本發(fā)明涉及生物繁殖培養(yǎng)的技術(shù)領(lǐng)域，特別是昆蟲病原線蟲清洗方法的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

近年來，作為新型生物殺蟲劑，昆蟲病原線蟲已廣泛應(yīng)用于農(nóng)林、牧草和衛(wèi)生害蟲的安全防治，受到國內(nèi)外學(xué)者及商業(yè)部門的高度重視，并走向商品化生產(chǎn)。昆蟲病原線蟲腸道內(nèi)攜帶共生細(xì)菌，它們互惠共生，作為昆蟲的“蛔蟲”與其體內(nèi)專化性攜帶的共生細(xì)菌一起致死寄主昆蟲。它們搜索寄主能力強，侵染致死有效性高，起效時間快，對人畜、天敵、環(huán)境安全，是一類重要的害蟲生物防治因子，在工業(yè)化國家的生物農(nóng)藥市場中，此類線蟲的市場銷售額排生物殺蟲劑第二位。目前全球已有超過60個國家的100多個實驗室在研究此類有益生物。在我國，昆蟲病原線蟲也已經(jīng)商業(yè)化生產(chǎn)，并應(yīng)用于防治多種農(nóng)林、草地、花卉以及衛(wèi)生害蟲等。

昆蟲病原線蟲是昆蟲的?；约纳鞌?，是以昆蟲為寄主的致病性線蟲，一般專指斯氏線蟲科和異小桿線蟲科兩類。它們是目前國際上新型的生物殺蟲劑。與其它生物殺蟲劑相比，這類線蟲具有廣泛的寄主范圍；對寄主具主動搜索能力，特別對土棲性及鉆蛀性害蟲；對人畜、植物及有益生物安全，在歐美的一些國家可以豁免注冊使用；易于大量培養(yǎng)；使用方便；在環(huán)境中可循環(huán)利用；能與多種化學(xué)和生物殺蟲劑混用；并可用傳統(tǒng)藥械或灌溉設(shè)施來施用等優(yōu)點。

昆蟲病原線蟲的培養(yǎng)經(jīng)歷了從活體培養(yǎng)到離體培養(yǎng)的過程，離體培養(yǎng)又從無菌培養(yǎng)到單菌培養(yǎng)。目前，線蟲的商業(yè)化生產(chǎn)主要是通過無菌操作技術(shù)于人工培養(yǎng)基中加入單一共生細(xì)菌和無菌線蟲完成的，即體外單菌培養(yǎng)系統(tǒng)。根據(jù)培養(yǎng)基質(zhì)可分為固體培養(yǎng)和液體發(fā)酵培養(yǎng)，兩者在技術(shù)上不盡相同，如培養(yǎng)容器、培養(yǎng)基配比、培養(yǎng)過程等，但培養(yǎng)過程的控制參數(shù)基本相同，一般來說，昆蟲病原線蟲的商業(yè)化生產(chǎn)過程包括共生菌的分離制備、線蟲繁殖、收獲、清洗及儲存。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，提出一種昆蟲病原線蟲清洗方法，能夠提高侵染期線蟲產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本，發(fā)展前景好。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種昆蟲病原線蟲清洗方法，具體步驟包括：

(a)培養(yǎng)容器中包括培養(yǎng)基、碎海綿、共生細(xì)菌、線蟲，將培養(yǎng)好的線蟲收獲，先將線蟲連同固體培養(yǎng)物浸泡在裝有清水的較大容器中，容器中設(shè)有活動篩網(wǎng)；容器中設(shè)有通氣震蕩裝置；

(b)靜置分離，讓線蟲通過篩網(wǎng)，留下海綿等雜質(zhì)，95％左右的感染期線蟲從培養(yǎng)物中爬出；

(c)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中將除去雜質(zhì)的線蟲原液按10:1的比例加入硅藻土粉，通過壓濾機進行固液分離，壓濾機壓力設(shè)置小于3公斤；所得含線蟲的硅藻土粉進行計數(shù)分包存儲。

作為優(yōu)選，所述(a)步驟中，當(dāng)線蟲培養(yǎng)到最佳時間后，感染期線蟲的產(chǎn)量最高，其他蟲態(tài)的線蟲比例最小，這時應(yīng)立即收獲，線蟲最佳培養(yǎng)周期為24d～28d。

作為優(yōu)選，所述(b)步驟中，保存的線蟲必須盡量去掉培養(yǎng)物中的雜質(zhì)和其他蟲態(tài)，否則會影響線蟲的保存時間和質(zhì)量。

作為優(yōu)選，所述(b)步驟中，靜置分離時間1小時，線蟲沉降到容器底部，將篩網(wǎng)連同固體培養(yǎng)物移走，清洗3～4次，通過通氣震蕩海綿培養(yǎng)基可提高線蟲收獲率。

作為優(yōu)選，所述(c)步驟中，利用硅藻土粉吸附線蟲的保存方法，并且在含線蟲的硅藻土粉中加入1％的苯并異噻啉，防止長霉菌，并將封包好的產(chǎn)品保存于4℃的冷庫中。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明針對的是昆蟲病原線蟲固體培養(yǎng)方法的線蟲收獲清洗儲存問題，固體培養(yǎng)方法的生產(chǎn)成本要明顯低于液體培養(yǎng)方法，固體培養(yǎng)方法生產(chǎn)的線蟲致病力也要明顯高于液體培養(yǎng)方法。因此，當(dāng)市場需求量增大，固體培養(yǎng)方法更具產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)發(fā)展前景，本發(fā)明的清洗方法能夠達到較好的收獲效果，對線蟲的損傷小，后期制成的線蟲產(chǎn)品中線蟲成活率高。

本發(fā)明的特征及優(yōu)點將通過實施例進行詳細(xì)說明。

【具體實施方式】

本發(fā)明一種昆蟲病原線蟲清洗方法，具體步驟包括：

(d)步驟一、培養(yǎng)容器中包括培養(yǎng)基、碎海綿、共生細(xì)菌、線蟲，將培養(yǎng)好的線蟲收獲，先將線蟲連同固體培養(yǎng)物浸泡在裝有清水的較大容器中，容器中設(shè)有活動篩網(wǎng)；容器中設(shè)有通氣震蕩裝置；

步驟二、靜置分離，讓線蟲通過篩網(wǎng)，留下海綿等雜質(zhì)，95％左右的感染期線蟲從培養(yǎng)物中爬出；

步驟三、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中將除去雜質(zhì)的線蟲原液按10:1的比例加入硅藻土粉，通過壓濾機進行固液分離，壓濾機壓力設(shè)置小于3公斤，所得含線蟲的硅藻土粉進行計數(shù)分包存儲。

所述(a)步驟中，當(dāng)線蟲培養(yǎng)到最佳時間后，感染期線蟲的產(chǎn)量最高，其他蟲態(tài)的線蟲比例最小，這時應(yīng)立即收獲，線蟲最佳培養(yǎng)周期為24d～28d。所述(b)步驟中，保存的線蟲必須盡量去掉培養(yǎng)物中的雜質(zhì)和其他蟲態(tài)，否則會影響線蟲的保存時間和質(zhì)量。所述(b)步驟中，靜置分離時間1小時，線蟲沉降到容器底部，將篩網(wǎng)連同固體培養(yǎng)物移走，通過通氣震蕩海綿培養(yǎng)基可提高線蟲收獲率。所述(c)步驟中，利用硅藻土粉吸附線蟲的保存方法，并且在含線蟲的硅藻土粉中加入1％的苯并異噻啉，防止長霉菌，并將封包好的產(chǎn)品保存于4℃的冷庫中。

本發(fā)明針對的是昆蟲病原線蟲固體培養(yǎng)方法的線蟲收獲清洗儲存問題，固體培養(yǎng)方法的生產(chǎn)成本要明顯低于液體培養(yǎng)方法，固體培養(yǎng)方法生產(chǎn)的線蟲致病力也要明顯高于液體培養(yǎng)方法。因此，當(dāng)市場需求量增大，固體培養(yǎng)方法更具產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)發(fā)展前景，本發(fā)明的清洗方法能夠解決固體培養(yǎng)快速回收干凈線蟲的難題，對線蟲的損傷小，后期制成的線蟲產(chǎn)品中線蟲成活率高。

上述實施例是對本發(fā)明的說明，不是對本發(fā)明的限定，任何對本發(fā)明簡單變換后的方案均屬于本發(fā)明的保護范圍。