一種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，將流蘇石斛的種子播種于誘導培養(yǎng)基中誘導發(fā)芽，然后將流蘇石斛小芽轉(zhuǎn)先后移至繼代培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，得到流蘇石斛生根組培苗，即可移栽至大棚中進行煉苗。本發(fā)明的組織培養(yǎng)方法簡便，步驟簡單，操作方便，所得流蘇石斛生根組培苗植株健壯，生長能力強，適于工廠化生產(chǎn)。
【專利說明】一種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物快速繁殖方法，特別是一種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方 法。

【背景技術】
[0002] 石斛為蘭科植物金欽石斛Dendrobium nobile Lindl?、鐵皮石斛Dendrobium candidum Wall, ex Lindl?或馬鞭石斛Dendrobium fimbriatum Hook. var. oculatum Hook. 及其近似種的新鮮或干燥莖。在我國傳統(tǒng)醫(yī)學中，石斛為常用珍貴藥材，始載于《神農(nóng)本草 經(jīng)》，列為上品。
[0003] 流蘇石斛（Dendrobium fimbriatum Hook. var. oculatum Hook.)系蘭科石斛屬植 物，莖粗壯，斜立或下垂，質(zhì)地硬，圓柱形或有時基部上方稍呈紡錘形，葉二列，革質(zhì)，長圓形 或長圓狀披針形，總狀花序長5?15厘米，疏生6?12朵花，花金黃色，質(zhì)地薄，開展，稍具 香氣，花期4?6月，產(chǎn)廣西南部至西北部（天峨、凌云、田林、龍州、天等、隆林、東蘭、武鳴、 靖西、南丹）、貴州南部至西南部（羅甸、興義、獨山）、云南東南部至西南部（西疇、蒙自、石 屏、富民、思茅、勐海、滄源、鎮(zhèn)康），海拔600?1700米，生于密林中樹干上或山谷陰濕巖石 上，分布于印度、尼泊爾、錫金、不丹、緬甸、泰國、越南?！吨袊幍洹贩Q馬鞭石斛，具有益胃生 津，生津止渴。用于陰傷津虧，口干煩渴，食少干嘔，病后虛熱，目暗不明?，F(xiàn)代研究表明，流 蘇石斛中發(fā)現(xiàn)的毛蘭素、毛蘭菲、鼓槌菲等化學成分具有抗腫瘤作用。
[0004] 由于蘭科植物種子在野外很難發(fā)芽，自然繁殖主要是靠分株繁殖，繁殖率地下，自 然更新困難，隨著社會的發(fā)展，人民對美的追求以及長期以來藥用的需求，造成野生資源的 嚴重破壞，現(xiàn)野外已經(jīng)很少能見到美麗的流蘇石斛。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，直接取流蘇石斛 的種子進行組織培養(yǎng)，有效縮短流蘇石斛的培養(yǎng)周期，減小因多次繼代培養(yǎng)造成的變異概 率，采用組織培養(yǎng)所得的流蘇石斛組培苗，植株健壯，生長能力強，適于工廠化生產(chǎn)，以解決 流蘇石斛人工種植的種苗問題。
[0006] 本發(fā)明提供的技術方案是：
[0007] -種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，取流蘇石斛種子作為材料進行離體誘 導培養(yǎng)，獲取流蘇石斛的組織培養(yǎng)苗。
[0008] 優(yōu)選的是，所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法中，包括以下步驟：
[0009] 步驟一、將預處理的流蘇石斛種子播種于誘導培養(yǎng)基上，培養(yǎng)7-15天，得到流蘇 石斛小芽，其中，所述誘導培養(yǎng)基為：以MS-H為基本培養(yǎng)基，加入0. 5-3. Omg/L吲哚乙酸、 I. 0-5. Omg/L萘乙酸、0? 1-1. Omg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3. 0-5. Og/L瓊脂，并調(diào)整誘導 培養(yǎng)基的pH值為5. 6-6.0 ;
[0010] 步驟二、將流蘇石斛小芽置于繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30-40天，獲得流蘇石斛組 培分化苗，其中，所述繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入0. 2. 0-2. Omg/L激動素、 2. 0-4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤、I. 0-4. Omg/L 萘乙酸、0? 5-3. Omg/L 吲哚丙酸、0? 1-2. Omg/L 噻 苯隆、25-40g/L蔗糖及3. 0-5. Og/L瓊脂，并調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為5. 6-6. 0 ;
[0011] 步驟三、將流蘇石斛組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30-40天后，轉(zhuǎn)移至自 然光下照射培養(yǎng)40-50天，獲得流蘇石斛生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：以1/2MS 為基本培養(yǎng)基，加入5-20%香蕉，0? 1-4. Omg/L萘乙酸、2. 0-4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤、2-5% 蔗糖及0. 2-0. 5%活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 2 ;
[0012] 步驟四、將流蘇石斛生根組培苗移栽至苗床上，待流蘇石斛小苗生長穩(wěn)定，即可移 栽至大棚。
[0013] 優(yōu)選的是，所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法中，步驟一所述流蘇石斛 種子的預處理為，先將流蘇石斛碩果用80-85%乙醇溶液浸泡20-40秒，升汞消毒10-20分 鐘，清洗干凈后切開流蘇石斛的碩果，得到預處理的流蘇石斛種子。
[0014] 優(yōu)選的是，所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法中，步驟四所述的苗床基 質(zhì)為：20-30樹皮、10-20雜木、20-30蛭石及10-15珍珠巖。
[0015] 優(yōu)選的是，所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法中，步驟四中將流蘇石斛 生根組培苗移栽至苗床之前，先將流蘇石斛生根組培苗根部的培養(yǎng)基清洗干凈，晾干水汽， 在移栽至苗床上。
[0016] 優(yōu)選的是，所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法中，所述步驟一至 步驟三中，流蘇石斛于培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件均為：培養(yǎng)溫度為28-3 2 °C，光照強度為 2500-30001ux，光照時間為 13-15h/d。
[0017] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用現(xiàn)代生物技術，克隆流蘇石斛，規(guī)?；a(chǎn)種 苗，解決流蘇石斛人工種植的種苗問題，為社會的發(fā)展以及流蘇野生植物資源的保護做出 貝獻。
[0018] 本發(fā)明中流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，種子誘導的發(fā)芽率達96%，經(jīng)過 繼代培養(yǎng)后的成苗率95%，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中，流蘇石斛的生根率為90%，最后移入大 棚煉苗的成活率為94%，大大提高了流蘇石斛的組織培養(yǎng)效率；盡管嫩芽和種子都可以作 為組培的原始材料，但是石斛嫩芽是從外面的植株上取的部分材料，由于一株石斛只有一 個芽，用莖段也只能獲得幾個芽，每個芽采下來以后消毒滅菌，最后獲得的無菌材料大概只 有40%左右，然后利用無菌材料才能繼續(xù)增殖、誘導原球莖、擴繁，要經(jīng)過非常長的時間，一 般需要經(jīng)過10-20代才能獲得足夠多的材料，然而組培過程中繼代代數(shù)越長，成本升高，玻 璃化變異加大，因此此時的材料已經(jīng)沒有很大的價值，隨著繼代的增加，材料退化也是很嚴 重的問題。本發(fā)明中使用流蘇石斛的種子進行培養(yǎng)，種子發(fā)芽到最后出苗所需時間遠遠短 于嫩芽繼代，幾乎是嫩芽的零頭，這在很大程度上節(jié)約了資金，節(jié)約了能源，提高了競爭力， 利用種子所需僅200多天可以出苗，而利用嫩芽做到出苗所需的時間將是1000多天，因此 從市場角度考慮也遠遠優(yōu)于嫩芽誘導苗。相對嫩芽而言組織培養(yǎng)而言，本發(fā)明的利用流蘇 石斛的種子作為組培材料成本低，推廣容易，經(jīng)濟性好，技術先進，并且具有很高的市場價 值，讓利種植，有利于擴大推廣，對石斛資源的保護提供了新的思路。

【具體實施方式】
[0019] 下面對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明書文字能夠據(jù) 以實施。
[0020] -種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，取流蘇石斛種子作為材料進行離體誘 導培養(yǎng)，獲取流蘇石斛的組織培養(yǎng)苗。
[0021] 所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法中，包括以下步驟：
[0022] 步驟一、先將流蘇石斛碩果用80-85%乙醇溶液浸泡20-40秒，升汞消毒10-20分 鐘，清洗干凈后切開流蘇石斛的碩果，得到預處理的流蘇石斛種子，將預處理的流蘇石斛 種子播種于誘導培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為28-32°C，光照強度為2500-30001u X，光照時間 為13-15h/d的條件下培養(yǎng)7-15天，得到流蘇石斛小芽，其中，所述誘導培養(yǎng)基為：以MS-H 為基本培養(yǎng)基，加入〇? 5-3. Omg/L吲哚乙酸、I. 0-5. Omg/L萘乙酸、0? 1-1. Omg/L噻苯隆、 25-40g/L蔗糖及3. 0-5. Og/L瓊脂，并調(diào)整誘導培養(yǎng)基的pH值為5. 6-6. 0 ;其中，誘導培養(yǎng) 基中吲哚乙酸為一種植物體內(nèi)普遍存在的內(nèi)源生長素，促進流蘇石斛種子快速萌發(fā)小芽； 蔗糖為能源物質(zhì)，為植物組織培養(yǎng)提供碳源和能源，還能很好的維持培養(yǎng)基內(nèi)的低滲環(huán)境， 同時在一定程度上還能減少微生物的污染，提高流蘇石斛的無菌環(huán)境質(zhì)量；采用的誘導培 養(yǎng)基大大提高了流蘇石斛的愈傷組織分化能力，使得流蘇石斛小芽的出芽率高達92%。
[0023] 步驟二、將流蘇石斛小芽置于繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28_32°C，光照強度為 2500-30001ux，光照時間為13-15h/d的條件下培養(yǎng)30-40天，獲得2-4cm高度整齊的流蘇 石斛組培分化苗，其中，所述繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入0. 2. 0-2. Omg/L激動 素、2. 0-4. 0mg/L 6-芐氨基嘌呤、L 0-4. 0mg/L 萘乙酸、0? 5-3. 0mg/L 吲哚丙酸、0? 1-2. Omg/ L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3. 0-5. 0g/L瓊脂，并調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為5. 6-6. 0 ;其中， 繼代培養(yǎng)基中，激動素為6-糠基腺嘌呤，是植物細胞分裂素，有效促進流蘇石斛的細胞分 裂；6-芐氨基嘌呤有效加快植物細胞生長，促進植物生長發(fā)育，誘導流蘇石斛小芽的分化， 促進側芽萌發(fā)生長；萘乙酸為廣譜型植物生長調(diào)節(jié)劑，能有效促進細胞分裂與擴大，誘導形 成不定根；蔗糖為能源物質(zhì)，為植物組織培養(yǎng)提供碳源和能源，還能很好的維持培養(yǎng)基內(nèi)的 低滲環(huán)境；流蘇石斛組培分化苗的成苗率為98%。
[0024] 步驟三、將流蘇石斛組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28_32°C，光 照強度為2500-30001UX，光照時間為13-15h/d的條件下培養(yǎng)30-40天后，轉(zhuǎn)移至自然光下 照射培養(yǎng)40-50天，獲得流蘇石斛生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本 培養(yǎng)基，加入5-20%香蕉，0? 1-4. 0mg/L萘乙酸、2. 0-4. 0mg/L 6-芐氨基嘌呤、2-5%蔗糖及 0. 2-0. 5%活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 2 ;其中，生根培養(yǎng)基中加入打碎的 香蕉，促進流蘇石斛組培分化苗快速生根，為流蘇石斛組培分化苗提供所需營養(yǎng)物質(zhì)，萘乙 酸為廣譜型植物生長調(diào)節(jié)劑，能有效促進細胞分裂與擴大，誘導形成不定根，蔗糖為能源物 質(zhì)，提供能量，活性炭的加入有助于吸附一些有害的代謝物質(zhì)，同時活性炭使得生根培養(yǎng)基 變黑，可模仿黑暗條件，有利于組培分化苗的生根；流蘇石斛組培分化苗生根后放在自然光 下照射，為組培分化苗提供與戶外環(huán)境相似的培養(yǎng)環(huán)境，提高了流蘇石斛組培分化苗在后 期煉苗過程中的成活率。
[0025] 步驟四、將流蘇石斛生根組培苗根部的培養(yǎng)基用清洗干凈，晾干水汽，再將流蘇石 斛生根組培苗移栽至苗床上，其中苗床上設置的基質(zhì)為：20-30樹皮、10-20雜木、20-30蛭 石及10-15珍珠巖，培養(yǎng)30-40天，流蘇石斛生根組培苗生長穩(wěn)定后即可移栽至大棚中，大 棚栽培時要適當遮陰，控制遮陰度為75%，間隔澆水，溫度為28°C，超過28°C要水簾降溫， 防止根腐病發(fā)生。
[0026] 實施例1
[0027] -種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，取流蘇石斛種子作為材料進行離體誘 導培養(yǎng)，獲取流蘇石斛的組織培養(yǎng)苗。
[0028] 所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法中，包括以下步驟：
[0029] 步驟一、先將流蘇石斛碩果用80%乙醇溶液浸泡20秒，升汞消毒10分鐘，清洗干 凈后切開流蘇石斛的碩果，得到預處理的流蘇石斛種子，將預處理的流蘇石斛種子播種于 誘導培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為28°C，光照強度為26001u X，光照時間為15h/d的條件下培養(yǎng) 10天，得到流蘇石斛小芽，其中，所述誘導培養(yǎng)基為：以MS-H為基本培養(yǎng)基，加入2. Omg/L 吲哚乙酸、2. Omg/L萘乙酸、0? 5mg/L噻苯隆、25g/L蔗糖及3. Og/L瓊脂，并調(diào)整誘導培養(yǎng)基 的pH值為5.9 ;
[0030] 步驟二、將流蘇石斛小芽置于繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28°C，光照強度為 26001UX，光照時間為15h/d的條件下培養(yǎng)40天，獲得3cm高度整齊的流蘇石斛組培分化 苗，其中，所述繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入0. 5mg/L激動素、2. Omg/L 6-芐氨 基嘌呤、I. Omg/L萘乙酸、2. Omg/L吲哚丙酸、0? 5mg/L噻苯隆、40g/L蔗糖及4. Og/L瓊脂，并 調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為5. 9 ;
[0031] 步驟三、將流蘇石斛組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28°C，光照強 度為26001UX，光照時間為15h/d的條件下培養(yǎng)35天后，轉(zhuǎn)移至自然光下照射培養(yǎng)50天，獲 得流蘇石斛生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入10%香蕉， I. 0mg/L萘乙酸、2. 0mg/L 6-芐氨基嘌呤、3%蔗糖及0? 2%活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH 值為5. 9 ;
[0032] 步驟四、將流蘇石斛生根組培苗根部的培養(yǎng)基用清洗干凈，晾干水汽，再將流蘇石 斛生根組培苗移栽至苗床上，其中苗床上設置的基質(zhì)為：20g樹皮、15g雜木、25g蛭石及15g 珍珠巖，培養(yǎng)40天，流蘇石斛生根組培苗生長穩(wěn)定后即可移栽至大棚中，大棚栽培時要適 當遮陰，控制遮陰度為75%，間隔澆水，溫度為28°C，超過28°C要水簾降溫，防止根腐病發(fā) 生。
[0033] 實施例2
[0034] 一種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，取流蘇石斛種子作為材料進行離體誘 導培養(yǎng)，獲取流蘇石斛的組織培養(yǎng)苗。
[0035] 所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法中，包括以下步驟：
[0036] 步驟一、先將流蘇石斛碩果用80%乙醇溶液浸泡30秒，升汞消毒20分鐘，清洗干 凈后切開流蘇石斛的碩果，得到預處理的流蘇石斛種子，將預處理的流蘇石斛種子播種于 誘導培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為30°C，光照強度為28001UX，光照時間為14h/d的條件下培養(yǎng) 15天，得到流蘇石斛小芽，其中，所述誘導培養(yǎng)基為：以MS-H為基本培養(yǎng)基，加入I. 0mg/L 吲哚乙酸、3. 0mg/L萘乙酸、0? 8mg/L噻苯隆、30g/L蔗糖及4. 0g/L瓊脂，并調(diào)整誘導培養(yǎng)基 的pH值為6. 0 ;
[0037] 步驟二、將流蘇石斛小芽置于繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為30°C，光照強度為 28001UX，光照時間為14h/d的條件下培養(yǎng)30天，獲得2-4cm高度整齊的流蘇石斛組培分化 苗，其中，所述繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入2. Omg/L激動素、4. Omg/L 6-芐氨 基嘌呤、3. Omg/L萘乙酸、2. Omg/L吲哚丙酸、L Omg/L噻苯隆、30g/L蔗糖及4. Og/L瓊脂，并 調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為6. 0 ;
[0038] 步驟三、將流蘇石斛組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為30°C，光照強 度為28001UX，光照時間為14h/d的條件下培養(yǎng)35天后，轉(zhuǎn)移至自然光下照射培養(yǎng)45天，獲 得流蘇石斛生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入15%香蕉， 2. Omg/L萘乙酸、3. Omg/L 6-芐氨基嘌呤、2%蔗糖及0? 5%活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH 值為6. 0 ;
[0039] 步驟四、將流蘇石斛生根組培苗根部的培養(yǎng)基用清洗干凈，晾干水汽，再將流蘇石 斛生根組培苗移栽至苗床上，其中苗床上設置的基質(zhì)為：30g樹皮、15g雜木、20g蛭石及IOg 珍珠巖，培養(yǎng)30天，流蘇石斛生根組培苗生長穩(wěn)定后即可移栽至大棚中，大棚栽培時要適 當遮陰，控制遮陰度為75%，間隔澆水，溫度為28°C，超過28°C要水簾降溫，防止根腐病發(fā) 生。
[0040] 實施例3
[0041] 一種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，取流蘇石斛種子作為材料進行離體誘 導培養(yǎng)，獲取流蘇石斛的組織培養(yǎng)苗。
[0042] 所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法中，包括以下步驟：
[0043] 步驟一、先將流蘇石斛碩果用85%乙醇溶液浸泡40秒，升汞消毒20分鐘，清洗干 凈后切開流蘇石斛的碩果，得到預處理的流蘇石斛種子，將預處理的流蘇石斛種子播種于 誘導培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為32°C，光照強度為30001u X，光照時間為13h/d的條件下培養(yǎng) 14天，得到流蘇石斛小芽，其中，所述誘導培養(yǎng)基為：以MS-H為基本培養(yǎng)基，加入3. 0mg/L 吲哚乙酸、4. 0mg/L萘乙酸、I. 0mg/L噻苯隆、40g/L蔗糖及5. 0g/L瓊脂，并調(diào)整誘導培養(yǎng)基 的pH值為6. 0 ;
[0044] 步驟二、將流蘇石斛小芽置于繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為32°C，光照強度為 30001UX，光照時間為13h/d的條件下培養(yǎng)38天，獲得2-4cm高度整齊的流蘇石斛組培分化 苗，其中，所述繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入I. 0mg/L激動素、2. 0mg/L 6-芐氨 基嘌呤、I. Omg/L萘乙酸、L Omg/L吲哚丙酸、0? 5mg/L噻苯隆、25g/L蔗糖及3. Og/L瓊脂，并 調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為6. 0 ;
[0045] 步驟三、將流蘇石斛組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為32°C，光照強 度為30001UX，光照時間為13h/d的條件下培養(yǎng)30天后，轉(zhuǎn)移至自然光下照射培養(yǎng)40天，獲 得流蘇石斛生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入20%香蕉， 3. 0mg/L萘乙酸、4. 0mg/L 6-芐氨基嘌呤、2 %蔗糖及0? 2 %活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH 值為6. 0 ;
[0046] 步驟四、將流蘇石斛生根組培苗根部的培養(yǎng)基用清洗干凈，晾干水汽，再將流蘇石 斛生根組培苗移栽至苗床上，其中苗床上設置的基質(zhì)為：20g樹皮、15g雜木、20g蛭石及IOg 珍珠巖，培養(yǎng)40天，流蘇石斛生根組培苗生長穩(wěn)定后即可移栽至大棚中，大棚栽培時要適 當遮陰，控制遮陰度為75%，間隔澆水，溫度為28°C，超過28°C要水簾降溫，防止根腐病發(fā) 生。
[0047] 試驗比較
[0048] (1)組1為本發(fā)明所述流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，采用流蘇石斛種子 作為組培材料；培養(yǎng)基分別為 ：
[0049] 誘導培養(yǎng)基以MS-H為基本培養(yǎng)基，加入0? 5-3. Omg/L吲哚乙酸、L 0-5. Omg/L萘乙 酸、0. 1-1. Omg/L 噻苯隆、25-40g/L 蔗糖及 3. 0-5. Og/L 瓊脂；
[0050] 繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入0? 2. 0-2. Omg/L激動素、2. 0-4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤、I. 0-4. Omg/L 萘乙酸、0? 5-3. Omg/L 吲哚丙酸、0? 1-2. Omg/L 噻苯隆、25-40g/ L鹿糖及3. 0-5. Og/L瓊脂；
[0051] 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入5-20%香蕉、0? 1-4. Omg/L萘乙酸、 2. 0-4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤、2-5 %蔗糖及0. 2-0. 5 %活性炭。
[0052] (2)組2為采用流蘇石斛嫩芽作為組培材料，采用的培養(yǎng)基與組1相同；
[0053] (3)組3為采用流蘇石斛種子作為組培材料，采用的培養(yǎng)基相較于組1分別為：
[0054] 誘導培養(yǎng)基為MS-H為基本培養(yǎng)基，加入0? 5-3. Omg/L吲哚乙酸、I. 0-5. Omg/L萘乙 酸、25-40g/L 蔗糖及 3. 0-5. Og/L 瓊脂；
[0055] 繼代培養(yǎng)基為以MS為基本培養(yǎng)基，以MS為基本培養(yǎng)基，加入0. 2. 0-2. Omg/L激動 素、2. 0-4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤、I. 0-4. Omg/L 萘乙酸、0? 5-3. Omg/L 吲哚丙酸、25-40g/L 蔗 糖及3. 0-5. Og/L瓊脂；
[0056] 生根培養(yǎng)基：加入5-20 %香蕉、0? 1-4. Omg/L萘乙酸、2. 0-4. Omg/L 6-芐氨基嘌 呤、2-5 %蔗糖及0. 2-0. 5 %活性炭。
[0057] (4)組4為采用流蘇石斛種子作為組培材料，采用的培養(yǎng)基相較于組1分別為：
[0058] 誘導培養(yǎng)基以MS-H為基本培養(yǎng)基，加入I. 0-5. Omg/L萘乙酸、0? 1-1. Omg/L噻苯 隆、25-40g/L 蔗糖及 3. 0-5. Og/L 瓊脂；
[0059] 繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入0? 2. 0-2. Omg/L激動素、2. 0-4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤、I. 0-4. Omg/L萘乙酸、0? 1-2. Omg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3. 0-5. Og/L瓊 脂；
[0060] 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入5-20%香蕉、0? 1-4. Omg/L萘乙酸、 2. 0-4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤、2-5 %蔗糖及0. 2-0. 5 %活性炭。
[0061] (5)組5為采用流蘇石斛種子作為組培材料，采用的培養(yǎng)基相較于組1分別為：
[0062] 誘導培養(yǎng)基以MS-H為基本培養(yǎng)基，加入0? 5-3. Omg/L吲哚乙酸、0? 1-1. Omg/L噻苯 隆、25-40g/L 蔗糖及 3. 0-5. Og/L 瓊脂；
[0063] 繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入0? 2. 0-2. Omg/L激動素、2. 0-4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤、0. 5-3. Omg/L吲哚丙酸、0. 1-2. Omg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3. 0-5. Og/L 瓊脂；
[0064] 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入5-20%香蕉、2. 0-4. 0mg/L6-芐氨基 嘌呤、2-5 %蔗糖及0. 2-0. 5 %活性炭。
[0065] (6)組6為采用流蘇石斛種子作為組培材料，采用的培養(yǎng)基相較于組1分別為：
[0066] 誘導培養(yǎng)基以MS-H為基本培養(yǎng)基，加入0? 5-3. Omg/L吲哚乙酸、I. 0-5. Omg/L萘乙 酸、0. 1-1. Omg/L 噻苯隆、25-40g/L 蔗糖及 3. 0-5. Og/L 瓊脂；
[0067] 繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入L 0-4. Omg/L萘乙酸、0.5-3. Omg/L吲哚 丙酸、0. 1-2. Omg/L 噻苯隆、25-40g/L 蔗糖及 3. 0-5. Og/L 瓊脂；
[0068] 生根培養(yǎng)基為：以1/21^為基本培養(yǎng)基，加入5-20%香蕉、0.1-4.〇11^/1萘乙酸、 2-5 %蔗糖及0. 2-0. 5 %活性炭。
[0069] (7)組7為采用流蘇石斛種子作為組培材料，采用的培養(yǎng)基相較于組1分別為：
[0070] 誘導培養(yǎng)基以MS-H為培養(yǎng)基，25_40g/L蔗糖及3. 0-5. Og/L瓊脂；
[0071] 繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，25-40g/L蔗糖及3. 0-5. Og/L瓊脂；
[0072] 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，2-5%蔗糖。
[0073] 得到結果如表1所示：
[0074]

【權利要求】
1. 一種流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，取流蘇石斛種子作為材料 進行離體誘導培養(yǎng)，獲取流蘇石斛的組織培養(yǎng)苗。
2. 如權利要求1所述的流蘇石斛種子組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述方法 包括以下步驟： 步驟一、將預處理的流蘇石斛種子播種于誘導培養(yǎng)基上，培養(yǎng)7-15天，得到流蘇石 斛小芽，其中，所述誘導培養(yǎng)基為：以MS-H為基本培養(yǎng)基，加入0. 5-3. Omg/L吲哚乙酸、 I. 0-5. Omg/L萘乙酸、0? 1-1. Omg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3. 0-5. Og/L瓊脂，并調(diào)整誘導 培養(yǎng)基的pH值為5. 6-6.0 ; 步驟二、將流蘇石斛小芽置于繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30-40天，獲得流蘇石斛組培分化 苗，其中，所述繼代培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，加入0. 2. 0-2. Omg/L激動素、2. 0-4. Omg/ L 6-芐氨基嘌呤、L 0-4. 0mg/L萘乙酸、0? 5-3. 0mg/L吲哚丙酸、0? 1-2. 0mg/L噻苯隆、 25-40g/L蔗糖及3. 0-5. 0g/L瓊脂，并調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為5. 6-6. 0 ; 步驟三、將流蘇石斛組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30-40天后，轉(zhuǎn)移至自然光 下照射培養(yǎng)40-50天，獲得流蘇石斛生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基 本培養(yǎng)基，加入5-20%香蕉，0? 1-4. 0mg/L萘乙酸、2. 0-4. 0mg/L 6-芐氨基嘌呤、2-5%蔗糖 及0. 2-0. 5 %活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 2 ; 步驟四、將流蘇石斛生根組培苗移栽至苗床上，待流蘇石斛小苗生長穩(wěn)定，即可移栽至 大棚。
3. 如權利要求2所述建立流蘇石斛快繁體系的方法，其特征在于，步驟一所述流蘇石 斛種子的預處理為，先將流蘇石斛碩果用80-85%乙醇溶液浸泡20-40秒，升汞消毒10-20 分鐘，清洗干凈后切開流蘇石斛的碩果，得到預處理的流蘇石斛種子。
4. 如權利要求2所述建立流蘇石斛快繁體系的方法，其特征在于，步驟四所述的苗床 基質(zhì)為：20-30樹皮、10-20雜木、20-30蛭石及10-15珍珠巖。
5. 如權利要求2所述建立流蘇石斛快繁體系的方法，其特征在于，步驟四中將流蘇石 斛生根組培苗移栽至苗床之前，先將流蘇石斛生根組培苗根部的培養(yǎng)基清洗干凈，晾干水 汽，在移栽至苗床上。
6. 如權利要求2所述建立流蘇石斛快繁體系的方法，其特征在于，所述步驟一至 步驟三中，流蘇石斛于培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件均為：培養(yǎng)溫度為28-3 2 °C，光照強度為 2500-30001ux，光照時間為 13-15h/d。
【文檔編號】A01H4/00GK104304037SQ201410674716
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年11月21日 優(yōu)先權日:2014年11月21日
【發(fā)明者】霍麗妮, 蘇鈦, 陳睿, 李培源, 蘇煒, 馬靜 申請人:廣西中醫(yī)藥大學