下步驟: A)受精卵獲?。蝗斯な诰ɑ蜃匀划a(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵，并且對人工授精法得到的沙塘鱧受精卵進行脫粘，所述自然產(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵是使用工具直接從附著物上取下由沙塘鱧自然產(chǎn)下的沙塘鱧受精卵塊； B)孵化，提取少量沙塘鱧受精卵在顯微鏡下觀察，以確定受精卵的發(fā)育期，對原腸胚前期孵化采用靜水換水法孵化或流水曝氣法孵化，并且控制原腸胚前期孵化的水溫，對原腸胚后期孵化采用上流式流水孵化，并且控制原腸胚后期孵化的水溫，直至受精卵脫膜孵出沙塘鱧仔魚，所述孵化所用的容器為孵化桶； C)收集沙塘鱧仔魚，用目數(shù)為60目的絹布制成的集苗箱帶水操作而收集沙塘鱧仔魚； D)沙塘鱧仔魚培育，待仔魚出現(xiàn)鰾點時將其引入魚苗培育池中進行魚苗培育，得到沙塘鱧夏花苗種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，其特征在于步驟A)中所述的人工授精法得到沙塘鱧受精卵的過程是:殺性腺成熟的雄性沙塘鱧取其精巢，并且將所取的精巢在生理鹽水中剪碎而得到成熟的精子，以擠卵法將性腺成熟的雌性沙塘鱧的卵子擠出，得到成熟的卵子，將精子與卵子混合，得到人工授精卵；所述的自然產(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵的過程是:將沙塘鱧雌雄親魚按比例放入同一養(yǎng)殖池中，由其自由交配并產(chǎn)卵于附著物上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，其特征在于步驟A)中所述的脫粘是指先將所述人工授精法得到的所述沙塘鱧受精卵引入盛有脫粘液的容器中輕攪3-5min,而后用紗布過濾,所述的工具為小刀。
4.根據(jù)權(quán)利要求 3所述的沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，其特征在于所述的脫粘液由粉碎并且過篩的干粘土與水按重量比為20: 100構(gòu)成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，其特征在于步驟B)中所述的確定受精卵的發(fā)育期是指確定受精卵已受精并完成受精卵細胞分裂、已完成囊胚階段并且胚胎發(fā)育正常。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，其特征在于步驟B)中所述的控制原腸胚前期孵化的水溫是將水溫控制為20-21°C ;所述的控制原腸胚后期孵化的水溫是將水溫控制為27-28°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，其特征在于步驟B)中所述的上流式流水孵化是指對孵化容器采用下進水上溢水的方式孵化；所述的靜水換水法孵化是將受精卵放入容器中，控制水位15-20cm，每天換水2次，早上I次、下午I次，換水時水溫一致，換水量為80% ;所述的流水曝氣法孵化是將受精卵放入容器中24小時循環(huán)流水，控制水位15-20cm，并保持24小時對容器中的水體進行充氣增氧，充氣量以水面上有少量小氣泡為準。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，其特征在于所述的生理鹽水的質(zhì)量百分比濃度為0.7-0.8%。
全文摘要
一種沙塘鱧受精卵控溫流水孵化方法，屬于魚類受精卵孵化技術(shù)領(lǐng)域。步驟人工授精法或自然產(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵，且對人工授精法得到的沙塘鱧受精卵進行脫粘，自然產(chǎn)卵法得到沙塘鱧受精卵是使用工具直接從附著物上取下由沙塘鱧自然產(chǎn)下的沙塘鱧受精卵塊；提取少量沙塘鱧受精卵在顯微鏡下觀察，以確定受精卵的發(fā)育期，對原腸胚前期孵化采用靜水換水法孵化或流水曝氣法孵化，對原腸胚后期孵化采用上流式流水孵化，直至受精卵脫膜孵出沙塘鱧仔魚；用絹布制成的集苗箱帶水操作而收集沙塘鱧仔魚；待仔魚出現(xiàn)鰾點時將其引入魚苗培育池中，得到沙塘鱧夏花苗種。解決了沙塘鱧受精卵易霉爛的技術(shù)問題，縮短孵化時間，提高受精卵孵化率。
文檔編號A01K61/00GK103202251SQ20131011843
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月8日
發(fā)明者徐建榮, 韓曉磊, 楊俊杰, 曹昆, 齊剛 申請人:常熟理工學(xué)院