一種富硒猴頭菌菌絲體液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種富硒猴頭菌菌絲體液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法。利用本發(fā)明生產(chǎn)的猴頭菌菌絲體在生長(zhǎng)過程中可以有效吸收硒元素，成為富硒猴頭菌菌絲體。富硒猴頭菌菌絲體既含有多糖、生物堿等活性物質(zhì)，同時(shí)，也含有微量的硒元素。所以，它在食品、藥品、保健品的添加劑開發(fā)與應(yīng)用方面，具有廣闊的前景。而且，獲得的富硒猴頭菌菌絲體粉末具有清香的香味，因此，它是一種理想的綠色食品添加劑的候選香料物質(zhì)。
【專利說明】一種富砸猴頭菌菌絲體液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種富硒猴頭菌菌絲體液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法，屬于微生物發(fā)酵工程【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]糖類在生物體內(nèi)的功能不僅僅局限于提供能量和參與細(xì)胞、組織的結(jié)構(gòu)組成，同時(shí)，它還具有多種多樣的生物學(xué)活性，在生物體的生命活動(dòng)中參與了細(xì)胞的各種代謝調(diào)節(jié)活動(dòng)。依據(jù)分子的組成結(jié)構(gòu)，糖類可以分為單糖、二糖、多糖和多糖衍生物。其中，多糖分子的生物活性已經(jīng)使其成為了人們關(guān)注的一個(gè)熱點(diǎn)，目前，從各種生物材料中提取具有一定生物活性的新的多糖成分的研究十分活躍，從而使對(duì)多糖類物質(zhì)的研究有了十分快速的發(fā)展。多糖一般指聚合度超過10以上的多聚糖類分子，其分子量通常在幾萬至幾百萬之間。多糖及其糖類復(fù)合分子具有極其重要的生物學(xué)功能，它與免疫功能的調(diào)節(jié)，細(xì)胞與細(xì)胞的識(shí)別，細(xì)胞間物質(zhì)的運(yùn)輸，癌癥的診斷與治療等都有著密切的關(guān)系。
[0003]構(gòu)成生命體的最基本物質(zhì)之一的多糖分子，以多種多樣的結(jié)構(gòu)形式存在于動(dòng)物細(xì)胞膜、植物和微生物細(xì)胞壁中，并且，發(fā)揮著重要的生理功能。隨著對(duì)多糖物質(zhì)的生物活性的深入研究，多糖物質(zhì)以其無毒、無副作用、富含營養(yǎng)、輔助醫(yī)療等功能保健品的有效添加成分，被廣大消費(fèi)者所重視。同時(shí)，隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究的不斷深入，多糖的生物活性越來越被人們所重視，尤其是它對(duì)人體免疫系統(tǒng)的雙向調(diào)節(jié)功能，更使它成為當(dāng)前藥物研究的“熱點(diǎn)”之一。目前，活性多糖的研究對(duì)象主要包括植物類、動(dòng)物類、真菌類、細(xì)菌類、地衣類、藻類、花粉類多糖等等，研究方法涉及各種化學(xué)方法以及儀器分析方法，研究范圍涉及多糖的分離純化、理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)分析、免疫學(xué)、毒理學(xué)、藥效學(xué)以及醫(yī)學(xué)臨床治療 應(yīng)用等，可以說是針對(duì)多糖物質(zhì)的研究已經(jīng)達(dá)到了種類繁多、研究深入、應(yīng)用廣泛的程度。開展多糖資源的開發(fā)、多糖分子結(jié)構(gòu)的分析、多糖藥理作用等方面的研究，對(duì)于進(jìn)一步豐富多糖物質(zhì)的物種資源、探索多糖分子的生物學(xué)活性都具有十分重要的意義，因而，多糖的研究已經(jīng)成為分子生物學(xué)、藥劑學(xué)等領(lǐng)域中的熱點(diǎn)研究?jī)?nèi)容之一。
[0004]此外，關(guān)于富硒產(chǎn)品的開發(fā)，目前在食品、藥品、保健品方面也是一個(gè)熱點(diǎn)科研方向。硒元素是人體多種酶的活性中心，它也是人體必需的多種微量元素之一。多項(xiàng)研究結(jié)果表明，硒的氨基酸化合物在人體的生命活動(dòng)中能夠起到抵御疾病、對(duì)抗衰老、增強(qiáng)人體免疫功能的作用。例如，硒元素是谷胱甘肽過氧化物酶家族和硫氧還蛋白還原酶家族的活性中心，由谷胱甘肽過氧化物酶家族和硫氧還蛋白還原酶家族與硒元素結(jié)合之后，具有較強(qiáng)的清除氧自由基、防止脂膜過氧化的功能，是機(jī)體抗氧化體系的重要組成部分。此外，硒元素對(duì)于機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫能力的維持具有一定的支撐作用，硒元素具有保護(hù)胸腺、維持機(jī)體淋巴細(xì)胞的活性以及刺激抗體產(chǎn)生的作用，從而實(shí)現(xiàn)了增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的功能。
[0005]猴頭菌屬于擔(dān)子菌門、猴頭菌科，是著名的藥食兩用真菌，其營養(yǎng)豐富，有“山珍猴頭、海味燕窩”的美稱。一般認(rèn)為，猴頭菌的主要活性物質(zhì)為多糖、多肽和脂肪族酰類物質(zhì)，其中猴頭多糖一直是研究的熱點(diǎn)。目前，研究較多的是猴頭菌的子實(shí)體一猴頭菇的營養(yǎng)價(jià)值與生物活性，對(duì)于猴頭菌菌絲體的相關(guān)研究較少。因此，在具有多種生物活性的猴頭菌菌絲體多糖分子中添加硒元素，既能夠發(fā)揮多糖類物質(zhì)的生物活性，同時(shí)也可以發(fā)揮硒的微量元素的調(diào)節(jié)功能。所以，在食品、藥品、保健品方面開發(fā)與加工富硒猴頭菌菌絲體相關(guān)產(chǎn)品，具有廣闊的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種富硒猴頭菌菌絲體的液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法。
[0007]上述富硒猴頭菌菌絲體的液體發(fā)酵生產(chǎn)方法，包括如下步驟:
[0008](I)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號(hào)為
5.0058猴頭菌菌種，保存在-80°C低溫冰箱中，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體之前，需要進(jìn)行菌種活化，主要是利用成分為去皮馬鈴薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸餾水至lOOOmL、pH值自然的PDA固體試管培養(yǎng)基在無菌操作臺(tái)中進(jìn)行接種，之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)96小時(shí)-144小時(shí),獲得活化后的猴頭菌菌種；
[0009](2)猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，在超凈工作臺(tái)中轉(zhuǎn)接于液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)，其中，每IL猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸餾水至1L，之后分裝滅菌使用，轉(zhuǎn)接過程主要是利用接種環(huán)在無菌條件下從裝有活化后的猴頭菌的試管中，挑取一環(huán)猴頭菌，接種于裝有50mL液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜進(jìn)行分口之后，置于25°C -28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天-20天，獲得猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物；
[0010](3)猴頭菌的液體 大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下從三角瓶中取出，置于潔凈的大型號(hào)培養(yǎng)皿中，利用經(jīng)過滅菌處理的手術(shù)刀將其截成大約IcmX Icm的菌膜塊,在無菌條件下將一個(gè)菌膜塊轉(zhuǎn)接于一個(gè)裝有IOOmL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的IL三角瓶中，其中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亞硒酸鈉 0.25g，加蒸餾水至 1L，之后分裝滅菌使用，三角瓶封口之后在25°C -28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天-20天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物；
[0011](4)猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵菌絲片的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾處理，收集發(fā)酵產(chǎn)物中的菌絲片，之后，利用蒸餾水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8層紗布過濾處理菌絲片，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時(shí)-48小時(shí)，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體；
[0012](5)猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉末。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
[0014]本發(fā)明涉及一種富硒猴頭菌菌絲體的液體發(fā)酵生產(chǎn)方法。由該方法生產(chǎn)獲得的富硒猴頭菌菌絲體可以進(jìn)行富硒猴頭菌菌絲體多糖類生物活性物質(zhì)的提取，這種富硒猴頭菌絲體多糖即可以充分發(fā)揮猴頭多糖的生物活性作用，又可以發(fā)揮硒元素的微量元素調(diào)節(jié)功能，因此，它可以成為保健品微量添加劑的主要成分。同時(shí)，獲得的富硒猴頭菌菌絲體粉末具有清香的香味，因此，它也是一種理想的食品添加劑的候選香料物質(zhì)。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
[0016]實(shí)施例1
[0017]一種富硒猴頭菌菌絲體的低溫、短時(shí)液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法。
[0018](I)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號(hào)為
5.0058猴頭菌菌種，保存在-80°C低溫冰箱中，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體之前，需要進(jìn)行菌種活化，主要是利用成分為去皮馬鈴薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸餾水至lOOOmL、pH值自然的PDA固體試管培養(yǎng)基在無菌操作臺(tái)中進(jìn)行接種，之后在25°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)120小時(shí)，獲得活化后的猴頭菌菌種；
[0019](2)猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，在超凈工作臺(tái)中轉(zhuǎn)接于液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)，其中，每IL猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸餾水至1L，之后分裝滅菌使用，轉(zhuǎn)接過程主要是利用接種環(huán)在無菌條件下從裝有活化后的猴頭菌的試管中，挑取一環(huán)猴頭菌，接種于裝有50mL液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜進(jìn)行分口之后，置于25°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天，獲得猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物；
[0020](3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下從三角瓶中取出，置于潔`凈的大型號(hào)培養(yǎng)皿中，利用經(jīng)過滅菌處理的手術(shù)刀將其截成大約IcmX Icm的菌膜塊,在無菌條件下將一個(gè)菌膜塊轉(zhuǎn)接于一個(gè)裝有IOOmL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的IL三角瓶中，其中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亞硒酸鈉 0.25g，加蒸餾水至 1L，之后分裝滅菌使用，三角瓶封口之后在25°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物；
[0021](4)猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵菌絲片的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾處理，收集發(fā)酵產(chǎn)物中的菌絲片，之后，利用蒸餾水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8層紗布過濾處理菌絲片，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時(shí)-48小時(shí)，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體；
[0022](5)猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉末。
[0023]在液體發(fā)酵溫度為25°C、發(fā)酵時(shí)間為15天的培養(yǎng)條件下，每IL液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基最終可以收集到富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體粉末7.8g。
[0024]實(shí)施例2 —種富硒猴頭菌菌絲體的高溫、短時(shí)天液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法。
[0025](I)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號(hào)為5.0058猴頭菌菌種，保存在-80°C低溫冰箱中，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體之前，需要進(jìn)行菌種活化，主要是利用成分為去皮馬鈴薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸餾水至lOOOmL、pH值自然的PDA固體試管培養(yǎng)基在無菌操作臺(tái)中進(jìn)行接種，之后在25°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)120小時(shí)，獲得活化后的猴頭菌菌種；
[0026](2)猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，在超凈工作臺(tái)中轉(zhuǎn)接于液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)，其中，每IL猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸餾水至1L，之后分裝滅菌使用，轉(zhuǎn)接過程主要是利用接種環(huán)在無菌條件下從裝有活化后的猴頭菌的試管中，挑取一環(huán)猴頭菌，接種于裝有50mL液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜進(jìn)行分口之后，置于28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天，獲得猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物；
[0027](3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下從三角瓶中取出，置于潔凈的大型號(hào)培養(yǎng)皿中，利用經(jīng)過滅菌處理的手術(shù)刀將其截成大約IcmX Icm的菌膜塊,在無菌條件下將一個(gè)菌膜塊轉(zhuǎn)接于一個(gè)裝有IOOmL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的IL三角瓶中，其中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亞硒酸鈉 0.25g，加蒸餾水至 1L，之后分裝滅菌使用，三角瓶封口之后在28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物；
[0028](4)猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵菌絲片的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾處理，收集發(fā)酵產(chǎn)物中的菌絲片，之后，利用蒸餾水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8層紗布過濾處理菌絲片，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時(shí)-48小時(shí)，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體；
[0029](5)猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉末。
[0030]在液體發(fā)酵溫度為28°C、發(fā)酵時(shí)間為15天的培養(yǎng)條件下，每IL液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基最終可以收集到富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體粉末9.lg。
[0031]實(shí)施例3 —種富硒猴頭菌菌絲體的低溫、長(zhǎng)時(shí)天液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法。
[0032](I)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號(hào)為
5.0058猴頭菌菌種，保存在-80°C低溫冰箱中，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體之前，需要進(jìn)行菌種活化，主要是利用成分為去皮馬鈴薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸餾水至lOOOmL、pH值自然的PDA固體試管培養(yǎng)基在無菌操作臺(tái)中進(jìn)行接種，之后在25°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)120小時(shí)，獲得活化后的猴頭菌菌種；
[0033](2)猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，在超凈工作臺(tái)中轉(zhuǎn)接于液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)，其中，每IL猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸餾水至1L，之后分裝滅菌使用，轉(zhuǎn)接過程主要是利用接種環(huán)在無菌條件下從裝有活化后的猴頭菌的試管中，挑取一環(huán)猴頭菌，接種于裝有50mL液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜進(jìn)行分口之后，置于25°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)20天，獲得猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物；
[0034](3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下從三角瓶中取出，置于潔凈的大型號(hào)培養(yǎng)皿中，利用經(jīng)過滅菌處理的手術(shù)刀將其截成大約IcmX Icm的菌膜塊,在無菌條件下將一個(gè)菌膜塊轉(zhuǎn)接于一個(gè)裝有IOOmL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的IL三角瓶中，其中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亞硒酸鈉 0.25g，加蒸餾水至 1L，之后分裝滅菌使用，三角瓶封口之后在25°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)20天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物；
[0035](4)猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵菌絲片的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾處理，收集發(fā)酵產(chǎn)物中的菌絲片，之后，利用蒸餾水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8層紗布過濾處理菌絲片，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時(shí)-48小時(shí)，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體；
[0036](5)猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉末。
[0037]在液體發(fā)酵溫度為25°C、發(fā)酵時(shí)間為20天的培養(yǎng)條件下，每IL液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基最終可以收集到富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體粉末10.2g。
[0038]實(shí)施例4 一種富 硒猴頭菌菌絲體的高溫、長(zhǎng)時(shí)液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法。
[0039](I)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號(hào)為
5.0058猴頭菌菌種，保存在-80°C低溫冰箱中，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體之前，需要進(jìn)行菌種活化，主要是利用成分為去皮馬鈴薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸餾水至lOOOmL、pH值自然的PDA固體試管培養(yǎng)基在無菌操作臺(tái)中進(jìn)行接種，之后在25°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)120小時(shí)，獲得活化后的猴頭菌菌種；
[0040](2)猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，在超凈工作臺(tái)中轉(zhuǎn)接于液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)，其中，每IL猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸餾水至1L，之后分裝滅菌使用，轉(zhuǎn)接過程主要是利用接種環(huán)在無菌條件下從裝有活化后的猴頭菌的試管中，挑取一環(huán)猴頭菌，接種于裝有50mL液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜進(jìn)行分口之后，置于28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)20天，獲得猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物；
[0041](3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下從三角瓶中取出，置于潔凈的大型號(hào)培養(yǎng)皿中，利用經(jīng)過滅菌處理的手術(shù)刀將其截成大約IcmX Icm的菌膜塊,在無菌條件下將一個(gè)菌膜塊轉(zhuǎn)接于一個(gè)裝有IOOmL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的IL三角瓶中，其中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亞硒酸鈉 0.25g，加蒸餾水至 1L，之后分裝滅菌使用，三角瓶封口之后在28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)20天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物；[0042](4)猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵菌絲片的收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾處理，收集發(fā)酵產(chǎn)物中的菌絲片，之后，利用蒸餾水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8層紗布過濾處理菌絲片，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時(shí)-48小時(shí)，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體；
[0043](5)猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉末。 [0044]在液體發(fā)酵溫度為28°C、發(fā)酵時(shí)間為20天的培養(yǎng)條件下，每IL液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基最終可以收集到富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體粉末11.5g。
【權(quán)利要求】
1.一種富硒猴頭菌菌絲體液體大規(guī)模發(fā)酵的培養(yǎng)基，其特征在于，按質(zhì)量體積比為:每升液體培養(yǎng)基含葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.25g，加蒸餾水至1L，分裝之后滅菌使用。
2.一種富硒猴頭菌菌絲體液體發(fā)酵的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)猴頭菌菌種的活化:將購買于中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號(hào)為5.0058猴頭菌菌種，保存在-80°C低溫冰箱中，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體之前，需要進(jìn)行菌種活化，主要是利用成分為去皮馬鈴薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸餾水至1000mUpH值自然的PDA固體試管培養(yǎng)基在無菌操作臺(tái)中進(jìn)行接種，之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)96小時(shí)-144小時(shí)，獲得活化后的猴頭菌菌種； (2)猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵:將步驟(1)中的活化后的猴頭菌菌種，在超凈工作臺(tái)中轉(zhuǎn)接于液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行猴頭菌的液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)，其中，每升猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸餾水至1L，之后分裝滅菌使用，轉(zhuǎn)接過程主要是利用接種環(huán)在無菌條件下從裝有活化后的猴頭菌的試管中，挑取一環(huán)猴頭菌，接種于裝有50mL液體初級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，利用封口膜進(jìn)行分口之后，置于25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天-20天，獲得猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物； (3)猴頭菌的液體大規(guī)模發(fā)酵；將步驟(2)獲得的猴頭菌液體初級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下從三角瓶中取出，置于潔凈的大型號(hào)培養(yǎng)皿中，利用經(jīng)過滅菌處理的手術(shù)刀將其截成大約IcmX Icm的菌膜塊，在無菌條件下將一個(gè)菌膜塊轉(zhuǎn)接于一個(gè)裝有IOOmL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基的IL三角瓶中，其中，IL猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亞硒酸鈉0.25g，加蒸餾水至1L，之后分裝滅菌使用，三角瓶封口之后在25°C _28°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)15天-20天，獲得富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物； (4)猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵菌絲片的`收集:將步驟(3)獲得的富硒猴頭菌液體大規(guī)模發(fā)酵產(chǎn)物，在無菌條件下利用8層紗布進(jìn)行過濾處理，收集發(fā)酵產(chǎn)物中的菌絲片，之后，利用蒸餾水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8層紗布過濾處理菌絲片，并且盡可能多的除掉水分，然后，將猴頭菌菌絲片置于35°C _40°C干燥培養(yǎng)箱中進(jìn)行干燥處理24小時(shí)-48小時(shí)，獲得干燥處理后的猴頭菌菌絲體； (5)猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉碎:將步驟(4)獲得的干燥處理后的猴頭菌菌絲體，利用潔凈的研缽進(jìn)行研磨處理，研磨到成為較細(xì)的粉末狀為止，獲得富硒猴頭菌液體發(fā)酵菌絲體的粉末。
【文檔編號(hào)】C05G1/00GK103755417SQ201310732795
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】杜志強(qiáng), 任大明 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古科技大學(xué)