本發(fā)明涉及含水流動(dòng)狀組合物及其制造方法、以及溶菌酶加工品和/或其鹽、及其制造方法。

背景技術(shù)：

溶菌酶是蛋、動(dòng)物的組織、體液、植物等生物界中廣泛存在的酶。工業(yè)上從蛋清分離出的溶菌酶被應(yīng)用于食品和藥品(專(zhuān)利文獻(xiàn)1)。例如，溶菌酶由于具有抗菌作用而被廣泛用作消毒劑的成分。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)1：日本特開(kāi)平5-221875號(hào)公報(bào)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明要解決的問(wèn)題

本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)：將溶菌酶在特定的條件下改性而得到的溶菌酶加工品具有諾如病毒失活作用，以及，將該溶菌酶加工品在極性有機(jī)溶劑的存在下保存時(shí)能夠抑制諾如病毒失活作用的降低，從而想到了本發(fā)明。

本發(fā)明提供能夠抑制諾如病毒失活作用降低的含水流動(dòng)狀組合物及其制造方法、以及溶菌酶加工品和/或其鹽、及其制造方法。

用于解決問(wèn)題的方案

1.本發(fā)明的一個(gè)方式所述的含水流動(dòng)狀組合物是包含溶菌酶加工品和/或其鹽的含水流動(dòng)狀組合物，前述含水流動(dòng)狀組合物的下述規(guī)定的熒光強(qiáng)度為5000以上，前述含水流動(dòng)狀組合物中，前述溶菌酶加工品和/或其鹽在接觸極性有機(jī)溶劑的狀態(tài)下溶解于該含水流動(dòng)狀組合物，前述含水流動(dòng)狀組合物中的前述極性有機(jī)溶劑的含量為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下。

熒光強(qiáng)度：按照溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度以固體成分換算達(dá)到0.05質(zhì)量％且磷酸鹽的濃度達(dá)到0.2M的方式，用磷酸緩沖液(pH7.0)稀釋前述含水流動(dòng)狀組合物，向所得稀釋液5mL中添加8mM的1,8-苯胺基萘磺酸的甲醇溶液25μL，針對(duì)使所得溶液在室溫下反應(yīng)30分鐘后的該溶液，在激發(fā)波長(zhǎng)390nm(激發(fā)帶寬10nm)和熒光波長(zhǎng)470nm(熒光帶寬10nm)的條件下測(cè)得的熒光強(qiáng)度。

2.根據(jù)上述1所述的含水流動(dòng)狀組合物，其中，下述規(guī)定的抗諾如病毒活性能夠?yàn)?.0以上?？怪Z如病毒活性：將對(duì)于諾如病毒液0.1質(zhì)量份混合前述含水流動(dòng)狀組合物1質(zhì)量份而得到的諾如病毒混合液在室溫下放置1分鐘時(shí)的、從放置前的傳染性滴度的對(duì)數(shù)減去放置后的傳染性滴度的對(duì)數(shù)而得到的值。

3.根據(jù)上述1或2所述的含水流動(dòng)狀組合物，其中，前述熒光強(qiáng)度能夠?yàn)?000以上。

4.根據(jù)上述1～3中任一項(xiàng)所述的含水流動(dòng)狀組合物，其中，前述極性有機(jī)溶劑包含乙醇，前述乙醇的濃度能夠?yàn)?5質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下。

5.根據(jù)上述1～4中任一項(xiàng)所述含水流動(dòng)狀組合物，其中，前述溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度以固體成分換算能夠?yàn)?.1質(zhì)量％以上且10質(zhì)量％以下。

6.根據(jù)上述1～5中任一項(xiàng)所述的含水流動(dòng)狀組合物，其還能夠含有除乙醇之外的水溶性醇。

7.根據(jù)上述1～6中任一項(xiàng)所述的含水流動(dòng)狀組合物，其中，前述溶菌酶加工品和/或其鹽能夠源自蛋清溶菌酶。

8.根據(jù)上述1～7中任一項(xiàng)所述的含水流動(dòng)狀組合物能夠填充至噴霧式容器中。

9.根據(jù)上述1～7中任一項(xiàng)所述的含水流動(dòng)狀組合物能夠填充至泵式容器中。

10.根據(jù)上述1～7中任一項(xiàng)所述的含水流動(dòng)狀組合物能夠浸滲至無(wú)紡布中。

11.本發(fā)明的一個(gè)方式所述的細(xì)菌和/或病毒的失活方法包括使上述1～7中任一項(xiàng)所述的含水流動(dòng)狀組合物接觸對(duì)象物的工序。

12.本發(fā)明的一個(gè)方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的通過(guò)下述定義規(guī)定的熒光強(qiáng)度為4000以上：

熒光強(qiáng)度：按照前述溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度以固體成分換算達(dá)到0.05質(zhì)量％且磷酸鹽的濃度達(dá)到0.2M的方式用磷酸緩沖液(pH7.0)進(jìn)行稀釋?zhuān)蛩孟♂屢?mL中添加8mM的1,8-苯胺基萘磺酸的甲醇溶液25μL，針對(duì)使所得溶液在室溫下反應(yīng)30分鐘后的該溶液，在激發(fā)波長(zhǎng)390nm(激發(fā)帶寬10nm)和熒光波長(zhǎng)470nm(熒光帶寬10nm)的條件下測(cè)得的熒光強(qiáng)度。

13.根據(jù)上述12所述的溶菌酶加工品和/或其鹽能夠是下述規(guī)定的抗諾如病毒活性為2.0以上的溶菌酶加工品和/或其鹽。

抗諾如病毒活性：將使諾如病毒液與溶菌酶加工品和/或其鹽的2質(zhì)量％水溶液等量混合而得到的諾如病毒混合液在室溫下放置1分鐘時(shí)的、從放置前的傳染性滴度的對(duì)數(shù)減去放置后的傳染性滴度的對(duì)數(shù)而得到的值。

14.本發(fā)明的一個(gè)方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法是制造上述12或13所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的方法，包括下述工序：將波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％、pH為5.0以上且7.0以下、并且溶菌酶和/或其鹽的濃度以固體成分換算為0.5質(zhì)量％以上且7質(zhì)量％以下的溶菌酶和/或其鹽的水溶液加熱至該水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到70％為止的第一加熱工序；在前述第一加熱工序之后，加熱至前述水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到低于70％的極小值，然后將該水溶液加熱至光透射率達(dá)到70％為止的第二加熱工序；以及，在前述第二加熱工序之后，在前述水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％的狀態(tài)下進(jìn)一步加熱該水溶液的第三加熱工序。

15.根據(jù)上述14所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法，其中，前述第三加熱工序的加熱條件能夠是加熱至將該第三加熱工序中得到的水溶液用0.45μm的膜濾器進(jìn)行過(guò)濾而得到的物質(zhì)與乙醇按照質(zhì)量比計(jì)為1:1的比例混合時(shí)波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到85％以上為止的條件。

16.根據(jù)上述14或15所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法，其中，在前述第三加熱工序之后，還包括對(duì)前述水溶液進(jìn)行噴霧干燥或冷凍干燥而得到粉末狀的溶菌酶加工品和/或其鹽的工序。

17.本發(fā)明的一個(gè)方式所述的含水流動(dòng)狀組合物的制造方法包括：將極性有機(jī)溶劑與通過(guò)上述14～16中任一項(xiàng)所述的制造方法得到的溶菌酶加工品和/或其鹽進(jìn)行混合，從而得到前述極性有機(jī)溶劑的濃度為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下的含水流動(dòng)狀組合物的工序。

18.本發(fā)明的一個(gè)方式所述的含水流動(dòng)狀組合物的制造方法包括：將極性有機(jī)溶劑與上述12或13所述的溶菌酶加工品和/或其鹽進(jìn)行混合，從而得到前述極性有機(jī)溶劑的濃度為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下的含水流動(dòng)狀組合物的工序。

19.根據(jù)上述17或18所述的含水流動(dòng)狀組合物的制造方法，其中，在獲得前述含水流動(dòng)狀組合物的工序中，能夠按照該含水流動(dòng)狀組合物中的溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度以固體成分換算達(dá)到0.1質(zhì)量％以上且10質(zhì)量％以下的方式，將前述極性有機(jī)溶劑與前述溶菌酶加工品和/或其鹽進(jìn)行混合。

發(fā)明的效果

根據(jù)上述1～10中任一項(xiàng)所述的含水流動(dòng)狀組合物，通過(guò)包含溶菌酶加工品和/或其鹽，前述含水流動(dòng)狀組合物的下述規(guī)定的熒光強(qiáng)度為5000以上，在前述含水流動(dòng)狀組合物中，前述溶菌酶加工品和/或其鹽以接觸極性有機(jī)溶劑的狀態(tài)溶解于該含水流動(dòng)狀組合物，前述含水流動(dòng)狀組合物中的前述極性有機(jī)溶劑的含量為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下，從而在具有諾如病毒失活作用的基礎(chǔ)上，能夠長(zhǎng)期維持(例如以40℃維持2星期以上、通常為24星期以下)諾如病毒的失活作用。

上述含水流動(dòng)狀組合物能夠用于例如藥品、醫(yī)藥外用品、化妝品、食品的清洗用途、或者衛(wèi)生用途。此時(shí)，作為去除諾如病毒的用途，可以使用上述含水流動(dòng)狀組合物。更具體而言，上述含水流動(dòng)狀組合物例如以容納于容器(例如附帶噴嘴或噴霧器等的容器、或者未附帶噴嘴或噴霧器等的容器)的形態(tài)或者浸滲至無(wú)紡布的形態(tài)來(lái)使用。

此外，關(guān)于上述12或13所述的溶菌酶加工品和/或其鹽，通過(guò)使上述定義規(guī)定的熒光強(qiáng)度為4000以上而具有諾如病毒的失活作用，并且，通過(guò)使該溶菌酶加工品和/或其鹽接觸極性有機(jī)溶劑，能夠長(zhǎng)期維持諾如病毒的失活作用。

此外，根據(jù)上述14～16所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法，通過(guò)前述第一加熱工序、前述第二加熱工序和第三加熱工序，可以獲得具有諾如病毒的失活作用、且通過(guò)與極性有機(jī)溶劑接觸而能夠長(zhǎng)期維持諾如病毒失活作用的溶菌酶加工品和/或其鹽。

此外，根據(jù)上述17和19所述的含水流動(dòng)狀組合物的制造方法，通過(guò)包括將極性有機(jī)溶劑與利用上述14～16中任一項(xiàng)所述的制造方法得到的溶菌酶加工品和/或其鹽進(jìn)行混合從而得到前述極性有機(jī)溶劑的濃度為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下的含水流動(dòng)狀組合物的工序，可以獲得具有諾如病毒的失活作用、且能夠長(zhǎng)期維持諾如病毒失活作用的含水流動(dòng)狀組合物。

此外，根據(jù)上述18和19中任一項(xiàng)所述的含水流動(dòng)狀組合物的制造方法，通過(guò)包括將極性有機(jī)溶劑與上述12或13所述的溶菌酶加工品和/或其鹽進(jìn)行混合從而得到前述極性有機(jī)溶劑的濃度為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下的含水流動(dòng)狀組合物的工序，可以獲得具有諾如病毒的失活作用、且能夠長(zhǎng)期維持諾如病毒失活作用的含水流動(dòng)狀組合物。

附圖說(shuō)明

圖1是示意性地表示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法中，第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序中的加熱時(shí)間與透射率之間的關(guān)系的圖。

圖2是示出通過(guò)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例得到的溶菌酶加工品和/或其鹽的電泳(SDS-PAGE)結(jié)果的照片。

具體實(shí)施方式

以下詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)予說(shuō)明，本發(fā)明中，在沒(méi)有特別說(shuō)明的情況下，“份”表示“質(zhì)量份”，“％”表示“質(zhì)量％”。

<含水流動(dòng)狀組合物>

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物是包含溶菌酶加工品和/或其鹽的含水流動(dòng)狀組合物，前述含水流動(dòng)狀組合物的下述規(guī)定的熒光強(qiáng)度為5000以上，前述含水流動(dòng)狀組合物中，前述溶菌酶加工品和/或其鹽在接觸極性有機(jī)溶劑的狀態(tài)下溶解于該含水流動(dòng)狀組合物，前述含水流動(dòng)狀組合物中的前述極性有機(jī)溶劑的含量為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下。

熒光強(qiáng)度：按照溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度以固體成分換算達(dá)到0.05質(zhì)量％且磷酸鹽的濃度達(dá)到0.2M的方式，用磷酸緩沖液(pH7.0)稀釋前述含水流動(dòng)狀組合物，向所得稀釋液5mL中添加8mM的1,8-苯胺基萘磺酸的甲醇溶液25μL，針對(duì)使所得溶液在室溫下反應(yīng)30分鐘后的該溶液，在激發(fā)波長(zhǎng)390nm(激發(fā)帶寬10nm)和熒光波長(zhǎng)470nm(熒光帶寬10nm)的條件下測(cè)得的熒光強(qiáng)度。

本發(fā)明中，“含水流動(dòng)狀組合物”是指含有水且具有可變形程度的粘度(例如為1～100000mPa·s)的組合物，是包括粘度低至能夠噴霧的程度的液狀組合物、以及凝膠狀組合物的概念。溶劑只要是溶菌酶加工品和/或其鹽會(huì)均勻溶解或分散的溶劑就沒(méi)有特別限定，例如可以使用水、醇。此外，本發(fā)明中，“室溫”是指20℃以上且25℃以下。

[熒光強(qiáng)度和諾如病毒的失活作用]

從表面疏水性更高的觀點(diǎn)出發(fā)，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物的熒光強(qiáng)度優(yōu)選為通過(guò)上述定義而規(guī)定的6000以上、更優(yōu)選為6500以上、進(jìn)一步優(yōu)選為7000以上，通常為10000以下。本發(fā)明中規(guī)定的含水流動(dòng)狀組合物的熒光強(qiáng)度是含水流動(dòng)狀組合物中包含的蛋白質(zhì)的表面疏水性的指標(biāo)。即可以說(shuō)：本發(fā)明中規(guī)定的含水流動(dòng)狀組合物的熒光強(qiáng)度越高，則含水流動(dòng)狀組合物中包含的蛋白質(zhì)的表面疏水性越高，該含水流動(dòng)狀組合物的表面疏水性越高，則諾如病毒的失活作用越高。

因此，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物的熒光強(qiáng)度主要起因于該含水流動(dòng)狀組合物中包含的溶菌酶加工品和/或其鹽的表面疏水性。通常，若提高蛋白質(zhì)的表面疏水性，則蛋白質(zhì)的疏水性部分彼此牽扯、聚集。本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)：存在溶菌酶加工品和/或其鹽的表面疏水性越高則諾如病毒的失活作用越高的傾向。即，本實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽具有諾如病毒的失活作用優(yōu)異這一特征。

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中包含的溶菌酶加工品和/或其鹽具有優(yōu)異的諾如病毒失活作用的原因尚未明確，推測(cè)如下：第一，具有表面疏水性的溶菌酶加工品和/或其鹽容易結(jié)合于諾如病毒的疏水性部位；第二，溶菌酶加工品和/或其鹽是溶菌酶的改性物，通過(guò)改性而使溶菌酶加工品包含由溶菌酶所具有的S-S鍵的至少一部分開(kāi)裂而得到的硫醇基(-SH)，該硫醇基與諾如病毒的表面存在的S-S鍵進(jìn)行結(jié)合；第三，溶菌酶加工品和/或其鹽具有容易結(jié)合于諾如病毒的立體結(jié)構(gòu)。

此外，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物能夠抑制諾如病毒的失活作用降低的原因尚未明確，推測(cè)如下：通過(guò)使溶菌酶加工品和/或其鹽溶解于本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物，該含水流動(dòng)狀組合物中包含的極性有機(jī)溶劑與溶菌酶加工品和/或其鹽呈現(xiàn)相接觸的狀態(tài)，因此，溶菌酶加工品和/或其鹽能夠維持可表現(xiàn)出諾如病毒失活作用的立體結(jié)構(gòu)。

即，溶菌酶加工品和/或其鹽由于表面疏水性高而與極性有機(jī)溶劑(尤其是乙醇)的親和性高，因此，溶菌酶加工品在該含水流動(dòng)狀組合物中在接觸極性有機(jī)溶劑的狀態(tài)下，能夠維持使溶菌酶加工品和/或其鹽能夠表現(xiàn)出諾如病毒失活作用的立體結(jié)構(gòu)，其結(jié)果可推測(cè)：能夠維持諾如病毒的失活作用。

本發(fā)明中，含水流動(dòng)狀組合物和后述溶菌酶加工品和/或其鹽的熒光強(qiáng)度是通過(guò)Canadian Institute of Food Science and Technology 1985Vol.18No.4p.290-295記載的方法而測(cè)得的值。應(yīng)予說(shuō)明，本發(fā)明的溶菌酶加工品和/或其鹽的熒光強(qiáng)度的測(cè)定中使用的磷酸緩沖液是利用磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉制備的。此外，本發(fā)明中的溶菌酶加工品和/或其鹽的熒光強(qiáng)度是將0.2M磷酸緩沖液(pH為7.0、作為磷酸鹽而含有磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉)的熒光強(qiáng)度作為空白值而另行測(cè)定，并減去該空白值而得到的值。

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物和后述實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的熒光強(qiáng)度是指：使用日本分光株式會(huì)社制造的型號(hào)FP-8500熒光分光光度計(jì)，在激發(fā)波長(zhǎng)為390nm、激發(fā)帶寬為10nm、熒光波長(zhǎng)為470nm、熒光帶寬為10nm、靈敏度為0.5秒、靈敏度低(約為270±10V)(電源頻率為(50/60Hz))、使用ペリスタシッパSHP-820型的條件下測(cè)定時(shí)的值。應(yīng)予說(shuō)明，也可以使用其它熒光分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定，此時(shí)，需要使靈敏度等測(cè)定條件符合本申請(qǐng)中規(guī)定的條件。

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中，前述溶菌酶加工品和/或其鹽在接觸前述極性有機(jī)溶劑的狀態(tài)下保存在該含水流動(dòng)狀組合物中。即，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中，前述溶菌酶加工品和/或其鹽由于溶解于前述含水流動(dòng)狀組合物，因此能夠在接觸前述極性有機(jī)溶劑的狀態(tài)下存在于該含水流動(dòng)狀組合物中。

本發(fā)明人等獲得了如下的驚人發(fā)現(xiàn)：特定的溶菌酶加工品和/或其鹽具有諾如病毒的失活作用，以及，在本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中，通過(guò)使前述溶菌酶加工品和/或其鹽在接觸前述極性有機(jī)溶劑(尤其是乙醇等水溶性醇)的狀態(tài)下溶解在該含水流動(dòng)狀組合物中，由此能夠抑制諾如病毒的失活作用降低，從而創(chuàng)造出本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物。

[溶菌酶加工品和/或其鹽]

本發(fā)明中，“溶菌酶”是指：具有將N-乙酰基葡糖胺與N-乙?；谒岬摩?1,4鍵水解的性質(zhì)的蛋白質(zhì)。此外，本發(fā)明中，“溶菌酶加工品”是指溶菌酶的改性物，其具有與溶菌酶和/或其鹽不同的立體結(jié)構(gòu)。

溶菌酶廣泛存在于蛋、動(dòng)物的組織、體液、植物等生物界中，根據(jù)底物特異性和結(jié)構(gòu)而大致分類(lèi)為以下的5個(gè)種屬。

1.溶菌酶(細(xì)菌型)

2.溶菌酶(雞型)

3.溶菌酶(鵝型)

4.溶菌酶(噬菌體型；V類(lèi))

5.溶菌酶(CH型)

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中，作為溶菌酶加工品和/或其鹽的原料，上述5個(gè)種屬的溶菌酶均可以使用。這些溶菌酶之中，作為原料溶菌酶，優(yōu)選為蛋清溶菌酶、人溶菌酶等溶菌酶(雞型)。本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中，從諾如病毒的失活作用更優(yōu)異、成本低且容易獲取的觀點(diǎn)出發(fā)，作為溶菌酶加工品和/或其鹽的原料溶菌酶，更優(yōu)選為源自蛋清溶菌酶的溶菌酶。

此外，作為溶菌酶加工品的鹽，可列舉出食品添加物或藥學(xué)上可允許的鹽，可列舉出鹽酸、碳酸、磷酸、硼酸、六偏磷酸、硝酸、硫酸等無(wú)機(jī)酸的鹽；檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、蘋(píng)果酸、醋酸、谷氨酸、甘油磷酸、葡糖酸等有機(jī)酸的鹽。溶菌酶的鹽之中，優(yōu)選為無(wú)機(jī)酸鹽，從廣泛用作消炎劑、安全性已經(jīng)確定的觀點(diǎn)出發(fā)，更優(yōu)選為鹽酸鹽。

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物可以含有選自溶菌酶加工品和/或其鹽中的至少1種。此外，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中含有多種溶菌酶加工品和/或其鹽時(shí)，溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度(固體成分換算)是指溶菌酶加工品和/或其鹽的合計(jì)量的濃度(固體成分換算)。

(熒光強(qiáng)度)

本發(fā)明中規(guī)定的溶菌酶加工品和/或其鹽的熒光強(qiáng)度是溶菌酶加工品和/或其鹽的表面疏水性的指標(biāo)。即可以說(shuō)，本發(fā)明中規(guī)定的溶菌酶加工品和/或其鹽的熒光強(qiáng)度越高，則溶菌酶加工品和/或其鹽的表面疏水性越高，溶菌酶加工品和/或其鹽的表面疏水性越高。

從表面疏水性更高、諾如病毒的失活作用更優(yōu)異的觀點(diǎn)出發(fā)，通過(guò)下述定義規(guī)定的溶菌酶加工品和/或其鹽的熒光強(qiáng)度優(yōu)選為4000以上、更優(yōu)選為5000以上，通常為10000以下。

前述熒光強(qiáng)度是指：按照前述溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度以固體成分換算達(dá)到0.05質(zhì)量％且磷酸鹽的濃度達(dá)到0.2M的方式用磷酸緩沖液(pH7.0)進(jìn)行稀釋?zhuān)蛩孟♂屢?mL中添加8mM的1,8-苯胺基萘磺酸的甲醇溶液25μL，針對(duì)使所得溶液在室溫下反應(yīng)30分鐘后的該溶液，在激發(fā)波長(zhǎng)390nm(激發(fā)帶寬10nm)和熒光波長(zhǎng)470nm(熒光帶寬10nm)的條件下測(cè)得的熒光強(qiáng)度值。應(yīng)予說(shuō)明，按照溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度以固體成分換算達(dá)到0.05質(zhì)量％且磷酸鹽的濃度達(dá)到0.2M的方式用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋具體是指：例如在測(cè)定以固體成分換算含有1質(zhì)量％溶菌酶加工品和/或其鹽的水溶液的熒光強(qiáng)度時(shí)，通過(guò)將前述水溶液5g與0.25M的磷酸緩沖液80mL投入至100mL的容量瓶中，然后用純化水定容至100mL來(lái)制備。

(濃度)

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中，從能夠更可靠地抑制諾如病毒的失活作用降低這一點(diǎn)出發(fā)，溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度以固體成分換算優(yōu)選為0.1質(zhì)量％以上且10質(zhì)量％以下、更優(yōu)選為0.2質(zhì)量％以上，進(jìn)一步優(yōu)選超過(guò)0.5質(zhì)量％、例如為0.6質(zhì)量％以上，最優(yōu)選為0.7質(zhì)量％以上，另一方面，優(yōu)選為5質(zhì)量％以下、更優(yōu)選為4質(zhì)量％以下、進(jìn)一步優(yōu)選為2質(zhì)量％以下。

(溶菌酶加工品和/或其鹽的抗諾如病毒活性)

本實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽具有諾如病毒的失活作用。更具體而言，本實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的下述規(guī)定的抗諾如病毒活性?xún)?yōu)選達(dá)到2.0以上。

溶菌酶加工品和/或其鹽的抗諾如病毒活性：將使諾如病毒液與溶菌酶加工品和/或其鹽的2質(zhì)量％水溶液等量混合而得到的諾如病毒混合液在室溫下放置1分鐘時(shí)的、從放置前的傳染性滴度的對(duì)數(shù)減去放置后的傳染性滴度的對(duì)數(shù)而得到的值。

(二聚體和三聚體)

前述溶菌酶加工品或其鹽可以包含約29KDa(KDa＝10³Da)的蛋白質(zhì)和/或約36.5KDa的蛋白質(zhì)。即，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物可以包含約29KDa的蛋白質(zhì)和/或約36.5KDa的蛋白質(zhì)。本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物以及前述溶菌酶加工品或其鹽中包含約29KDa的蛋白質(zhì)和/或約36.5KDa的蛋白質(zhì)可通過(guò)后述實(shí)施例中示出的電泳來(lái)確認(rèn)。應(yīng)予說(shuō)明，電泳可以使用市售的電泳試劑盒來(lái)進(jìn)行。

推測(cè)約29KDa的蛋白質(zhì)是溶菌酶加工品的二聚體，推測(cè)約36.5KDa的蛋白質(zhì)是溶菌酶加工品的三聚體。

可推測(cè)：本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中，通過(guò)包含約29KDa的蛋白質(zhì)和/或約36.5KDa的蛋白質(zhì)，溶菌酶加工品和/或其鹽以表面疏水性高的狀態(tài)存在于該含水流動(dòng)狀組合物中。

(制造方法)

溶菌酶加工品和/或其鹽可通過(guò)后述實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法一項(xiàng)中記載的第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序來(lái)制造。

[極性有機(jī)溶劑]

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物含有極性有機(jī)溶劑。本發(fā)明中，“極性有機(jī)溶劑”是指對(duì)于水具有親和性的有機(jī)溶劑，更具體而言，是指與水混合的有機(jī)溶劑。作為極性有機(jī)溶劑，可列舉出例如包括乙醇、甲醇、1-丙醇、2-丙醇、正丁醇等碳原子數(shù)為1以上且4以下(優(yōu)選為3以下)的一元醇、甘油、乙二醇、二乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、丁二醇、二丙二醇、山梨糖醇等多元醇等多元醇的水溶性醇(醇系溶劑)；丙酮、甲乙酮等酮系溶劑；二噁烷、四氫呋喃、乙腈、N-甲基吡咯烷酮，可以單獨(dú)使用這些之中的1種或者組合使用2種以上。其中，從對(duì)生物體的負(fù)擔(dān)少的觀點(diǎn)出發(fā)，極性有機(jī)溶劑優(yōu)選含有醇系溶劑，更優(yōu)選含有乙醇。

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中，從溶菌酶加工品和/或其鹽的溶解性?xún)?yōu)異且能夠更可靠地抑制諾如病毒的失活作用降低的觀點(diǎn)出發(fā)，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中的極性有機(jī)溶劑的濃度為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下、優(yōu)選為60質(zhì)量％以上、更優(yōu)選為65質(zhì)量％以上。另一方面，優(yōu)選為85質(zhì)量％以下、更優(yōu)選為80質(zhì)量％以下。

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物含有乙醇作為極性有機(jī)溶劑時(shí)，從能夠更可靠地抑制諾如病毒的失活作用降低的觀點(diǎn)出發(fā)，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中的乙醇濃度可以為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下，優(yōu)選為60質(zhì)量％以上、更優(yōu)選為65質(zhì)量％以上，另一方面，優(yōu)選為85質(zhì)量％以下、更優(yōu)選為80質(zhì)量％以下。

[諾如病毒失活作用]

本發(fā)明中，諾如病毒失活作用可通過(guò)使用了后述實(shí)施例所述的方法(即感染了諾如病毒的小鼠細(xì)胞)的體系來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

更具體而言，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物具有諾如病毒失活作用。更具體而言，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物的下述規(guī)定的抗諾如病毒活性能夠達(dá)到3.0以上。應(yīng)予說(shuō)明，本發(fā)明中的含水流動(dòng)狀組合物的抗諾如病毒活性?xún)?yōu)選為分別針對(duì)溶菌酶加工品的濃度(固體成分換算)為0.1質(zhì)量％以上且10質(zhì)量％以下的含水流動(dòng)狀組合物而測(cè)定的值。此時(shí)，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物可以包含含有約29KDa和/或約36.5KDa的蛋白質(zhì)的溶菌酶加工品或其鹽。

含水流動(dòng)狀組合物的抗諾如病毒活性：將對(duì)于諾如病毒液0.1質(zhì)量份混合前述含水流動(dòng)狀組合物1質(zhì)量份而得到的諾如病毒混合液在室溫下放置1分鐘時(shí)的、從放置前的傳染性滴度的對(duì)數(shù)減去放置后的傳染性滴度的對(duì)數(shù)而得到的值。

[諾如病毒失活作用的維持]

此外，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物即使在長(zhǎng)期保存后也能夠維持諾如病毒失活作用。更具體而言，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物在40℃×75％RH下保存4星期后的抗諾如病毒活性相對(duì)于保存前的抗諾如病毒活性可以為50％以上(優(yōu)選為70％以上、通常為100％以下)。

[除乙醇之外的水溶性醇]

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物可以進(jìn)一步含有除乙醇之外的水溶性醇。作為除乙醇之外的水溶性醇，可列舉出上述水溶性醇。除乙醇之外的水溶性醇可作為極性有機(jī)溶劑而發(fā)揮功能。使用除乙醇之外的水溶性醇時(shí)，除乙醇之外的水溶性醇可以單獨(dú)使用或者組合使用2種以上。

溶菌酶加工品和/或其鹽在水溶性和極性有機(jī)溶劑(尤其是乙醇)中的溶解性?xún)?yōu)異，因此，通過(guò)使本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物進(jìn)一步含有選自除乙醇之外的水溶性醇中的至少1種，能夠進(jìn)一步提高溶菌酶加工品和/或其鹽對(duì)于該極性有機(jī)溶劑(尤其是乙醇)的溶解性，其結(jié)果，在該含水流動(dòng)狀組合物中能夠確保極性有機(jī)溶劑與溶菌酶加工品和/或其鹽的接觸。

其中，從對(duì)生物體的負(fù)擔(dān)少的觀點(diǎn)出發(fā)，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物優(yōu)選在包含乙醇的基礎(chǔ)上，還包含水和除乙醇之外的水溶性醇、或者含有其中的任一者。

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物包含除乙醇之外的水溶性醇時(shí)，其含量通常為0.1質(zhì)量％以上且20質(zhì)量％以下、優(yōu)選為0.5質(zhì)量％以上，另一方面，優(yōu)選為10質(zhì)量％以下。此時(shí)，從能夠進(jìn)一步提高該含水流動(dòng)狀組合物中的溶菌酶加工品和/或其鹽的溶解性的觀點(diǎn)出發(fā)，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物包含乙醇和除乙醇之外的水溶性醇時(shí)，水溶性醇的含量相對(duì)于乙醇的含量?jī)?yōu)選為1/700以上且1/5以下。

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物包含水時(shí)，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中的水含量通常為10質(zhì)量％以上且50質(zhì)量％以下、優(yōu)選為15質(zhì)量％以上、更優(yōu)選為20質(zhì)量％以上，另一方面，優(yōu)選為40質(zhì)量％以下、更優(yōu)選為30質(zhì)量％以下。此時(shí)，從能夠進(jìn)一步提高溶菌酶加工品和/或其鹽的溶解性的觀點(diǎn)出發(fā)，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物包含乙醇時(shí)，水的含量相對(duì)于乙醇的含量?jī)?yōu)選為1/3以上且1/1以下。

[其它原材料]

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中，除了含有溶菌酶加工品、極性有機(jī)溶劑和水之外，還可以含有其它的配混原材料。

作為其它的原材料，可以適當(dāng)組合使用例如甘氨酸、有機(jī)酸、苯甲酸鈉、山梨酸鈉、丙酸鈉、脫氫乙酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸酯、亞硫酸鈉、EDTA、苯扎氯銨、芐索氯銨、葡糖酸洗必泰、氯烷基二氨基乙基甘氨酸、碘酊、聚乙烯吡咯烷酮碘、棕櫚酸化苯甲烴銨、三氯生、氯化二甲苯酚、異丙基甲基苯酚、ε-聚賴(lài)氨酸、乳鐵蛋白、乳鏈菌肽、細(xì)菌素、土當(dāng)歸提取物、蘇合香提取物、菌陳蒿提取物、酶分解薏苡提取物、魚(yú)精蛋白提取物、苧側(cè)素、果膠分解物等抑菌劑。

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物根據(jù)需要還可以含有檸檬酸、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、三乙醇胺等pH調(diào)節(jié)劑、生育酚醋酸酯等抗氧化劑、聚羧乙烯、羥乙基纖維素等增稠劑等添加劑、甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯等表面活性劑。

<劑型>

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物的粘度可以根據(jù)使用方法來(lái)適當(dāng)確定。例如，通過(guò)制成能夠噴霧的粘度的液體制劑并填充至手扣式噴霧器、泵容器、擠壓容器、氣溶膠容器等容器，將包含本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物的液滴噴霧至手指、食品、烹飪器具、家居環(huán)境、嘔吐物、排泄物等，從而能夠輕松地進(jìn)行病毒的失活。即，上述容器包含本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物。

此外，通過(guò)在本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物中浸漬失活對(duì)象物(例如手指、食品、醫(yī)療儀器、醫(yī)療器具、烹飪器具、家居環(huán)境)，能夠輕松地進(jìn)行病毒的失活。

此外，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物能夠以將其浸滲至無(wú)紡布中而得到的片材形態(tài)來(lái)使用。即，上述無(wú)紡布浸滲有本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物。此時(shí)，作為無(wú)紡布的材質(zhì)，可列舉出例如紙、纖維。通過(guò)使將本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物浸滲至無(wú)紡布而得到的片材片材接觸對(duì)象物的表面，能夠輕松地進(jìn)行病毒的失活。

進(jìn)而，通過(guò)將本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物制成涂劑，能夠用作屬于化妝品或者藥品或醫(yī)藥外用品的皮膚外用劑。

[一例]

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物例如是包含溶菌酶加工品和/或其鹽的含水流動(dòng)狀組合物，前述極性有機(jī)溶劑的含量為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下，前述溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度為0.1質(zhì)量％以上且10質(zhì)量％以下。此時(shí)，在前述含水流動(dòng)狀組合物中，前述溶菌酶加工品和/或其鹽以接觸前述極性有機(jī)溶劑的狀態(tài)溶解于該含水流動(dòng)狀組合物。

此時(shí)，前述極性有機(jī)溶劑包含乙醇，前述乙醇的含量能夠?yàn)?5質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下。

此外，此時(shí)，該含水流動(dòng)狀組合物可以包含約29KDa的蛋白質(zhì)和/或約36.5KDa的蛋白質(zhì)。

進(jìn)而，此時(shí)，該含水流動(dòng)狀組合物的下述規(guī)定的抗諾如病毒活性能夠達(dá)到3.0以上。含水流動(dòng)狀組合物的抗諾如病毒活性：將對(duì)于諾如病毒液0.1質(zhì)量份混合前述含水流動(dòng)狀組合物1質(zhì)量份而得到的諾如病毒混合液在室溫下放置1分鐘時(shí)的、從放置前的傳染性滴度的對(duì)數(shù)減去放置后的傳染性滴度的對(duì)數(shù)而得到的值。

此外，該含水流動(dòng)狀組合物在40℃×75％RH下保存4星期后的抗病毒活性相對(duì)于保存前的抗病毒活性能夠?yàn)?0％以上(優(yōu)選為70％以上、通常為100％以下)。

<溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法>

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法是制造上述定義中規(guī)定的熒光強(qiáng)度為4000以上的溶菌酶加工品和/或其鹽的方法，其包括下述工序：將波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％、pH為5.0以上且7.0以下、并且溶菌酶和/或其鹽的濃度以固體成分換算為0.5質(zhì)量％以上且7質(zhì)量％以下的溶菌酶的水溶液加熱至該水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到70％為止的第一加熱工序(以下也簡(jiǎn)稱(chēng)為“第一加熱工序”)；在前述第一加熱工序之后，加熱至該水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到低于70％的極小值為止，然后將該水溶液加熱至光透射率達(dá)到70％為止的第二加熱工序(以下也簡(jiǎn)稱(chēng)為“第二加熱工序”)；以及，在前述第二加熱工序之后，在前述水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％的狀態(tài)下進(jìn)一步加熱該水溶液的第三加熱工序(以下也簡(jiǎn)稱(chēng)為“第三加熱工序”)。

根據(jù)本實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法，通過(guò)前述第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序，能夠得到上述定義中規(guī)定的熒光強(qiáng)度為4000以上的溶菌酶加工品和/或其鹽，并且，通過(guò)將極性有機(jī)溶劑與利用上述溶菌酶的制造方法得到的溶菌酶加工品和/或其鹽進(jìn)行混合，能夠得到包含該溶菌酶加工品和/或其鹽且具有諾如病毒的失活作用、并且抑制諾如病毒的失活作用降低的含水流動(dòng)狀組合物。

[加熱的機(jī)理]

圖1是示意性地表示本實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法中，第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序中的加熱時(shí)間與透射率之間的關(guān)系的圖。本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)：將包含溶菌酶的水溶液加熱時(shí)，波長(zhǎng)660nm下的光透射率根據(jù)加熱時(shí)間而如圖1所示那樣地變化。推測(cè)該透射率的變化主要是所得溶菌酶加工品的表面疏水性的變化和水溶性的變化(水溶性的降低和緊隨其后的水溶性的增加)引起的。

如圖1所示那樣，通過(guò)第一加熱工序，波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％的水溶液的該光透射率降低而成為70％。更具體而言，通過(guò)第一加熱工序，水溶液的透明度降低。

此外，通過(guò)第二加熱工序，因第一加熱工序而成為70％的前述水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率進(jìn)一步降低，然后再次上升而能夠制成70％。更具體而言，如圖1所示那樣，通過(guò)第二加熱工序，該水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率降低而降低至低于70％的極小值后，上升至70％為止。即，此時(shí)，通過(guò)目視而確認(rèn)到水溶液的白濁和/或沉淀后(換言之，該水溶液的透射率(透明性)降低后)，該白濁和/或沉淀可以陸續(xù)消失(換言之，該水溶液的透射率(透明性)上升)。

進(jìn)而，通過(guò)第三加熱工序，在因第二加熱工序而成為70％的前述水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％的狀態(tài)下進(jìn)一步加熱該水溶液。更具體而言，在第三加熱工序中，該水溶液中優(yōu)選不產(chǎn)生白濁和/或沉淀(換言之，該水溶液的透射率(透明性)得以維持)。

[第一加熱工序]

第一加熱工序的加熱對(duì)象是波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％(優(yōu)選為80％以上、更優(yōu)選為90％以上、通常為100％以下)、pH為5.0以上且7.0以下、并且溶菌酶和/或其鹽的濃度以固體成分換算為0.5質(zhì)量％以上且7質(zhì)量％以下的溶菌酶和/或其鹽的水溶液。

通過(guò)第一加熱工序，波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％的水溶液中的該光透射率達(dá)到70％表示該水溶液的透射率降低，例如可以通過(guò)目視來(lái)確認(rèn)該水溶液的白濁。

即可推測(cè)：在第一加熱工序中，前述水溶液中的溶菌酶的立體結(jié)構(gòu)和/或溶菌酶表面的表面疏水性上升、疏水性部分互相牽扯而聚集、前述水溶液中的溶菌酶的溶解性降低，作為其結(jié)果，該水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率從超過(guò)70％降低至70％。

(原料)

第一加熱工序中，在水溶液中使用的作為原料的溶菌酶和/或其鹽可以使用上述含水流動(dòng)狀組合物一項(xiàng)中例示出的溶菌酶和/或其鹽。從成本低且容易獲取的觀點(diǎn)出發(fā)，作為原料的溶菌酶和/或其鹽優(yōu)選為蛋清溶菌酶。

(原料的濃度)

從能夠可靠地改變?nèi)芫傅牧Ⅲw結(jié)構(gòu)且能夠防止溶菌酶聚集、提高諾如病毒的失活作用的觀點(diǎn)出發(fā)，在第一加熱工序中，水溶液中的溶菌酶的濃度優(yōu)選為0.5質(zhì)量％以上、更優(yōu)選為1質(zhì)量％以上，另一方面，優(yōu)選為7質(zhì)量％以下、更優(yōu)選為5質(zhì)量％以下。

(溶菌酶和/或其鹽的水溶液)

構(gòu)成溶菌酶和/或其鹽的水溶液的溶劑是水，在不影響溶菌酶和/或其鹽在水中的溶解性的范圍內(nèi)，也可以使用與水混合的有機(jī)溶劑。構(gòu)成溶菌酶和/或其鹽的水溶液的溶劑中的水的比例通常為80質(zhì)量％以上且100質(zhì)量％以下。此外，構(gòu)成溶菌酶和/或其鹽的水溶液的溶劑包含與水混和的有機(jī)溶劑時(shí)，構(gòu)成溶菌酶和/或其鹽的水溶液的溶劑中的該有機(jī)溶劑的比例通常為1質(zhì)量％以上且20質(zhì)量％以下。

作為前述有機(jī)溶劑，只要是與水混合的有機(jī)溶劑即可，可列舉出例如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、乙二醇、丙二醇、甘油等醇系溶劑；丙酮、甲乙酮等酮系溶劑；乙腈、四氫呋喃、1,4-二噁烷等，它們可以單獨(dú)使用或者組合使用2種以上。

(pH)

從能夠防止溶菌酶的聚集且能夠提高所得溶菌酶加工品和/或其鹽的表面疏水性的觀點(diǎn)出發(fā)，在第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序中，前述水溶液的pH優(yōu)選為5.0以上、更優(yōu)選超過(guò)5.0、進(jìn)一步優(yōu)選為5.5以上，另一方面，優(yōu)選為7.0以下、更優(yōu)選為6.5以下。

此外，根據(jù)需要，也可以使用酸(例如鹽酸、硫酸、硝酸等無(wú)機(jī)酸；檸檬酸、醋酸、磷酸等有機(jī)酸)、堿(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀等無(wú)機(jī)堿)或緩沖液(例如醋酸緩沖液)，將前述水溶液調(diào)整成上述范圍的pH。

例如，溶菌酶為溶菌酶的鹽(例如氯化溶菌酶)時(shí)，優(yōu)選的是，在使用酸、堿或緩沖液將水溶液的pH調(diào)整成上述范圍的pH的基礎(chǔ)上，進(jìn)行第一加熱工序。

[第二加熱工序]

第二加熱工序中，以通過(guò)第一加熱工序得到的水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率從70％達(dá)到低于70％的極小值并進(jìn)一步達(dá)到70％的方式進(jìn)行加熱是指：通過(guò)第一加熱工序得到的水溶液的透射率進(jìn)一步降低后，轉(zhuǎn)為增加，通過(guò)目視能夠確認(rèn)其逐漸變得透明。

即可推測(cè)：第二加熱工序中，隨著前述水溶液中的溶菌酶的立體結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步變化、溶菌酶的表面疏水性的進(jìn)一步提高，溶菌酶的水溶性暫時(shí)降低后再次提高，其結(jié)果，水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到70％。

針對(duì)在第二加熱工序中隨著溶菌酶的表面疏水性的進(jìn)一步提高，溶菌酶的水溶性暫時(shí)降低后再次提高的機(jī)理尚未明確，推測(cè)是因?yàn)椋和ㄟ^(guò)第二加熱工序，在第一加熱工序中產(chǎn)生的溶菌酶的聚集進(jìn)一步加劇，接著，所聚集的溶菌酶彼此結(jié)合而變成線(xiàn)狀的聚集體，該聚集體溶解于前述水溶液，從而導(dǎo)致前述水溶液中的溶菌酶的溶解性上升。

如圖1所示那樣，通過(guò)第二加熱工序，該水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率從70％降低至低于70％的極小值后，上升至70％為止。從能夠更可靠地改變前述水溶液中的溶菌酶的立體結(jié)構(gòu)的觀點(diǎn)出發(fā)，基于第二加熱工序的該水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率的極小值優(yōu)選低于60％、更優(yōu)選低于50％(通常為0％以上)。

第二加熱工序可以在第一加熱工序之后接著進(jìn)行。即，第二加熱工序可以與第一加熱工序連續(xù)進(jìn)行。

[第三加熱工序]

第三加熱工序中，在前述第二加熱工序之后，在前述水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％的狀態(tài)下進(jìn)一步加熱該水溶液。通過(guò)第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序，能夠得到溶菌酶加工品。

即可推測(cè)：第三加熱工序中，前述水溶液中的溶菌酶的立體結(jié)構(gòu)進(jìn)一步變化，在維持了溶菌酶的水溶性的狀態(tài)下，溶菌酶的表面疏水性進(jìn)一步提高，其結(jié)果，水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率能夠維持超過(guò)70％的值。

從能夠更可靠地改變前述水溶液中的溶菌酶的立體結(jié)構(gòu)的觀點(diǎn)出發(fā)，第三加熱工序更優(yōu)選加熱至該水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到75％以上為止，更優(yōu)選加熱至光透射率達(dá)到80％以上(通常為100％以下)。

進(jìn)而，關(guān)于第三加熱工序，優(yōu)選加熱至將通過(guò)第三加熱工序得到的水溶液用0.45μm的膜濾器進(jìn)行過(guò)濾而得到的物質(zhì)與乙醇以質(zhì)量比計(jì)為1:1的比例進(jìn)行混合時(shí)波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到85％以上為止，更優(yōu)選加熱至達(dá)到90％以上(通常為100％以下)。

將通過(guò)第三加熱工序得到的水溶液用0.45μm的膜濾器進(jìn)行過(guò)濾而得到的物質(zhì)與乙醇以質(zhì)量比計(jì)為1:1的比例進(jìn)行混合時(shí)的波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到85％以上可以作為得到了上述定義中規(guī)定的熒光強(qiáng)度為4000以上的溶菌酶加工品和/或其鹽的指標(biāo)。

第三加熱工序可以在第二加熱工序之后接著進(jìn)行。即，第三加熱工序可以與第一加熱工序和第二加熱工序連續(xù)進(jìn)行。

第三加熱工序中，在前述透射率超過(guò)70％的狀態(tài)下被加熱而變得透明的水溶液即使恢復(fù)至室溫(例如25℃)也能夠維持該透射率(換言之，能夠維持透明性)。作為其原因，推測(cè)是因?yàn)椋涸撍芤褐邪娜芫傅鹊男螒B(tài)即線(xiàn)狀的聚集體的立體結(jié)構(gòu)即使在室溫下也得以維持。

(加熱溫度和加熱時(shí)間)

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物的制造方法中，從溶菌酶加工品和/或其鹽的制造能夠?qū)崿F(xiàn)高收率且能夠?qū)⒃撍芤赫{(diào)整成第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序中分別規(guī)定的透射率的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選以第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序中的該水溶液的中心品溫達(dá)到70℃以上的方式進(jìn)行加熱，從因加熱時(shí)間短而能夠縮短制造時(shí)間的觀點(diǎn)出發(fā)，更優(yōu)選為80℃以上、進(jìn)一步優(yōu)選為90℃以上、通常可以為130℃，進(jìn)而可以約為100℃以下。應(yīng)予說(shuō)明，第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序中的加熱時(shí)間可以根據(jù)加熱溫度和處理量以滿(mǎn)足各工序中規(guī)定的透射率的方式來(lái)適當(dāng)確定。

更具體而言，第一加熱工序與第二加熱工序在相同的加熱溫度下連續(xù)進(jìn)行時(shí)，關(guān)于第一加熱工序中的加熱時(shí)間和第二加熱工序中的加熱時(shí)間的合計(jì)，在中心品溫為70℃以上且75℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且120分鐘以下，在中心品溫超過(guò)75℃且為80℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且75分鐘以下，在中心品溫超過(guò)80℃且為85℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且65分鐘以下，在中心品溫超過(guò)85℃且為90℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且45分鐘以下，在中心品溫超過(guò)90℃且為95℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且35分鐘以下，在中心品溫超過(guò)95℃且為100℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且20分鐘以下。

關(guān)于第三加熱工序中的加熱時(shí)間，在中心品溫為70℃以上且75℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且600分鐘以下，在中心品溫超過(guò)75℃且為80℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且360分鐘以下，在中心品溫超過(guò)80℃且為85℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且240分鐘以下，在中心品溫超過(guò)85℃且為90℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且195分鐘以下，在中心品溫超過(guò)90℃且為95℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且150分鐘以下，在中心品溫超過(guò)95℃且為100℃以下時(shí)優(yōu)選為5分鐘以上且100分鐘以下。

第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序在相同的加熱溫度下連續(xù)進(jìn)行時(shí)，關(guān)于第一加熱工序中的加熱時(shí)間和第二加熱工序中的加熱時(shí)間和第三加熱工序中的加熱時(shí)間的合計(jì)，在中心品溫為70℃以上且75℃以下時(shí)優(yōu)選為125分鐘以上且720分鐘以下，在中心品溫超過(guò)75℃且為80℃以下時(shí)優(yōu)選為80分鐘以上且435分鐘以下，在中心品溫超過(guò)80℃且為85℃以下時(shí)優(yōu)選為70分鐘以上且305分鐘以下，在中心品溫超過(guò)85℃且為90℃以下時(shí)優(yōu)選為50分鐘以上且240分鐘以下，在中心品溫超過(guò)90℃且為95℃以下時(shí)優(yōu)選為40分鐘以上且185分鐘以下，在中心品溫超過(guò)95℃且為100℃以下時(shí)優(yōu)選為25分鐘以上且120分鐘以下。

(噴霧干燥/冷凍干燥)

應(yīng)予說(shuō)明，本實(shí)施方式所述的溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法中，在前述第三加熱工序之后，可以進(jìn)一步包括使前述水溶液進(jìn)行噴霧干燥或冷凍干燥而得到粉末狀的溶菌酶加工品和/或其鹽的工序。

噴霧干燥和冷凍干燥按照常規(guī)方法進(jìn)行即可。

<含水流動(dòng)狀組合物的制造方法>

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物的制造方法包括：將上述溶菌酶加工品和/或其鹽(更具體而言，是通過(guò)上述溶菌酶加工品和/或其鹽的制造方法得到的溶菌酶加工品和/或其鹽)與極性有機(jī)溶劑進(jìn)行混合，從而得到前述極性有機(jī)溶劑的濃度為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下的含水流動(dòng)狀組合物的工序。即，上述實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物可通過(guò)上述制造方法來(lái)獲得。

本實(shí)施方式所述的制造方法中，從能夠更可靠地抑制諾如病毒的失活作用降低的觀點(diǎn)出發(fā)，在獲得含水流動(dòng)狀組合物的工序中，優(yōu)選的是，按照該含水流動(dòng)狀組合物中的溶菌酶加工品和/或其鹽的濃度以固體成分換算優(yōu)選為0.1質(zhì)量％以上且10質(zhì)量％以下(更優(yōu)選為0.2質(zhì)量％以上、進(jìn)一步優(yōu)選超過(guò)0.5質(zhì)量％、例如為0.6質(zhì)量％以上、進(jìn)一步優(yōu)選為0.7質(zhì)量％以上，另一方面，更優(yōu)選為4質(zhì)量％以下、進(jìn)一步優(yōu)選為2質(zhì)量％以下)的方式，將前述極性有機(jī)溶劑與前述溶菌酶加工品和/或其鹽進(jìn)行混合。此時(shí)，可以進(jìn)一步混合上述實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物一項(xiàng)中例示出的其它成分。

此外，本實(shí)施方式所述的制造方法中，從能夠更可靠地抑制諾如病毒的失活效果降低的觀點(diǎn)出發(fā)，在獲得前述含水流動(dòng)狀組合物的工序中，優(yōu)選的是，例如按照極性有機(jī)溶劑包含乙醇、該含水流動(dòng)狀組合物中的乙醇濃度優(yōu)選為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下(更優(yōu)選為60質(zhì)量％以上、進(jìn)一步優(yōu)選為65質(zhì)量％以上，此外，更優(yōu)選為85質(zhì)量％以下、進(jìn)一步優(yōu)選為80質(zhì)量％以下)的方式，將前述極性有機(jī)溶劑與前述溶菌酶加工品和/或其鹽進(jìn)行混合。

<含水流動(dòng)狀組合物的使用方法(病毒的失活方法)>

可以采用將本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物噴霧或涂布至要使病毒(諾如病毒)失活的對(duì)象區(qū)域、或者與要使病毒失活的對(duì)象物進(jìn)行混合、或者攝取等方法(使病毒失活的方法)。

<作用效果>

本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物因含有溶菌酶加工品和/或其鹽而具有病毒的失活作用。尤其是，本實(shí)施方式所述的含水流動(dòng)狀組合物通過(guò)含有溶菌酶加工品和/或其鹽而具有諾如病毒的失活作用，并且，該溶菌酶加工品和/或其鹽通過(guò)在接觸極性有機(jī)溶劑的狀態(tài)下溶解于該含水流動(dòng)狀組合物，能夠抑制諾如病毒的失活作用降低，因此可長(zhǎng)期維持諾如病毒的失活作用。

實(shí)施例

[實(shí)施例1]

向清水980g中添加溶菌酶(以雞蛋蛋清作為原料的蛋清溶菌酶)20g并混合，從而制備該溶菌酶的2質(zhì)量％水溶液。其后，將前述水溶液在80℃的中心品溫下加熱10分鐘，其結(jié)果，該水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率降低至70％(第一加熱工序)。接著，加熱至前述水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到低于70％的極小值(20％)后，進(jìn)一步將該水溶液以80℃進(jìn)行60分鐘的加熱處理(第二加熱工序)。接著，前述水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率上升，在超過(guò)70％的狀態(tài)下將該水溶液以80℃的中心品溫加熱110分鐘(第三加熱工序)。由此，得到含有2質(zhì)量％溶菌酶加工品的水溶液。

應(yīng)予說(shuō)明，第3加熱工序后的水溶液的透射率為96％，用0.45μm的膜濾器進(jìn)行過(guò)濾而得到的該水溶液與乙醇以質(zhì)量比計(jì)為1:1進(jìn)行混合時(shí)的透射率為97％。

將所得溶菌酶加工品的2質(zhì)量％水溶液用0.45μm的膜濾器進(jìn)行過(guò)濾后，將所得濾液25g與極性有機(jī)溶劑(乙醇60g、甘油1g)、水13g和甘油脂肪酸酯1g進(jìn)行混合，從而得到試驗(yàn)編號(hào)為1的含水流動(dòng)狀組合物。

變更表1所示的條件，制備試驗(yàn)編號(hào)為2～22的溶菌酶加工品。接著，按照表1的組成，制備包含各溶菌酶加工品的含水流動(dòng)狀組合物(粘度：3mPa·s)。

[表1]

應(yīng)予說(shuō)明，試驗(yàn)編號(hào)為1～22的各例中的含水流動(dòng)狀組合物和水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率通過(guò)吸光光度計(jì)(型號(hào)“UV-2450”、株式會(huì)社島津制作所制)進(jìn)行測(cè)定。表1中示出試驗(yàn)編號(hào)為1～22的各例中的第一加熱工序之前的水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率(％)、第二加熱工序中的波長(zhǎng)660nm下的光透射率的極小值(％)、以及加熱結(jié)束時(shí)的水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率(即，第三加熱工序后的水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率)(％)。應(yīng)予說(shuō)明，試驗(yàn)編號(hào)1～22連續(xù)進(jìn)行第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序，表1的加熱時(shí)間是第一加熱工序、第二加熱工序和第三加熱工序中的加熱時(shí)間的合計(jì)。

試驗(yàn)編號(hào)1～16中，將加熱前的水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％、pH為5.0以上且7.0以下、并且溶菌酶和/或其鹽的濃度以固體成分換算為0.5質(zhì)量％以上且7質(zhì)量％以下的溶菌酶和/或其鹽的水溶液通過(guò)第一加熱工序?qū)⒃撍芤杭訜嶂了芤旱牟ㄩL(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到70％為止，接著，通過(guò)第二加熱工序，將該水溶液加熱至前述水溶液暫時(shí)白濁后，白濁逐漸消失而透明性變高(波長(zhǎng)660nm下的光透射率達(dá)到70％)為止，接著，通過(guò)第三加熱工序，一邊維持該水溶液的透明性(更具體而言，一邊維持前述水溶液的波長(zhǎng)660nm下的光透射率超過(guò)70％的狀態(tài))，一邊加熱該水溶液，從而得到溶菌酶加工品。

此外，在用于獲得試驗(yàn)編號(hào)為2～16的溶菌酶加工品的制造工序中，將通過(guò)第三加熱工序得到的水溶液用0.45μm的膜濾器進(jìn)行過(guò)濾而得到的物質(zhì)與乙醇以質(zhì)量比計(jì)為1:1的比例混合時(shí)的波長(zhǎng)660nm下的光透射率均為85％以上。

應(yīng)予說(shuō)明，試驗(yàn)編號(hào)18和19中，水溶液的前述光透射率降低至低于70％(20％)后，沒(méi)有再次上升至70％以上。此外，試驗(yàn)編號(hào)21中，水溶液的前述光透射率降低至低于70％(15％)后，雖然上升至40％，但沒(méi)有上升至70％以上。

[試驗(yàn)例1]

本試驗(yàn)例中，針對(duì)試驗(yàn)編號(hào)為1～21的含水流動(dòng)狀組合物，確認(rèn)諾如病毒的失活作用和該失活作用的經(jīng)時(shí)變化。

<抗諾如病毒活性的評(píng)價(jià)>

通過(guò)噬菌斑測(cè)定法，如下那樣地評(píng)價(jià)試驗(yàn)編號(hào)為1～21的含水流動(dòng)狀組合物的抗諾如病毒活性。應(yīng)予說(shuō)明，試驗(yàn)編號(hào)為1～21的含水流動(dòng)狀組合物的抗諾如病毒活性是分別針對(duì)溶菌酶加工品的濃度(固體成分換算)為表1所示數(shù)值的含水流動(dòng)狀組合物測(cè)得的值。

(巨噬細(xì)胞的培養(yǎng))

(1)在6孔板中，將小鼠巨噬細(xì)胞確立細(xì)胞株(RAW264.7細(xì)胞)培養(yǎng)至鋪滿(mǎn)(confluent)的60～80％為止。

(諾如病毒液的制備)

(2)另一方面，如下那樣地制備諾如病毒的傳染性滴度(PFU/mL)為10⁶～10⁷PFU/mL左右的諾如病毒液。

首先，將小鼠巨噬細(xì)胞確立細(xì)胞株(RAW264.7細(xì)胞)培養(yǎng)至鋪滿(mǎn)為止，向鋪滿(mǎn)的細(xì)胞接種諾如病毒原液1mL，在37℃、5％CO₂條件下培養(yǎng)2天。此時(shí)，作為諾如病毒原液，使用了Murine norovirus strain 1(MNV-1)(Effect of Food Residues on Norovirus Survival on Stainless Steel Surfaces)。

MNV-1由華盛頓大學(xué)(Washington University)的Herbert W.Virgin博士供給。

培養(yǎng)后，目視確認(rèn)細(xì)胞已經(jīng)剝離，重復(fù)進(jìn)行4次凍融而破壞細(xì)胞，釋放出細(xì)胞中的病毒。其后，分取注入至50mL離心沉淀管中，進(jìn)行離心分離(8000g、20分鐘)，得到傳染性滴度(PFU/mL)為10⁶～10⁷PFU/mL左右的諾如病毒液。將該諾如病毒液在-80℃下保存，進(jìn)行解凍來(lái)使用。針對(duì)該諾如病毒液，按照下述方法來(lái)測(cè)定傳染性滴度。

(諾如病毒混合液的制備)

(3)為了測(cè)定含水流動(dòng)狀組合物的諾如病毒傳染性滴度，對(duì)于試驗(yàn)編號(hào)為1～21的含水流動(dòng)狀組合物1質(zhì)量份，添加通過(guò)(2)得到的諾如病毒液0.1質(zhì)量份后，在室溫下放置1分鐘，從而得到各含水流動(dòng)狀組合物與諾如病毒的混合液(諾如病毒混合液)。

(傳染性滴度的測(cè)定)

接著，通過(guò)下述方法算出通過(guò)上述(2)制備的諾如病毒液的傳染性滴度和放置1分鐘后的混合液的傳染性滴度。

將前述諾如病毒混合液(或諾如病毒液)稀釋10^x倍，作為稀釋樣品。此處，x為整數(shù)，采用后述(8)中通過(guò)目視而能夠數(shù)出噬菌斑數(shù)量的數(shù)值。即，通過(guò)(8)來(lái)調(diào)整稀釋倍率，使得噬菌斑數(shù)量達(dá)到10以上且100以下左右。應(yīng)予說(shuō)明，細(xì)胞因該混合液中的殘留醇的影響而發(fā)生變性，因此諾如病毒混合液(或諾如病毒液)未進(jìn)行10倍稀釋。

(4)在(1)的板中，將撤掉全部培養(yǎng)液并放置特定時(shí)間后進(jìn)行了稀釋的稀釋樣品以500μL/孔各接種2個(gè)孔。

(5)一邊以小鼠巨噬細(xì)胞確立細(xì)胞株(RAW264.7細(xì)胞)不會(huì)干燥的方式進(jìn)行振蕩，一邊在室溫下孵育1個(gè)小時(shí)，從而使小鼠巨噬細(xì)胞確立細(xì)胞株感染諾如病毒。

(6)將板上的500μL/孔的接種液全部去除，并以2ml/孔疊加1.5％Sea Plaque Agarose-DMEM(37℃)，待其固化后，在37℃、5％CO₂的條件下培養(yǎng)2天。

(7)向培養(yǎng)2天后的板中以2mL/孔疊加作為染色液的0.03％中性紅溶液，在37℃、5％CO₂的條件下孵育1小時(shí)。

(8)在(7)的孵育后撤掉全部的0.03％中性紅溶液，通過(guò)目視來(lái)數(shù)出噬菌斑數(shù)量。根據(jù)所得噬菌斑數(shù)量和稀釋倍率來(lái)算出前述放置1分鐘后的諾如病毒混合液(或諾如病毒液)的傳染性滴度(PFU/mL)。應(yīng)予說(shuō)明，放置1分鐘前的諾如病毒混合液的傳染性滴度使用了前述諾如病毒液的傳染性滴度乘以諾如病毒混合液中的諾如病毒液與含水流動(dòng)狀組合物的混合比率(0.1/1.1)而得到的值。

(9)通過(guò)下式來(lái)算出試驗(yàn)編號(hào)為1～21的含水流動(dòng)狀組合物的抗諾如病毒活性?？怪Z如病毒活性＝Log₁₀(放置1分鐘前的諾如病毒混合液的傳染性滴度)-Log₁₀(放置1分鐘后的諾如病毒混合液的傳染性滴度)

試驗(yàn)編號(hào)為1～9的含水流動(dòng)狀組合物在放置1分鐘后的傳染性滴度為10⁴以下，如表1所示那樣，根據(jù)上述式子算出的抗諾如病毒活性為3以上。即可確認(rèn)：試驗(yàn)編號(hào)為1～9的含水流動(dòng)狀組合物通過(guò)包含溶菌酶加工品和/或其鹽，且上述規(guī)定的熒光強(qiáng)度為5000以上，從而在剛制造后具有諾如病毒失活作用。

此外可確認(rèn)：試驗(yàn)編號(hào)為1～9的含水流動(dòng)狀組合物中，通過(guò)使前述溶菌酶加工品和/或其鹽在接觸極性有機(jī)溶劑的狀態(tài)下溶解于該含水流動(dòng)狀組合物，并且該含水流動(dòng)狀組合物中的該極性有機(jī)溶劑的含量為55質(zhì)量％以上且90質(zhì)量％以下，即使在40℃×75％RH下保存2星期、4星期和8星期后也具有諾如病毒失活作用，諾如病毒失活作用的降低受到抑制。

更具體而言，可確認(rèn)：試驗(yàn)編號(hào)1～9的含水流動(dòng)狀組合物在40℃×75％RH下保存4星期后的抗諾如病毒活性相對(duì)于保存前(剛制造后)的抗諾如病毒活性為50％以上(70％以上)。

與此相對(duì)，可確認(rèn)：試驗(yàn)編號(hào)為10～15的含水流動(dòng)狀組合物由于極性有機(jī)溶劑的含量低于55質(zhì)量％(為50質(zhì)量％)，因此在40℃×75％RH下保存2星期、4星期、8星期后，諾如病毒的失活作用降低。更具體而言，可確認(rèn)：試驗(yàn)編號(hào)為10～15的含水流動(dòng)狀組合物在40℃×75％RH下保存4星期后的抗諾如病毒活性相對(duì)于保存前(剛制造后)的抗諾如病毒活性降低至低于50％。

此外可確認(rèn)：試驗(yàn)編號(hào)為16的含水流動(dòng)狀組合物由于極性有機(jī)溶劑的含量低于20質(zhì)量％(為0質(zhì)量％)，因此，在40℃×75％RH下保存4星期后的抗諾如病毒活性相對(duì)于保存前(剛制造后)的抗諾如病毒活性大幅降低。

進(jìn)而可確認(rèn)：通過(guò)試驗(yàn)編號(hào)17～21制備的溶菌酶加工品的熒光強(qiáng)度低于4000，抗諾如病毒活性低。

此外，向通過(guò)試驗(yàn)編號(hào)17～21制備的溶菌酶加工品中混合極性有機(jī)溶劑時(shí)發(fā)生白濁，因此，無(wú)法測(cè)定含有該溶菌酶加工品的含水流動(dòng)狀組合物的熒光強(qiáng)度和抗諾如病毒活性。

應(yīng)予說(shuō)明，試驗(yàn)編號(hào)22中，制備了溶菌酶加工品的濃度為10質(zhì)量％的水溶液，結(jié)果在室溫(25℃)的水溶液中產(chǎn)生沉淀，因此無(wú)法測(cè)定熒光強(qiáng)度和抗諾如病毒活性。

[試驗(yàn)例2]

針對(duì)本試驗(yàn)例中得到的溶菌酶加工品進(jìn)行電泳。本試驗(yàn)例中，變更試驗(yàn)編號(hào)1中的加熱條件(加熱溫度、加熱時(shí)間和蛋清溶菌酶的濃度)來(lái)制備溶菌酶加工品。

更具體而言，向?qū)⒌扒迦芫傅?質(zhì)量％水溶液以80℃的加熱溫度進(jìn)行了加熱時(shí)間為0分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘、90分鐘和120分鐘的加熱時(shí)采集的該水溶液50μL中添加樣品緩沖液950μL，以100℃加熱10分鐘后，進(jìn)行冰冷，將10μL(以溶菌酶加工品計(jì)為10μg)填充至電泳凝膠。應(yīng)予說(shuō)明，作為樣品緩沖液，使用了未添加2-巰基乙醇的緩沖液(非還原)。電泳的凝膠使用SDS-PAGEmini(TEFCO公司制、凝膠濃度為4-10％、凝膠厚度為1mm)，以20mA的恒定電流進(jìn)行泳動(dòng)。染色液使用了考馬斯藍(lán)R250。

圖2是示出電泳結(jié)果的照片。如圖2所示那樣，在加熱時(shí)間為60分鐘、90分鐘和120分鐘的時(shí)刻，明顯檢測(cè)出表示約29KDa的蛋白質(zhì)(推測(cè)為二聚體)和/或約36.5KDa的蛋白質(zhì)(推測(cè)為三聚體)的帶。此外可確認(rèn)：加熱時(shí)間越長(zhǎng)，則表示這些蛋白質(zhì)的帶越濃(即，生成的前述蛋白質(zhì)的量增加)。此外可推測(cè)：在相同加熱溫度下，加熱時(shí)間越長(zhǎng)，則該蛋白質(zhì)的表面疏水性越會(huì)增加，能夠得到諾如病毒失活作用高的蛋白質(zhì)。

[實(shí)施例2]

使用實(shí)施例1的試驗(yàn)編號(hào)2中得到的溶菌酶加工品，將該溶菌酶加工品的濃度設(shè)為0.3質(zhì)量％、0.6質(zhì)量％和2質(zhì)量％，除此之外，利用與試驗(yàn)編號(hào)2相同的方法，得到試驗(yàn)編號(hào)為23～26的含水流動(dòng)狀組合物。針對(duì)試驗(yàn)編號(hào)為23～26的含水流動(dòng)狀組合物，測(cè)定通過(guò)上述方法測(cè)得的熒光強(qiáng)度和抗諾如病毒活性時(shí)，該熒光強(qiáng)度均為5000以上，此外，剛制造后以及在40℃×75％RH下保存8星期后的抗諾如病毒活性均為3.0以上。

[配混例1]

按照下述的配混比，使通過(guò)試驗(yàn)編號(hào)9得到的含水流動(dòng)狀組合物與下述成分進(jìn)行混合，從而制備凝膠狀的消毒劑(含水流動(dòng)狀組合物)。

含水流動(dòng)狀組合物(試驗(yàn)編號(hào)為9) 98質(zhì)量％

甘油 1質(zhì)量％

聚羧乙烯 1質(zhì)量％

[配混例2]

按照下述的配混比，使通過(guò)試驗(yàn)編號(hào)9得到的含水流動(dòng)狀組合物與下述成分的混合物浸滲至無(wú)紡布中，制備成濕巾。

含水流動(dòng)狀組合物(試驗(yàn)編號(hào)5) 99質(zhì)量％

PEG-40氫化蓖麻油 1質(zhì)量％

產(chǎn)業(yè)上的可利用性

本發(fā)明的含水流動(dòng)狀組合物例如作為對(duì)手指、身軀、醫(yī)療器械、學(xué)校、醫(yī)院、福利設(shè)施等設(shè)施、工廠、住宅等進(jìn)行消毒的消毒劑、食品添加物、病毒(諾如病毒)的去除劑是有用的。

本發(fā)明的實(shí)施方式的說(shuō)明如上所述。本發(fā)明包括與實(shí)施方式中說(shuō)明的技術(shù)方案實(shí)質(zhì)上相同的技術(shù)方案，例如功能、方法和結(jié)果相同的技術(shù)方案或者目的和結(jié)果相同的技術(shù)方案。此外，本發(fā)明包括將實(shí)施方式中說(shuō)明的技術(shù)方案的非本質(zhì)部分進(jìn)行替換而得到的技術(shù)方案。此外，本發(fā)明包括與實(shí)施方式中說(shuō)明的技術(shù)方案起到相同作用效果的技術(shù)方案或者能夠?qū)崿F(xiàn)同一目的的技術(shù)方案。此外，本發(fā)明包括對(duì)實(shí)施方式中說(shuō)明的技術(shù)方案附加公知技術(shù)而得到的技術(shù)方案。