蝗蟲微孢子雛蝗株系及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雛蝗微孢子株系及其應用。本發(fā)明所提供的雛蝗微孢子株系為雛蝗微孢子（Paranosema?acridophagus）PA-201301，它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的藏編號為CGMCC?No.7757。本發(fā)明所提供的雛蝗微孢子（Paranosema?acridophagus）PA-201301CGMCC?No.7757具有如下優(yōu)點：對狹翅雛蝗、小翅雛蝗、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗、東亞飛蝗和云斑車蝗的致死效果明顯大于現(xiàn)有的蝗蟲微孢子的致死效果；抗逆性，特別是抗紫外線能力強，孢子溶液經(jīng)紫外線照射1h，孢子萌發(fā)率仍然超過80%；另外，本發(fā)明的微孢子生產(chǎn)技術簡單，繁殖寄主容易得到，勻漿后，離心力6000g左右分離即可，有助于大量生產(chǎn)和應用。
【專利說明】蝗蟲微孢子雛蝗株系及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種蝗蟲微孢子新株系及其應用，特別涉及一種蝗蟲微孢子雛蝗株系及其在防治蝗蟲中的應用
【背景技術】
[0002]蝗災是世界性的自然災害，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了很大的影響。多年來，蝗災曾發(fā)生過大面積的頻繁暴發(fā)，包括土蝗、飛蝗、稻蝗、棉蝗和竹蝗。僅飛蝗和土蝗每年分別發(fā)生2500萬畝次和7000萬畝次，嚴重影響了農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)。
[0003]從20世紀70年代美國采用黑蝗等作為繁殖宿主來培養(yǎng)蝗蟲微孢子，隨后國內(nèi)外都陸續(xù)開展了蝗蟲微孢子的研究。但是現(xiàn)示范應用的蝗蟲微孢子是從美國引進的，屬于外來物種，應用后有一定生態(tài)風險；此外，現(xiàn)有的蝗蟲微孢子株系抗逆性較差，特別是抗高溫和紫外線能力弱。因此有必要篩選出適用于本土使用且對蝗蟲等效果好，抗紫外等能力強的株系，能顯著提高防治蝗蟲效果且防效穩(wěn)定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種雛蝗微孢子株系及其應用。
[0005]本發(fā)明所提供的幢蟲微孢子雛幢株系(Paranosema acridophagus (Locustae))具體簡稱為雛幢微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301,是從野外感病狹翅雛蟲皇(Chorthippus dubius Zub)中分離篩選得到的，已于2013年6月19日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所)，保藏`登記號為CGMCC N0.7757。
[0006]所述雛幢微抱子(Paranosemaacridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757在如下任一中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍:
[0007](I)防治蝗蟲；
[0008](II)制備蝗蟲防治劑。
[0009]在本發(fā)明中，所述蝗蟲具體可為狹翅雛蝗、小翅雛蝗、飛蝗(如東亞飛蝗)、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗和云斑車蝗中的至少一種。
[0010]本發(fā)明的再一個目的是提供一種蝗蟲防治劑。
[0011]本發(fā)明所提供的蝗蟲防治劑，其活性成分為所述雛蝗微孢子(Paranosemaacridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0012]在本發(fā)明中，所述蝗蟲防治劑具體為如下(a)或(b):
[0013](a)由所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757、水和蝗蟲引誘劑，按照0.4±0.02億孢子:1±0.1mL: 30±5 μ g (如0.4億孢子:ImL: 30 μ g)的比例混合而成的蝗蟲防治劑I ;
[0014](b)由所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757、粒徑為1.5-2mm的大麥麩皮和蝗蟲引誘劑，按照0.4±0.02億孢子:10±0.8g: 30±5μ g(如0.4億孢子:IOg: 30 μ g)的比例混合而成的蝗蟲防治劑2。
[0015]其中，所述蝗蟲引誘劑為環(huán)己醇。
[0016]在本發(fā)明中，作為所述蝗蟲引誘劑的環(huán)己醇具體為百靈威科技有限公司產(chǎn)品，其產(chǎn)品目錄號為CAS: 108-93-0。
[0017]在本發(fā)明中，所述蝗蟲具體可為狹翅雛蝗、小翅雛蝗、飛蝗(如東亞飛蝗)、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗和云斑車蝗中的至少一種。
[0018]本發(fā)明的還一個目的是提供一種制備所述蝗蟲防治劑的活性成分的方法。
[0019]本發(fā)明所提供的制備所述蝗蟲防治劑的活性成分的方法，具體可包括如下步驟:
[0020](I)將所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus (Locustae))PA-20130ICGMCCN0.7757接種于蝗蟲，接種后正常飼喂，直至所述蝗蟲死亡；
[0021](2)從死亡蟲體中分離得到所述雛幢微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757，即為所述蝗蟲防治劑的活性成分。
[0022]在上述方法中，步驟(I)中，所述“將所述雛幢微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757接種于蝗蟲”的接種量為2 X IO4孢子(如接種20 μ L濃度為I X IO6孢子/mL的孢子液)；所述蝗蟲具體可為4-5齡期的蝗蟲，更加具體的所述蝗蟲可為4-5齡期的狹翅雛蝗、小翅雛蝗、東亞飛蝗、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗和云斑車蝗中的至少一種。
[0023]在上述方法中，步驟(I)中，所述飼喂的條件為:溫度26_35°C，相對濕度60_70%，光照時間12小時/天。
[0024]在上述方法中，步驟(I)中，所述飼喂為飼喂禾本科植物葉片，如玉米葉片等。
[0025]在上述方法中，步驟(3)中，所述“從死亡蟲體中分離得到所述雛蝗微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757” 具體可通過如下方法實現(xiàn):將所述死亡蟲體的腹部勻漿(如放入勻漿器內(nèi)勻漿)，用40-60目的濾網(wǎng)過濾(如用40-60目的醫(yī)用尼龍紗網(wǎng)過濾)，用6000g-8000g的離心力離心12分鐘，取沉淀，即為所述雛蝗微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0026]本發(fā)明的又一個目的是提供一種蝗蟲防治方法。
[0027]本發(fā)明所提供的蝗蟲防治方法，是使用所述蝗蟲防治劑對蝗蟲進行防治。
[0028]在所述方法中，當采用所述蝗蟲防治劑I對蝗蟲進行防治時，所述蝗蟲防治劑I的用量為:每畝植物施用10-12.5mL (如12.5mL)所述蝗蟲防治劑I。
[0029]在所述方法中，當采用所述蝗蟲防治劑2對蝗蟲進行防治時，所述蝗蟲防治劑2的用量為:每畝防治區(qū)施用100-125g (如125g)所述蝗蟲防治劑2。
[0030]在上述方法中，所述蝗蟲可為狹翅雛蝗、小翅雛蝗、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗、東亞飛蝗和云斑車蝗中的至少一種。
[0031 ] 在本發(fā)明中，所述防治區(qū)為草地、林地或農(nóng)田等。
[0032]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明所提供的雛幢微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757具有如下優(yōu)點:對蝗蟲的致死效果明顯大于現(xiàn)有的蝗蟲微孢子株系的致死效果；抗逆性，特別是抗紫外線能力強，孢子溶液經(jīng)紫外線照射lh，孢子萌發(fā)率仍然超過80% ;另外，本發(fā)明的微孢子生產(chǎn)技術簡單，繁殖寄主容易得到，勻漿后，離心力6000g左右分離即可，有助于大量生產(chǎn)和應用。本發(fā)明的社會及經(jīng)濟效益如下:1、經(jīng)濟效益:在本發(fā)明的基礎上可生廣出聞效無害有機農(nóng)藥，減少殘留，提供綠色食品。本發(fā)明有利于加快微孢子防蝗生物制劑的開發(fā)應用進程，完善應用技術，在近幾年內(nèi)可開發(fā)出適于大面積推廣應用的純生物制劑并實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，能產(chǎn)生巨大經(jīng)濟效益。2、生態(tài)效益:本發(fā)明所提供的防蝗微孢子制劑屬于純天然生物制劑，害蟲對其不易產(chǎn)生抗藥性，對害蟲天敵沒有殺傷作用，對高等動物無害，不污染環(huán)境，能保護生態(tài)平衡，具有較好的生態(tài)效益。3、社會效益:本發(fā)明能大大促進防蝗微孢子制劑的開發(fā)應用和草原植被恢復，促進地區(qū)畜牧業(yè)的發(fā)展和農(nóng)牧民生活水平的提高，具有很大的社會效益。在貧瘠地區(qū)建立微孢子防蝗示范區(qū)，可幫助農(nóng)牧民脫貧致富，其社會效益十分顯著。并解決一部分人員的就業(yè)問題，對維護社會的穩(wěn)定和經(jīng)濟發(fā)展，提高當?shù)厝嗣裆钏剑哂芯薮蟮纳鐣徒?jīng)濟效益。
[0033]保藏說明
[0034]微孢子:雛蝗微孢子
[0035]拉丁名:(Paranosemaacridophagus)
[0036]菌株編號:PA-201301 [0037]保藏機構:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0038]保藏機構簡稱:CGMCC
[0039]地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號
[0040]保藏日期:2013年06月19日
[0041]保藏中心登記入冊編號:CGMCC N0.7757
【專利附圖】

【附圖說明】
[0042]圖1 為雛蝗微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757 的培育
工藝流程圖。
[0043]圖 2 為雛蝗微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757 在不同
寄主中的增殖效果比較。
[0044]圖3為不同微孢子株系對不同蝗蟲的毒力測定結果。其中，“雛蝗微孢子”即為雛蟲皇微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.77570
[0045]圖4為不同微孢子株系對不同蝗蟲的感染能力測定結果。其中，“雛蝗微孢子”即為雛幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0046]圖5為不同微孢子株系的紫外穩(wěn)定性檢測結果。其中，“雛蝗微孢子”即為雛蝗微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0047]圖6為蝗蟲防治劑的對蝗蟲的草地防治效果。
【具體實施方式】
[0048]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0049]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0050]下述實施例中所涉及的幾種現(xiàn)有微孢子如下:
[0051]幢蟲微孢子蟲東亞飛幢株系(Nosema 1custae),簡稱飛幢微孢子:從感病的東亞飛蝗體內(nèi)分離純化得到(王麗英，曹春.我國蝗蟲微孢子蟲超顯微結構與致病特性研究.草地學報，1994年01期)。[0052]家蠶微孢子蟲(Nosema bombycis):從感病的家蠶體內(nèi)分離純化得到(周成，潘國慶，萬永繼等.家蠶微孢子蟲N.bombycis分離純化方法的優(yōu)化.蠶學通訊，2002年01期)。
[0053]實施例1、雛幢微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301的獲得及鑒定
[0054]一、雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)株系 PA-201301 的獲得
[0055]將從青藏高原野外采集到的感病的雛蝗等進行解剖，檢測被微孢子感染情況，將腸道放入勻漿器內(nèi)勻漿，用醫(yī)用尼龍紗網(wǎng)(40-60目)過濾，用6000g-8000g的離心力離心12分鐘，得到不同微孢子株系。將其中一株分離自狹翅雛蝗的微孢子株系記為PA-201301株系O
[0056]二、雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)株系 PA-201301 的鑒定
[0057]在微孢子的系統(tǒng)分類上，孢子的形態(tài)、大小、病原性、極絲圈數(shù)和極絲角等特征是鑒別的主要特征，本發(fā)明的發(fā)明人比較測試了步驟一獲得的PA-201301株系與當前的不同種(株)微孢子(見表I)形態(tài)和大小、病原性、極絲圈數(shù)和極絲角等特性，
[0058]以確定步驟一獲得的PA-201301株系是否是一個新的株系。
[0059]1、孢子形態(tài)和大小的測定
[0060]使用通用的顯微測微計測定分析如下:
[0061]表I不同種(株)微孢子形態(tài)和大小
[0062]
【權利要求】
1.雛幢微孢子(Paranosemaacridophagus)PA_201301,它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的藏編號為CGMCC N0.7757。
2.權利要求1 所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757在如下任一中的應用: (I)防治蝗蟲； (II)制備蝗蟲防治劑。
3.—種蝗蟲防治劑，其特征在于:所述蝗蟲防治劑的活性成分為權利要求1所述的雛蟲皇微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.77570
4.根據(jù)權利要求3所述的蝗蟲防治劑，其特征在于:所述蝗蟲防治劑為如下(a)或(b): Ca)由權利要求1 所述的雛幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCCN0.7757、水和蝗蟲引誘劑，按照0.4±0.02億孢子:1±0.ImL: 30±5μ g的比例混合而成的蝗蟲防治劑I ; (b)由權利要求1 所述的雛幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCCN0.7757、粒徑為1.5-2mm的大麥麩皮和蝗蟲引誘劑，按照0.4 + 0.02億孢子:10±0.8g: 30±5μ g的比例混合而成的蝗蟲防治劑2。
5.根據(jù)權利要求4所述的`蝗蟲防治劑，其特征在于:所述蝗蟲引誘劑為環(huán)己醇。
6.制備權利要求3-5中任一所述蝗蟲防治劑的活性成分的方法，包括如下步驟: (1)將權利要求1所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCCN0.7757接種于蝗蟲，接種后正常飼喂，直至所述蝗蟲死亡； (2)從死亡蟲體中分離得到權利要求1所述雛幢微孢子(Paranosemaacridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757，即為權利要求3或4所述蝗蟲防治劑的活性成分。
7.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于:步驟(I)中，將權利要求1所述雛蝗微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757 接種于所述幢蟲的接種量為2X IO4孢子;或 所述蝗蟲為4-5齡期蝗蟲。
8.根據(jù)權利要求6或7所述的方法，其特征在于:步驟(I)中，所述飼喂的條件為:溫度26-35°C，相對濕度60-70%，光照時間12小時/天。
9.一種蝗蟲防治方法，為使用權利要求3-5中任一所述蝗蟲防治劑對蝗蟲進行防治。
10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于:在所述方法中，當采用所述蝗蟲防治劑I對蝗蟲進行防治時，所述蝗蟲防治劑I的用量為:每畝防治區(qū)施用10-12.5mL所述蝗蟲防治劑I ;或 在所述方法中，當采用所述蝗蟲防治劑2對蝗蟲進行防治時，所述蝗蟲防治劑2的用量為:每畝防治區(qū)施用100-125g所述蝗蟲防治劑2。
【文檔編號】A01P7/04GK103451100SQ201310381475
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月28日 優(yōu)先權日:2013年8月28日
【發(fā)明者】張英霞 申請人:河北晟普生物科技有限公司