本發(fā)明涉及用于細(xì)胞保存的產(chǎn)品和方法，諸如用于隨后的科學(xué)或者醫(yī)學(xué)用途的任何類型的細(xì)胞的細(xì)胞存庫(banking)。更接近地，本發(fā)明涉及使用設(shè)有冷凍介質(zhì)/低溫貯藏液體的真空管的用于細(xì)胞的低溫貯藏的產(chǎn)品和方法。
背景技術(shù)：
當(dāng)今，存在存儲細(xì)胞-例如人類胎盤或臍帶干細(xì)胞-以用于未來的醫(yī)學(xué)用途的若干細(xì)胞庫。還存在存儲在例如生物反應(yīng)器中培養(yǎng)的細(xì)胞用于科學(xué)目的的細(xì)胞庫。所有細(xì)胞庫的共同點(diǎn)是細(xì)胞通過低溫貯藏通常存儲在處于-196°C的液體氮中。
低溫貯藏是非常手動和耗時的工作，通常在分層式氣流(LAF)下執(zhí)行。此外，其包括若干具有開放式操縱的步驟，開放式操縱會增大污染的風(fēng)險。由于傳統(tǒng)的細(xì)胞存庫期間的步驟的數(shù)量，還可發(fā)生批與批的變動。在細(xì)胞的低溫貯藏期間，時間和溫度是消除應(yīng)力，諸如窒息的關(guān)鍵因素。
真空下的容器，諸如VacutainerTM，是已為大家接受的在醫(yī)院和護(hù)理中心使用以用于快速的血液取樣的產(chǎn)品。該容器包括真空管，其無菌地抽取血液通過帶套筒的(sleeved)被遮蓋的針。真空管以多種多樣的容積可用，且通常預(yù)先涂覆有多種多樣的復(fù)合物來防止例如血液凝結(jié)。真空管插入接近裝置中，且當(dāng)套筒保護(hù)的針刺穿真空管上的硅帽時，血液自動地將從患者被抽取。
將合乎需要的是具有這樣的產(chǎn)品，利用該產(chǎn)品，細(xì)胞存庫可在不使細(xì)胞離開生物反應(yīng)器的情況下執(zhí)行，且該產(chǎn)品將顯著地縮短從生物反應(yīng)器到冷凍機(jī)的時間。這將提供強(qiáng)有力的工具來用非常少的工作建立大的細(xì)胞庫。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了用于快速細(xì)胞存庫的產(chǎn)品和方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，其減小了可能的污染和操縱時間以及工作。
因此，在第一方面，本發(fā)明涉及用于細(xì)胞的低溫貯藏的產(chǎn)品，包括設(shè)有冷凍介質(zhì)的真空管，和所述管上的可穿透的和優(yōu)選地可移除的帽。
優(yōu)選地，冷凍介質(zhì)是DMSO，甘油或甲基纖維素，且真空管填充有5-20%體積/體積，優(yōu)選地10%體積/體積的冷凍介質(zhì)。
在一個實(shí)施例中，提供了接近裝置用于接收所述真空管。該接近裝置設(shè)有將被插入到真空管中的中空針，且還設(shè)有用于連接到細(xì)胞源-諸如生物反應(yīng)器中的細(xì)胞培養(yǎng)物-的連接器。
在第二方面，本發(fā)明涉及用于細(xì)胞的低溫貯藏的方法，包括將細(xì)胞取樣或收獲到設(shè)有冷凍介質(zhì)的真空管中；利用可穿透的帽閉合所述管；以及冷凍所述管。
在用于細(xì)胞的低溫貯藏的優(yōu)選方法中，該方法包括：在生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞；從所述生物反應(yīng)器將細(xì)胞收獲或取樣到設(shè)有冷凍介質(zhì)的真空管，其中，細(xì)胞與冷凍介質(zhì)立即混合；從所述生物反應(yīng)器移除所述管；以及冷凍所述管及其內(nèi)容物。
優(yōu)選地，冷凍介質(zhì)是DMSO，甘油或甲基纖維素，且真空管填充有5-20%體積/體積，優(yōu)選地10%體積/體積的冷凍介質(zhì)。
在一優(yōu)選的實(shí)施例中，細(xì)胞作為灌注培養(yǎng)來培養(yǎng)。優(yōu)選地，細(xì)胞培養(yǎng)至10-200MVC/mL。
如果希望，細(xì)胞在冷凍之前被培育。
該方法的一個或者更多個步驟可為自動的。
本發(fā)明的方法將幾乎消除從細(xì)胞收獲至低溫貯藏的時間，因?yàn)槠鋵⒃谝粋€步驟中完成。優(yōu)選地，低溫貯藏管在程序開始之前冷地存儲。
附圖說明
圖1A顯示了以濃縮的低溫貯藏液體準(zhǔn)備好的真空管的示意圖。
圖1B顯示了用于接收真空管且具有用于穿透真空管的蓋的針的接近裝置的示意圖。
圖1C顯示了連接到真空管且準(zhǔn)備好被插入生物反應(yīng)器以用于細(xì)胞取樣的接近裝置的示意圖。
具體實(shí)施方式
現(xiàn)在將關(guān)于非限制性的實(shí)例和附圖描述本發(fā)明。
圖1A顯示了以濃縮的低溫貯藏液體(2)準(zhǔn)備的真空管(1)的示意圖。該管還設(shè)有可穿透的和可移除的帽(3)，以及硅或其它軟材料制成的可穿透的隔膜(4)。該管可為施加有真空的適用于低溫貯藏的任何器皿，例如管可為玻璃或者塑料。
圖1B顯示了接近裝置(5)的示意圖，其包括用于接收真空管的保護(hù)殼體(5)且具有針(6)以用于穿透真空管的蓋。針設(shè)有橡膠或硅制成的保護(hù)套筒(7)。接近裝置設(shè)有對生物反應(yīng)器的魯爾(Luer)或其它連接，用于細(xì)胞取樣直接進(jìn)入真空管中。
圖1C顯示了接近裝置(5)的示意圖，其連接到真空管(1)且準(zhǔn)備好經(jīng)由連接器(8)被插入到生物反應(yīng)器中，以進(jìn)行細(xì)胞取樣。低溫器皿沿著箭頭的方向被推入保護(hù)帽(3)中。針將穿透軟材料隔膜。真空將從生物反應(yīng)器抽取細(xì)胞液，以便與低溫貯藏液體(冷凍介質(zhì))直接混合。此后，管被放置在冷凍機(jī)中用于細(xì)胞存庫。
示例：
傳統(tǒng)的5ml真空管使用注射器填充有0.5ml的濃縮DMSO(冷凍介質(zhì))。使得CHO(中國倉鼠卵巢)培養(yǎng)達(dá)到直至10-100MVC/mL，優(yōu)選地使用灌注培養(yǎng)。具有套筒保護(hù)的針(6)的接近裝置通過連接器(8)附連到生物反應(yīng)器。根據(jù)本發(fā)明的低溫液體準(zhǔn)備的真空管用于從生物反應(yīng)器抽取細(xì)胞樣本。真空管插入接近裝置中，且真空通過接近裝置的針將細(xì)胞液抽吸到管中。細(xì)胞液和冷凍介質(zhì)立即混合。
此后，經(jīng)填充的低溫準(zhǔn)備的真空管被直接傳送到細(xì)胞存庫冷凍機(jī)。如果必要，管中的細(xì)胞在冷凍之前簡單地培育。
從生物反應(yīng)器抽取細(xì)胞樣本的程序并不會破壞細(xì)胞，并且非常迅速，這使得能夠以最小的開放式操縱產(chǎn)生大的細(xì)胞庫。如果需要，該過程可為自動的。