一種鐵皮石斛快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種鐵皮石斛快速繁殖方法，包括外植體清洗消毒；外植體接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS基本培養(yǎng)基、6-BA2.0mg/L-3.0mg/L、NAA0.2mg/L；不定芽莖段接種于原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基：B5基本培養(yǎng)基、NAA2.0mg/L、6-BA0.2mg/L、KT0.5mg/L-2.0mg/L；原球莖轉(zhuǎn)接于原球莖增殖培養(yǎng)基：1/2MS基本培養(yǎng)基、椰汁50g/L；原球莖轉(zhuǎn)接入分化培養(yǎng)基：1/2MS基本培養(yǎng)基、NAA0.2mg/L、馬鈴薯浸提物80-100g/L；將分化苗接種于壯苗生根培養(yǎng)基：1/2MS基本培養(yǎng)基、香蕉浸提物100-150g/L。本發(fā)明提高鐵皮石斛組培苗成活率，植株健壯。
【專利說明】一種鐵皮石斛快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是指一種鐵皮石斛快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛為蘭科多年附生草本植物，生長于海拔達(dá)1600米的山地半陰濕的巖石上。鐵皮石斛的藥效成分主要是石斛多糖、石斛堿和總氨基酸等，且含有鈣、鐵、鋅、硒、鈉等多種微量元素，具有獨(dú)特的藥用價(jià)值。中醫(yī)以其莖入藥，名為“石斛”，屬補(bǔ)益藥中的補(bǔ)陰藥，《神農(nóng)本草》列鐵皮石斛為上品，載有“主傷中、除痹、下氣、補(bǔ)五臟虛勞、贏瘦、強(qiáng)陰、久服厚腸胃”?！侗静菥V目》中評價(jià)鐵皮石斛“強(qiáng)陰益精。厚腸胃，補(bǔ)內(nèi)絕不足，平胃氣，長肌肉，益智除驚，輕身延年”。《道藏》記載，具有滋陰補(bǔ)虛，生津潤肺等功效。
[0003]植物組織培養(yǎng)(Tissue culture)是指利用植物細(xì)胞的全能性，從植物體內(nèi)取出部分器官、組織或細(xì)胞，模擬植物體內(nèi)的生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定培養(yǎng)條件下，使之生存、生長，維持其正常結(jié)構(gòu)和功能的方法。
[0004]然而，現(xiàn)有技術(shù)中，多數(shù)鐵皮石斛組培苗莖桿偏細(xì)，甚至多為“牙簽苗”，根系不夠發(fā)達(dá)，葉片未展開，導(dǎo)致后期馴化苗成活率偏低，育苗時(shí)間偏長，鮮條產(chǎn)量較低，生產(chǎn)成本較聞。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種鐵皮石斛快速繁殖方法，以提高鐵皮石斛組培苗成活率，且植株健壯。
[0006]為達(dá)成上述目的，本發(fā)明的解決方案為:
[0007]一種鐵皮石斛快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0008]一，選取外植體，對外植體進(jìn)行清洗、消毒；
[0009]二，將外植體接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)不定芽培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配比為:MS 基本培養(yǎng)基、6-BA(6 —芐基嘌呤)2.0mg/L-3.0mg/L、NAA (萘乙酸)0.2mg/L, pH 值 5.4 ;
[0010]三，將步驟二中所得不定芽莖段接種于原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:B5基本培養(yǎng)基、NAA2.0mg/L,6-BA0.2mg/L、KT (激動(dòng)素)0.5mg/L-2.0mg/L, pH 值 5.4 ;
[0011]四，將步驟三中所得原球莖轉(zhuǎn)接于原球莖增殖培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:1/2MS基本培養(yǎng)基、椰汁50g/L，pH值5.4 ;培養(yǎng)條件為:光強(qiáng)20001x、光照時(shí)間12h/d，搖床轉(zhuǎn)速為120r/min,每21天轉(zhuǎn)接一次；
[0012]五，將步驟四中所得原球莖轉(zhuǎn)接入分化培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:1/2MS基本培養(yǎng)基、NAA0.2mg/L、馬鈴薯浸提物 80_100g/L，pH 值 5.4 ;
[0013]六，將步驟五中所得分化苗接種于壯苗生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:1/2MS基本培養(yǎng)基、香蕉浸提物100_150g/L, pH值5.4 ;置于日光燈下培養(yǎng)30天后，置于培養(yǎng)架頂層，光照強(qiáng)度8000Lux-10000Lux，光照時(shí)間為12h/d，光源為日光，溫度為26 ± 2 °C，培養(yǎng)60天后出苗；[0014]步驟二、三及五的培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000-3000Lux，光照時(shí)間12h/d (小時(shí)/天)，光源為日光燈，溫度為26±2°C。
[0015]所述步驟一中，清洗、消毒步驟為:先用無磷洗衣粉水溶液浸泡15分鐘，然后用自來水沖洗30分鐘；用75%的酒精浸泡15秒，無菌水沖洗I次，再用0.1 % HgCl2溶液消毒8分鐘，無菌水沖洗5次。
[0016]所述步驟一中，選取表皮鐵銹色、莖節(jié)明顯、通體透明、纖維少的個(gè)體作為外植體。
[0017]所述步驟一中，外植體清洗、消毒后，吸干水分切為1.0-1.5cm的莖段，接入誘導(dǎo)
培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。
[0018]采用上述方案后，本發(fā)明解決了鐵皮石斛組培苗莖桿偏細(xì)，根系不夠發(fā)達(dá)，葉片未展開，成活率偏低等技術(shù)問題，實(shí)現(xiàn)鐵皮石斛瓶苗葉片變厚，充分展開，葉色濃綠，莖桿粗壯，根系發(fā)達(dá)，成活率達(dá)98%以上，在整個(gè)繁殖流程中不添加激素，極大限度上減少了激素的使用，進(jìn)一步保障了作為藥用植物的鐵皮石斛的安全性。【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例
[0020]本發(fā)明揭示一種鐵皮石斛快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0021]一，外植體材料的選取及無菌材料的獲得
[0022]選取表皮鐵銹色、莖節(jié)明顯、通體較為透明、纖維較少的個(gè)體作為外植體。先對外植體進(jìn)行清洗、消毒，具體步驟如下:先用無磷洗衣粉水溶液浸泡15分鐘，然后用自來水流水沖洗30分鐘；用75%的酒精浸泡15秒，無菌水沖洗I次，再用0.1 % HgCl2溶液消毒8分鐘，無菌水沖洗5次。
[0023]上述外植體進(jìn)行清洗、消毒后，吸干水分切為1.0~1.5cm的莖段，然后接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。
[0024]二，不定芽的誘導(dǎo)
[0025]將步驟一中所得外植體接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配比為=MS 基本培養(yǎng)基、6-BA(6 一芐基嘌呤)2.0mg/L-3.0mg/L、NAA (萘乙酸)0.2mg/L, pH值5.4，培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度為2000-3000LUX，光照時(shí)間為12h/d，光源為日光燈，溫度為26±2°C。外植體在該培養(yǎng)基中約3個(gè)月誘導(dǎo)出不定芽。
[0026]三，原球莖的誘導(dǎo)
[0027]將步驟二中所得不定芽莖段接種于原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:B5基本培養(yǎng)基、NAA2.0mg/L,6-BA0.2mg/L、KT (激動(dòng)素)0.5mg/L-2.0mg/L, pH 值 5.4，培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度為2000-3000LUX，光照時(shí)間為12h/d，光源為日光燈，溫度為26±2°C。莖段經(jīng)過3個(gè)月的培養(yǎng)，兩端誘導(dǎo)出嫩綠色、顆粒飽滿的原球莖。
[0028]四，原球莖的增殖
[0029]將步驟三中所得原球莖轉(zhuǎn)接于原球莖增殖培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:1/2MS基本培養(yǎng)基(取大量元素的1/2，其它微量元素保持不變，該階段培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基)、椰汁50g/L，pH值5.4。該階段培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000LUX、光照時(shí)間12h/d，搖床轉(zhuǎn)速為120r/min,每21天轉(zhuǎn)接一次。
[0030]五，原球莖的分化[0031]將步驟四中所得原球莖轉(zhuǎn)接入分化培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:1/2MS基本培養(yǎng)基(取大量元素的1/2，其它微量元素保持不變)、NAA0.2mg/L、馬鈴薯浸提物80_100g/L，pH值5.4。培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度為2000-3000LUX，光照時(shí)間為12h/d，光源為日光燈，溫度為26±2°C。約2.5個(gè)月后，大約75%原球莖分化，得到鐵皮石斛分化苗。
[0032]六，壯苗生根及煉苗
[0033]將步驟五中所得分化苗接種于壯苗生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:1/2MS基本培養(yǎng)基(取大量元素的1/2，其它微量元素保持不變)、香蕉浸提物100-150g/L，pH值5.4。鐵皮石斛分化苗于該培養(yǎng)基中，在日光燈條件下，光照強(qiáng)度為2000-3000LUX，光照時(shí)間為12h/d，光源為日光燈，溫度為26±2°C，培養(yǎng)30天后，即可置于培養(yǎng)架頂層，接受日光照射，光照強(qiáng)度8000Lux-10000Lux，光照時(shí)間為12h/d，光源為日光，溫度為26±2°C，培養(yǎng)60天后，即可出苗。
[0034]MS培養(yǎng)基的成分按常規(guī)為:
【權(quán)利要求】
1.一種鐵皮石斛快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟: 一，選取外植體，對外植體進(jìn)行清洗、消毒； 二，將外植體接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)不定芽培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配比為:MS基本培養(yǎng)基、6-BA 2.0mg/L-3.0mg/L、NAA0.2mg/L, pH 值 5.4 ; 三，將步驟二中所得不定芽莖段接種于原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:Β5基本培養(yǎng)基、ΝΑΑ2.0mg/L,6-ΒΑ0.2mg/L、KT0.5mg/L_2.0mg/L, pH 值 5.4 ; 四，將步驟三中所得原球莖轉(zhuǎn)接于原球莖增殖培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:1/2MS基本培養(yǎng)基、椰汁50g/L，pH值5.4 ;培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度2000LUX、光照時(shí)間12h/d，搖床轉(zhuǎn)速為120r/min,每21天轉(zhuǎn)接一次； 五，將步驟四中所得原球莖轉(zhuǎn)接入分化培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:1/2 MS基本培養(yǎng)基、NAA0.2mg/L、馬鈴薯浸提物 80_100g/L，pH 值 5.4 ; 六，將步驟五中所得分化苗接種于壯苗生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基配比為:1/2MS基本培養(yǎng)基、香蕉浸提物100_150g/L, pH值5.4 ;置于日光燈下培養(yǎng)30天后,置于培養(yǎng)架頂層,光照強(qiáng)度8000 Lux -10000 Lux，光照時(shí)間為12h/d，光源為日光，溫度為26±2°C，培養(yǎng)60天后出苗； 步驟二、三及五的培養(yǎng)條件都為:光照強(qiáng)度2000-3000Lux，光照時(shí)間12h/d，光源為日光燈，溫度為26±2°C。
2.如權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟一中，清洗、消毒步驟為:先用無磷洗衣粉水溶液浸泡15分鐘,然后用自來水沖洗30分鐘；用75%的酒精浸泡15秒，無菌水沖洗I次，再用0.1 % HgCl2溶液消毒8分鐘，無菌水沖洗5次。
3.如權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟一中，選取表皮鐵銹色、莖節(jié)明顯 、通體透明、纖維少的個(gè)體作為外植體。
4.如權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟一中，外植體清洗、消毒后，吸干水分切為1.0-1.5cm的莖段，接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。
【文檔編號】A01H4/00GK103947549SQ201410153939
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月17日
【發(fā)明者】李璐, 林江波, 陳德宗, 潘菲 申請人:廈門涌泉科技有限公司