一種誘導(dǎo)降香黃檀結(jié)香的生物方法
【專利摘要】本發(fā)明屬生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種誘導(dǎo)降香黃檀結(jié)香的生物方法，是選取已結(jié)香的成年降香黃檀樹上鉆取心材，粉碎后加入到ISP2液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，制得降香的內(nèi)生菌菌系培養(yǎng)液；選取6～7年未形成心材的降香黃檀樹，在樹干上鉆孔，孔深至木質(zhì)部，然后將內(nèi)生菌菌系培養(yǎng)液注入孔中，再對孔口進行密封處理，12個月后，從處理部位挖取紫紅色的木質(zhì)部即為降香。本發(fā)明工藝簡單，操作簡便，利用降香本身的內(nèi)生菌菌系來誘導(dǎo)降香，有效地縮短降香黃檀結(jié)香的生產(chǎn)周期，具有天然、無公害的優(yōu)點，是最安全最有前景的方法之一，適用于降香大規(guī)模標準化、商品化生產(chǎn)，有利于降香黃檀資源的保護、開發(fā)和利用，具有重要的經(jīng)濟、社會和生態(tài)效益。
【專利說明】一種誘導(dǎo)降香黃擅結(jié)香的生物方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種刺激降香黃檀結(jié)香的方法，具體是一種采用生物方法誘導(dǎo)降香黃檀結(jié)香的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]中藥降香是豆科植物降香黃檀(Dalbergia odorifera T.Chen)的樹干和根的干燥心材，降香主要有行氣止痛，活血、止血、止痢、止嘔等功效，是臨床常用制劑如復(fù)方降香膠囊、冠心丹參片乳結(jié)消散片等中成藥的主要原料，可用于治療跌打損傷、外傷出現(xiàn)、腕腹疼痛、胸痹刺痛等，具有較高的藥用價值和經(jīng)濟價值。近年來，隨著市場需求不斷增加，導(dǎo)致野生資源盜伐嚴重，資源面臨枯竭甚至滅絕的境地。為了緩解這一現(xiàn)狀，目前，華南各地均有人工大面積栽培，但降香黃檀自然生長條件下心材形成極為緩慢，一般生長7-8年后降香黃檀的主干才開始形成心材，20-30年才能積累到一定數(shù)量以供藥用，結(jié)香過程十分漫長，無法滿足社會的用藥需求，因此，如何充分利用降香黃檀樹加速其結(jié)香過程和增加產(chǎn)量，以緩解降香供需矛盾成為當前生產(chǎn)上亟待解決的關(guān)鍵問題。
[0003]目前，生產(chǎn)上主要靠降香黃檀自然生長形成藥材，文獻報道外界刺激產(chǎn)香的方法主要有物理砍傷、化學(xué)刺激、植物激素誘導(dǎo)和利用真菌誘導(dǎo)等方法。但利用降香黃檀自然形成的心材內(nèi)生菌菌系誘導(dǎo)降香黃檀快速形成心材的方法未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種誘導(dǎo)降香黃檀結(jié)香的生物方法，利用降香本身的內(nèi)生菌菌系來誘導(dǎo)降香，不僅生產(chǎn)周期縮短，而且具有天然、無公害的優(yōu)點，是最安全最有前景的方法之一，適用于降香大規(guī)模標準化、商品化生產(chǎn)，有利于降香黃檀資源的保護、開發(fā)和利用，具有重要的`經(jīng)濟、社會和生態(tài)效益。
[0005]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案:
[0006]一種誘導(dǎo)降香黃檀結(jié)香的生物方法，是選取已結(jié)香的成年降香黃檀樹上鉆取心材，經(jīng)表面消毒、粉碎后加入到ISP2液體培養(yǎng)基中，25~30°C振蕩培養(yǎng)5~10天，制得降香的內(nèi)生菌菌系培養(yǎng)液,其中按質(zhì)量體積比(g/mL)計降香黃檀樹心材與ISP2液體培養(yǎng)基的比例為1:10~50 ;選取6~7年未形成心材的降香黃檀樹,在離地面50cm高度以下的范圍內(nèi)于樹干上鉆孔，孔深至木質(zhì)部，然后將內(nèi)生菌菌系培養(yǎng)液注入孔中，再對孔口進行密封處理，12個月后，從處理部位挖取紫紅色的木質(zhì)部即為降香。
[0007]取部分紫紅色木質(zhì)部，曬干、粉碎粉末后用適量高純蒸餾水浸泡，用揮發(fā)油提取器按常規(guī)水蒸氣回流法蒸煮直至揮發(fā)油不再增加，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后得揮發(fā)油。揮發(fā)油為無色透明油狀物，具有特殊的清香味。按參照2010年《中華人民共和國藥典》揮發(fā)油測定法(附錄XD甲法)測定其揮發(fā)油的含量，通過氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)對化學(xué)成分進行鑒定，用歸一化法確定相對百分含量。
[0008]本發(fā)明工藝簡單，操作簡便，利用降香本身的內(nèi)生菌菌系來誘導(dǎo)降香，有效地縮短降香黃檀結(jié)香的生產(chǎn)周期，具有天然、無公害的優(yōu)點，是最安全最有前景的方法之一，適用于降香大規(guī)模標準化、商品化生產(chǎn)，有利于降香黃檀資源的保護、開發(fā)和利用，具有重要的經(jīng)濟、社會和生態(tài)效益。
【具體實施方式】
[0009]下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細描述。以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0010]實施例一
[0011]從一棵60年成年的降香黃檀樹上用生長錐鉆取5g心材，經(jīng)70%酒精表面消毒后，無菌條件下碾磨粉碎，放入200mL ISP2液體培養(yǎng)基中，28°C，180rpm振蕩培養(yǎng)I周后，制得降香的內(nèi)生菌菌系培養(yǎng)液。選取6-7年未形成心材的降香黃檀樹30株,在離地面50cm高度以下的范圍內(nèi)用直徑為Icm的鉆頭在樹干上由上向下鉆3個孔(傾斜45° )，孔深至木質(zhì)部，各個孔洞上下間的間隔為10~15cm，每個孔里注入ImL培養(yǎng)液，用保鮮膜和透明膠帶密封包裹，處理12個月后，砍倒樹木，從處理部位挖取紫紅色的木質(zhì)部。將得到的紫紅色物質(zhì)，曬干、精確稱重，重量為6090g，平均株產(chǎn)量:203g。
[0012]實施例二
[0013]從一棵40年成年的降香黃檀樹上用生長錐鉆取3g心材，經(jīng)70%酒精表面消毒后，無菌條件下碾磨粉碎，放入1OOmL ISP2液體培養(yǎng)基中，28°C，180rpm振蕩培養(yǎng)I周后，制得降香的內(nèi)生菌菌系培養(yǎng)液。選取6-7年未形成心材的降香黃檀樹30株,在離地面50cm高度以下的范圍內(nèi)用直徑為Icm的鉆頭在樹干上由上向下鉆3個孔(傾斜45° )，孔深至木質(zhì)部，各個孔洞上下間的間隔為10~15cm，每個孔里注入ImL培養(yǎng)液，用保鮮膜和透明膠帶密封包裹，處理12個月后，砍倒樹木，從處理部位挖取紫紅色的木質(zhì)部。將得到的紫紅色物質(zhì)，曬干、精確稱重，重量為6420g，平均株產(chǎn)量:214g。
[0014]實施例三
[0015]從一棵70年成年的降香黃檀樹上用生長錐鉆取2g心材，經(jīng)70%酒精表面消毒后，無菌條件下碾磨粉碎，放入50mL ISP2液體培養(yǎng)基中，28°C，180rpm振蕩培養(yǎng)I周后，制得降香的內(nèi)生菌菌系培養(yǎng)液。選取6-7年未形成心材的降香黃檀樹30株，在離地面50cm高度以下的范圍內(nèi)用直徑為Icm的鉆頭在樹干上由上向下鉆3個孔(傾斜45° )，孔深至木質(zhì)部，各個孔洞上下間的間隔為10~15cm，每個孔里注入ImL培養(yǎng)液，用保鮮膜和透明膠帶密封包裹，處理12個月后，砍倒樹木，從處理部位挖取紫紅色的木質(zhì)部。將得到的紫紅色物質(zhì)，曬干、精確稱重，重量為6270g，平均株產(chǎn)量:209g。
[0016]檢驗:
[0017]1、產(chǎn)物中揮發(fā)油含量
[0018]分別精確稱取實施例一、二、三的產(chǎn)物50g，粉碎后用適量高純蒸餾水浸泡5h，用揮發(fā)油提取器按常規(guī)水蒸氣回流法100°c蒸煮16h直至揮發(fā)油不再增加，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后得揮發(fā)油。揮發(fā)油為無色透明油狀物，具有特殊的清香味。按參照2010年《中華人民共和國藥典》揮發(fā)油測定法(附錄XD甲法)測定其揮發(fā)油的含量，結(jié)果見表1。
[0019]表1揮發(fā)油含量指標
【權(quán)利要求】
1.一種誘導(dǎo)降香黃檀結(jié)香的生物方法，其特征在于:選取已結(jié)香的成年降香黃檀樹上鉆取心材，經(jīng)表面消毒、粉碎后加入到ISP2液體培養(yǎng)基中，25~30°C振蕩培養(yǎng)5~10天，制得降香的內(nèi)生菌菌系培養(yǎng)液，其中按質(zhì)量體積比計降香黃檀樹心材與ISP2液體培養(yǎng)基的比例為1:10~50 ;選取6~7年未形成心材的降香黃檀樹,在離地面50cm高度以下的范圍內(nèi)于樹干上鉆孔，孔深至木質(zhì)部，然后將內(nèi)生菌菌系培養(yǎng)液注入孔中，再對孔口進行密封處理，12個月后，從處理部位挖取紫紅色的木質(zhì)部即為降香。
【文檔編號】A01G7/06GK103828617SQ201410104193
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月20日
【發(fā)明者】周雙清, 黃小龍, 周亞東, 盛小彬, 林旭俊, 李曉斌 申請人:海南省林業(yè)科學(xué)研究所, 海南大學(xué)