本發(fā)明涉及果樹種植領域，具體涉及一種櫻桃種子超低溫保存方法及其解凍方法。
背景技術：
：櫻桃采收后，將果皮果肉劃破取出果核，并以清水洗除附著果核外的果肉，即可獲得櫻桃種子。櫻桃種子在收獲后，需要在短時間呢播種下去，否則種子內的營養(yǎng)物質將會快速的消耗殆盡，導致種子不萌芽。但是在實際的種植過程中，由于土地資源有限和受天氣的影響，不可能做到種子收獲后即用來播種。因此，急需一種櫻桃種子的保存方式。技術實現(xiàn)要素：為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種櫻桃種子超低溫保存方法及其解凍方法。本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的。一種櫻桃超低溫種子的保存方法，具體包括以下步驟：（1）配制冷凍保護劑：冷凍保護劑由以下重量份的組分制成：MS液體培養(yǎng)基50-60份、氨基甲酸丁酯6-8份、巖芹酸10-15份、正丁砜11-13份、3-乙基-3-戊醇9-11份、氮雜環(huán)醇4-7份、聚丙二醇6-8份，采用以下方式制成：將氨基甲酸丁酯、巖芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮雜環(huán)醇、聚丙二醇放入MS液體培養(yǎng)基中，攪拌5-7min，用200W超聲波處理10min后放入冰箱中備用；其中MS培養(yǎng)基購于北京啟維益成科技有限公司。（2）櫻桃種子處理：將收獲的櫻桃種子，放入浸泡液中浸泡30-40min，其中浸泡液由以下重量份的組分制成：對硝基苯酚10-15份、甲基丙酮酸酯6-9份、肉桂酸銨3-5份、水30-35份；（3）冷凍處理：將處理后的種子，放入其重量18-20倍中的冷凍保護劑中，然后放入-9℃的環(huán)境中存放10-12小時，再放入-30℃的環(huán)境中存放8-10小時，最后放入液氮中保存。一種櫻桃種子的解凍方法，包括以下步驟：用20-25℃的水不停地沖洗凍存管，直至冷凍保護劑解凍后，取出種子，用溫度為30-35℃的95%的乙醇溶液沖洗種子3-5min，然后再用清水沖洗種子，用濾紙吸干種子上的水分，種子解凍完成。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供的冷凍保護劑可以有效的保護細胞內的營養(yǎng)物質和各種酶類物質，對種子本身不具有任何毒害作用，配制完成后，用超聲波處理，可以使冷凍保護劑在MS液體培養(yǎng)基中均勻的分布，增加其滲透作用，使其能有效的保護櫻桃種子。冷凍處理時，預先將其放入-9℃和-30℃的環(huán)境中，可以使冷凍保護劑慢慢的滲入種子表皮內部，增加種子對低溫的抵抗能力。解凍時，用乙醇溶液沖洗種子，可以使種子保持較好的充實飽滿度。采用本發(fā)明提供的方法，保存種子，可以使種子播種后發(fā)芽率高，種子遺傳穩(wěn)定性好，種子的發(fā)芽速度快，出苗整齊健壯。具體實施方式下面通過具體的實施例對本發(fā)明進行詳細說明，但這些舉例性實施方式的用途和目的僅用來例舉本發(fā)明，并非對本發(fā)明的實際保護范圍構成任何形式的任何限定，更非將本發(fā)明的保護范圍局限于此。實施例1一種櫻桃超低溫種子的保存方法，具體包括以下步驟：（1）配制冷凍保護劑：冷凍保護劑由以下重量份的組分制成：MS液體培養(yǎng)基50份、氨基甲酸丁酯6份、巖芹酸10份、正丁砜11份、3-乙基-3-戊醇9份、氮雜環(huán)醇4份、聚丙二醇6份，采用以下方式制成：將氨基甲酸丁酯、巖芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮雜環(huán)醇、聚丙二醇放入MS液體培養(yǎng)基中，攪拌5min，用200W超聲波處理10min后放入冰箱中備用；（2）櫻桃種子處理：將收獲的櫻桃種子，放入浸泡液中浸泡30min，其中浸泡液由以下重量份的組分制成：對硝基苯酚10份、甲基丙酮酸酯6份、肉桂酸銨3份、水30份；（3）冷凍處理：將處理后的種子，放入其重量18倍中的冷凍保護劑中，然后放入-9℃的環(huán)境中存放10小時，再放入-30℃的環(huán)境中存放8小時，最后放入液氮中保存。一種櫻桃種子的解凍方法，包括以下步驟：用20℃的水不停地沖洗凍存管，直至冷凍保護劑解凍后，取出種子，用溫度為30℃的95%的乙醇溶液沖洗種子3min，然后再用清水沖洗種子，用濾紙吸干種子上的水分，種子解凍完成。實施例2一種櫻桃超低溫種子的保存方法，具體包括以下步驟：（1）配制冷凍保護劑：冷凍保護劑由以下重量份的組分制成：MS液體培養(yǎng)基55份、氨基甲酸丁酯7份、巖芹酸13份、正丁砜12份、3-乙基-3-戊醇10份、氮雜環(huán)醇6份、聚丙二醇7份，采用以下方式制成：將氨基甲酸丁酯、巖芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮雜環(huán)醇、聚丙二醇放入MS液體培養(yǎng)基中，攪拌6min，用200W超聲波處理10min后放入冰箱中備用；（2）櫻桃種子處理：將收獲的櫻桃種子，放入浸泡液中浸泡35min，其中浸泡液由以下重量份的組分制成：對硝基苯酚13份、甲基丙酮酸酯8份、肉桂酸銨4份、水32份；（3）冷凍處理：將處理后的種子，放入其重量19倍中的冷凍保護劑中，然后放入-9℃的環(huán)境中存放11小時，再放入-30℃的環(huán)境中存放9小時，最后放入液氮中保存。一種櫻桃種子的解凍方法，包括以下步驟：用23℃的水不停地沖洗凍存管，直至冷凍保護劑解凍后，取出種子，用溫度為33℃的95%的乙醇溶液沖洗種子4min，然后再用清水沖洗種子，用濾紙吸干種子上的水分，種子解凍完成。實施例3一種櫻桃超低溫種子的保存方法，具體包括以下步驟：（1）配制冷凍保護劑：冷凍保護劑由以下重量份的組分制成：MS液體培養(yǎng)基60份、氨基甲酸丁酯8份、巖芹酸15份、正丁砜13份、3-乙基-3-戊醇11份、氮雜環(huán)醇7份、聚丙二醇8份，采用以下方式制成：將氨基甲酸丁酯、巖芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮雜環(huán)醇、聚丙二醇放入MS液體培養(yǎng)基中，攪拌7min，用200W超聲波處理10min后放入冰箱中備用；（2）櫻桃種子處理：將收獲的櫻桃種子，放入浸泡液中浸泡40min，其中浸泡液由以下重量份的組分制成：對硝基苯酚15份、甲基丙酮酸酯9份、肉桂酸銨5份、水35份；（3）冷凍處理：將處理后的種子，放入其重量20倍中的冷凍保護劑中，然后放入-9℃的環(huán)境中存放12小時，再放入-30℃的環(huán)境中存放10小時，最后放入液氮中保存。一種櫻桃種子的解凍方法，包括以下步驟：用25℃的水不停地沖洗凍存管，直至冷凍保護劑解凍后，取出種子，用溫度為35℃的95%的乙醇溶液沖洗種子5min，然后再用清水沖洗種子，用濾紙吸干種子上的水分，種子解凍完成。試驗將收獲的1000粒櫻桃種子，隨機平均分為5組，分別用實施例1、2、3的方式處理試驗組1、2、3的種子，試驗組4的種子收獲曬干后，3天后全部進行種植，試驗組5的種子，收獲曬干后，放置在不透明的容器中儲藏。每年春季，從試驗組1、2、3、5種子中，選取50粒種子進行播種試驗。各試驗組的種子采用完全相同的播種方式，試驗結果如表1所示：表1一種櫻桃種子超低溫保存方法及其解凍方法驗證試驗項目第一年種子發(fā)芽率（%）第二年種子發(fā)芽率（%）第三年種子發(fā)芽率（%）第四年種子發(fā)芽率（%）試驗組1-95.194.993.4試驗組2-95.995.294.7試驗組3-95.495.094.1試驗組495.6---試驗組5-10.1種子腐爛種子腐爛從表1中可以看出，本發(fā)明提供的一種櫻桃種子超低溫保存方法及其解凍方法，可以完整的保護種子的活力，可以長時間的使種子保持較高的發(fā)芽率。當前第1頁1 2 3