一種黃芪試管苗培養(yǎng)的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種黃芪試管苗培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、腋芽的誘導(dǎo)、腋芽的增值、生根誘導(dǎo)，壯苗培養(yǎng)，寡糖素調(diào)控試管苗酶的活性及黃芪皂苷的含量等步驟，本發(fā)明方法所制備的黃芪試管苗含有較高含量的黃芪皂苷。本發(fā)明方法利用寡糖素對黃芪試管苗進行有目的的調(diào)控，可以在短期內(nèi)獲得大量次生代謝物含量高的黃芪試管苗，進行大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)，并能有效降低生產(chǎn)成本。
【專利說明】一種黃芪試管苗培養(yǎng)的快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及組培條件下黃芪幼苗的培養(yǎng)，尤其是寡糖素對黃芪試管苗中黃芪皂苷的調(diào)控。
【背景技術(shù)】
[0002]黃芪的藥用迄今已有2000多年的歷史，現(xiàn)代研究，黃芪含皂甙、蔗糖、多糖、多種氨基酸、葉酸及硒、鋅、銅等多種微量元素。具有降低血液黏稠度、減少血栓形成、降低血壓、保護心臟、雙向調(diào)節(jié)血糖、抗自由基損傷、抗衰老、抗缺氧、抗腫瘤、增強機體免疫力作用，可用來治療心臟病、高血壓、糖尿病等癥。黃芪還能擴張血管，改善皮膚血液循環(huán)和營養(yǎng)狀況，故對慢性潰瘍久不愈合者有效。其還能消除腎炎患者的蛋白尿，保護肝臟，防止肝糖原減少,主要成分含黃酮、皂甙類成分。
[0003]黃芪皂苷
【權(quán)利要求】
1.一種黃芪試管苗培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、腋芽的誘導(dǎo)、腋芽的增值、生根誘導(dǎo)，壯苗培養(yǎng)，寡糖素調(diào)控試管苗酶的活性及黃芪皂苷的含量，其主要步驟如下: (1)按照植物組織培養(yǎng)常規(guī)消毒方法對野外采取的黃芪帶芽莖段進行消毒處理，獲得無菌的外植體； (2)將步驟(I)獲得的無菌黃芪帶芽莖段接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進行腋芽誘導(dǎo)，誘導(dǎo)出來萌發(fā)的腋芽接種入增值培養(yǎng)基中進行腋芽增值，增值培養(yǎng)3-4代，獲得長勢良好帶有葉片的叢生芽； (3)將步驟(2)獲得的叢生芽接種到附加激素0.2-1mg/L NAA和0.5-1.5 mg/L TDZ的DKW培養(yǎng)基中進行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得完整的黃芪試管苗，將其接入MS培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)； (4)將步驟(3)獲得的生長強壯的黃芪試管苗接種入DKW+0.5mg/LNAA+lmg/LTDZ+寡糖素2-6mg/L，培養(yǎng)一段時間取黃芪試管苗葉片，然后60°C烘干保存干樣，微波提取黃芪皂苷，使用UV法檢測黃芪皂苷的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于:步驟(I)中所述無菌的黃芪外植體葉片和芽按照下述方法得到:取黃芪葉片和芽，洗衣粉浸泡4分鐘，流水沖洗50分鐘，經(jīng)次氯酸鈉消毒處理10-12分鐘，無菌水沖洗5遍，用吸水紙吸去無菌外植體表面的水分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法中，其特征在于:所述的培養(yǎng)條件為溫度25°C，濕度50%-70%，光強度20001x ;光期14 h暗期10h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法中，其特征在于:步驟(4)中所述的黃芪皂苷提取方法為超聲提取法，取黃芪干 樣lg，研磨成粉，過80目篩，加入85%乙醇，用超聲波提取lmin，每間隔2min超聲提取lmin,共提取30min,濾過,85°C水浴加熱回流Ih,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上真空濃縮,加25ml乙醇定容至25ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法中，其特征在于:步驟(4)中所述的黃芪皂苷檢測方法為UV法，提取液1.00 mL加入試管中，再分別加入1.00 mL 8%香草醛試劑，置于冰浴中緩緩加入10.0mL體積分?jǐn)?shù)為72%的硫酸，搖勻，放入70°C水浴中，保溫25 min，取出置于室溫冷卻，搖勻，立即于波長542 nm處測定吸光度，測定3次求平均值。
【文檔編號】A01H4/00GK103444538SQ201310410869
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月11日
【發(fā)明者】蘇劉花 申請人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司