本發(fā)明涉及一種喬木的快速繁殖方法，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種楨楠的快速繁殖方法，屬于樹(shù)木繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
楨楠為樟科常綠大喬木，屬于國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物，也是中國(guó)的特產(chǎn)樹(shù)種，并且具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。楨楠木材優(yōu)良，紋理直而結(jié)構(gòu)細(xì)密，不易變形和開(kāi)裂，具芳香氣，為建筑、家具等的珍貴用材。其木材和枝葉含芳香油，蒸餾可得楠木油，是高級(jí)香料。同時(shí)，該種為高大喬木，樹(shù)姿優(yōu)美，樹(shù)干通直，葉終年不謝，是著名的庭園觀賞和城市綠化樹(shù)種。
楨楠極其珍貴，其生長(zhǎng)速度非常慢，一般楨楠長(zhǎng)成為棟梁材要上百年。在稀少得不能獲得的今天，為了挽救楨楠不致絕種，早在天然林保護(hù)工程實(shí)施前的1984年國(guó)務(wù)院環(huán)境保護(hù)委員會(huì)公布的“珍稀瀕危保護(hù)植物名隸”中，楨楠就明顯的列入其中。1999年8月的“重點(diǎn)保護(hù)植物名錄”中，再次將楨楠列為保護(hù)對(duì)象。因此，研究楨楠的快速繁殖方法，不僅可以縮短楨楠的生長(zhǎng)周期，加快其成材速度，還可以充實(shí)國(guó)內(nèi)在楨楠繁育方面的理論體系，完善楨楠的保護(hù)工作。
國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局于2013.12.18公開(kāi)了一件公開(kāi)號(hào)為CN103444531A，名稱(chēng)為“一種金絲楠木組織培養(yǎng)的快繁方法”的發(fā)明，該發(fā)明涉及一種金絲楠木組織培養(yǎng)的快繁方法，包括以下步驟：（1）選種，預(yù)處理、浸泡后放入基質(zhì)中萌發(fā)，待胚分化后轉(zhuǎn)移培養(yǎng)；（2）取幼嫩萌條作為外植體進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；（3）取新生的幼嫩苗切段進(jìn)行生根培養(yǎng)；（4）將不定叢芽接種到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)；（5）將增殖培養(yǎng)獲得的不定叢芽接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；（6）煉苗與移栽。本發(fā)明采用幼苗莖段組織生根培養(yǎng)，和不定叢芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)相結(jié)合，合理馴化，循環(huán)取材，最大程度的保留了金絲楠木的完整基因組，提高了金絲楠木的成活率和品質(zhì)，加快了金絲楠木的生長(zhǎng)速度。
上述現(xiàn)有技術(shù)金絲楠木與楨楠有一定區(qū)別。另外，先培育種子，再進(jìn)行組織培養(yǎng)，培育繁殖時(shí)間較長(zhǎng)；采用的培養(yǎng)基使得成活率較低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)組織培養(yǎng)的問(wèn)題，提供一種楨楠的快速繁殖方法，采取組織培養(yǎng)，能夠有效縮短楨楠的繁殖時(shí)間，提高出芽率和成活率，且培育壯苗。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
一種楨楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步驟：
A、外植體的選取與滅菌
選用楨楠的嫩莖上芽體作為培養(yǎng)材料，先用自來(lái)水沖洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自來(lái)水沖洗，接著置于75%的乙醇溶液中處理，然后再經(jīng)0.1%的升汞消毒后用無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌吸水紙吸干水分，切去外植體變色的部分后,置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用；
B、芽體的萌發(fā)
將滅菌處理后的芽體接種在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基上，pH值為5.8-6.0，培養(yǎng)溫度為23-27℃，每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度1700Lx，接種后芽體萌發(fā)，然后形成帶葉的小苗；
C、愈傷組織誘導(dǎo)
取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽體，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)14-16天，培養(yǎng)溫度為23-27℃；
D、分化和增殖培養(yǎng)
將步驟B得到的小苗切下轉(zhuǎn)接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，pH值為5.8-6.0，培養(yǎng)溫度23-27℃，每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，24-26天為一個(gè)生長(zhǎng)周期；
E、生根培養(yǎng)
將分化和增值培養(yǎng)后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培養(yǎng)基上，pH值為5.8-6.0，培養(yǎng)溫度23-27℃，每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，19-21天形成完整植株；
F、煉苗和移栽
將有生根的楨楠幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗2-4天后，取出幼苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土或富養(yǎng)土中，移栽43-47天，成活。
本發(fā)明在步驟A中，所述洗衣粉溶液的濃度為5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的時(shí)間為5-6min。
本發(fā)明在步驟A中，所述用自來(lái)水沖洗的時(shí)間都為30-35min。
本發(fā)明在步驟A中，所述75%的乙醇溶液中處理的時(shí)間為10-30秒。
本發(fā)明在步驟B中，接種后7-9天芽體萌發(fā)，14-16天形成帶葉的小苗。
本發(fā)明在步驟C中，愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程為暗培養(yǎng)。
本發(fā)明在步驟D中，增殖系數(shù)為5以上。
本發(fā)明所述的WPM培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、維生素B1 1.0mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、瓊脂 6g/L、pH為5.2。
本發(fā)明所述的MS培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽:NH4N03 l650mg/L、KNO3 1900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、維生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
本發(fā)明帶來(lái)的有益技術(shù)效果：
1、本發(fā)明的目的是提供楨楠的快速繁殖方法，非常適合大規(guī)模生產(chǎn)，具有配方效果佳，出芽率高，培養(yǎng)時(shí)間短，植株生長(zhǎng)旺盛，可操作性強(qiáng)，應(yīng)用價(jià)值高的優(yōu)點(diǎn)。
2、本發(fā)明直接利用優(yōu)良楨楠母樹(shù)上的芽體進(jìn)行組培，無(wú)疑縮短了培育時(shí)間，并且節(jié)約成本。本發(fā)明選取了WPM培養(yǎng)基和MS培養(yǎng)基，在初代培養(yǎng)過(guò)程中，以WPM為基本培養(yǎng)基更有利于芽體的分化和成活。而在生根培養(yǎng)過(guò)程中，MS培養(yǎng)基更利于生根及后期培育壯苗，從而提高楨楠小苗的成活率。生根率達(dá)到95%以上，移載成活率達(dá)到95%以上。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種楨楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步驟：
A、外植體的選取與滅菌
選用楨楠的嫩莖上芽體作為培養(yǎng)材料，先用自來(lái)水沖洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自來(lái)水沖洗，接著置于75%的乙醇溶液中處理，然后再經(jīng)0.1%的升汞消毒后用無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌吸水紙吸干水分，切去外植體變色的部分后,置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用；
B、芽體的萌發(fā)
將滅菌處理后的芽體接種在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基上，pH值為5.8，培養(yǎng)溫度為23℃，每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度1700Lx，接種后芽體萌發(fā)，然后形成帶葉的小苗；
C、愈傷組織誘導(dǎo)
取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽體，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)14天，培養(yǎng)溫度為23℃；
D、分化和增殖培養(yǎng)
將步驟B得到的小苗切下轉(zhuǎn)接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，pH值為5.8，培養(yǎng)溫度23℃，每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，24天為一個(gè)生長(zhǎng)周期；
E、生根培養(yǎng)
將分化和增值培養(yǎng)后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培養(yǎng)基上，pH值為5.8，培養(yǎng)溫度23℃，每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，19天形成完整植株；
F、煉苗和移栽
將有生根的楨楠幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗2天后，取出幼苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土或富養(yǎng)土中，移栽43天，成活。
實(shí)施例2
一種楨楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步驟：
A、外植體的選取與滅菌
選用楨楠的嫩莖上芽體作為培養(yǎng)材料，先用自來(lái)水沖洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自來(lái)水沖洗，接著置于75%的乙醇溶液中處理，然后再經(jīng)0.1%的升汞消毒后用無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌吸水紙吸干水分，切去外植體變色的部分后,置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用；
B、芽體的萌發(fā)
將滅菌處理后的芽體接種在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基上，pH值為6.0，培養(yǎng)溫度為27℃，每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度1700Lx，接種后芽體萌發(fā)，然后形成帶葉的小苗；
C、愈傷組織誘導(dǎo)
取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽體，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)16天，培養(yǎng)溫度為27℃；
D、分化和增殖培養(yǎng)
將步驟B得到的小苗切下轉(zhuǎn)接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，pH值為6.0，培養(yǎng)溫度27℃，每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，26天為一個(gè)生長(zhǎng)周期；
E、生根培養(yǎng)
將分化和增值培養(yǎng)后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培養(yǎng)基上，pH值為6.0，培養(yǎng)溫度27℃，每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，21天形成完整植株；
F、煉苗和移栽
將有生根的楨楠幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗4天后，取出幼苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土或富養(yǎng)土中，移栽47天，成活。
實(shí)施例3
一種楨楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步驟：
A、外植體的選取與滅菌
選用楨楠的嫩莖上芽體作為培養(yǎng)材料，先用自來(lái)水沖洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自來(lái)水沖洗，接著置于75%的乙醇溶液中處理，然后再經(jīng)0.1%的升汞消毒后用無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌吸水紙吸干水分，切去外植體變色的部分后,置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用；
B、芽體的萌發(fā)
將滅菌處理后的芽體接種在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基上，pH值為5.9，培養(yǎng)溫度為25℃，每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度1700Lx，接種后芽體萌發(fā)，然后形成帶葉的小苗；
C、愈傷組織誘導(dǎo)
取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽體，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天，培養(yǎng)溫度為25℃；
D、分化和增殖培養(yǎng)
將步驟B得到的小苗切下轉(zhuǎn)接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，pH值為5.9，培養(yǎng)溫度25℃，每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，25天為一個(gè)生長(zhǎng)周期；
E、生根培養(yǎng)
將分化和增值培養(yǎng)后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培養(yǎng)基上，pH值為5.9，培養(yǎng)溫度25℃，每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，20天形成完整植株；
F、煉苗和移栽
將有生根的楨楠幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗3天后，取出幼苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土或富養(yǎng)土中，移栽45天，成活。
實(shí)施例4
一種楨楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步驟：
A、外植體的選取與滅菌
選用楨楠的嫩莖上芽體作為培養(yǎng)材料，先用自來(lái)水沖洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自來(lái)水沖洗，接著置于75%的乙醇溶液中處理，然后再經(jīng)0.1%的升汞消毒后用無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌吸水紙吸干水分，切去外植體變色的部分后,置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用；
B、芽體的萌發(fā)
將滅菌處理后的芽體接種在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基上，pH值為5.9，培養(yǎng)溫度為24℃，每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度1700Lx，接種后芽體萌發(fā)，然后形成帶葉的小苗；
C、愈傷組織誘導(dǎo)
取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽體，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天，培養(yǎng)溫度為26℃；
D、分化和增殖培養(yǎng)
將步驟B得到的小苗切下轉(zhuǎn)接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培養(yǎng)基上，直至形成叢生芽，pH值為5.9，培養(yǎng)溫度24℃，每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，25天為一個(gè)生長(zhǎng)周期；
E、生根培養(yǎng)
將分化和增值培養(yǎng)后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培養(yǎng)基上，pH值為5.9，培養(yǎng)溫度26℃，每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度2000Lx，20天形成完整植株；
F、煉苗和移栽
將有生根的楨楠幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗3天后，取出幼苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土或富養(yǎng)土中，移栽46天，成活。
實(shí)施例5
在實(shí)施例1-4的基礎(chǔ)上：
優(yōu)選的，在步驟A中，所述洗衣粉溶液的濃度為5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的時(shí)間為5min。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，在步驟A中，所述用自來(lái)水沖洗的時(shí)間都為30min。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，在步驟A中，所述75%的乙醇溶液中處理的時(shí)間為10秒。
優(yōu)選的，在步驟B中，接種后7天芽體萌發(fā)，14天形成帶葉的小苗。
優(yōu)選的，在步驟C中，愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程為暗培養(yǎng)。
優(yōu)選的，在步驟D中，增殖系數(shù)為5以上。
優(yōu)選的，所述的WPM培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、維生素B1 1.0mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、瓊脂 6g/L、pH為5.2。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，所述的MS培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽:NH4N03 l650mg/L、KNO31900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、維生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
實(shí)施例6
在實(shí)施例1-4的基礎(chǔ)上：
優(yōu)選的，在步驟A中，所述洗衣粉溶液的濃度為5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的時(shí)間為6min。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，在步驟A中，所述用自來(lái)水沖洗的時(shí)間都為35min。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，在步驟A中，所述75%的乙醇溶液中處理的時(shí)間為30秒。
優(yōu)選的，在步驟B中，接種后9天芽體萌發(fā)，16天形成帶葉的小苗。
優(yōu)選的，在步驟C中，愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程為暗培養(yǎng)。
優(yōu)選的，在步驟D中，增殖系數(shù)為5以上。
優(yōu)選的，所述的WPM培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、維生素B1 1.0mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、瓊脂 6g/L、pH為5.2。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，所述的MS培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽:NH4N03 l650mg/L、KNO31900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、維生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
實(shí)施例7
在實(shí)施例1-4的基礎(chǔ)上：
優(yōu)選的，在步驟A中，所述洗衣粉溶液的濃度為5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的時(shí)間為5-6min。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，在步驟A中，所述用自來(lái)水沖洗的時(shí)間都為32min。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，在步驟A中，所述75%的乙醇溶液中處理的時(shí)間為20秒。
優(yōu)選的，在步驟B中，接種后8天芽體萌發(fā)，15天形成帶葉的小苗。
優(yōu)選的，在步驟C中，愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程為暗培養(yǎng)。
優(yōu)選的，在步驟D中，增殖系數(shù)為5以上。
優(yōu)選的，所述的WPM培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、維生素B1 1.0mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、瓊脂 6g/L、pH為5.2。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，所述的MS培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽:NH4N03 l650mg/L、KNO31900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、維生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
實(shí)施例8
在實(shí)施例1-4的基礎(chǔ)上：
優(yōu)選的，在步驟A中，所述洗衣粉溶液的濃度為5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的時(shí)間為5-6min。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，在步驟A中，所述用自來(lái)水沖洗的時(shí)間都為33min。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，在步驟A中，所述75%的乙醇溶液中處理的時(shí)間為15秒。
優(yōu)選的，在步驟B中，接種后7天芽體萌發(fā)，15天形成帶葉的小苗。
優(yōu)選的，在步驟C中，愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程為暗培養(yǎng)。
優(yōu)選的，在步驟D中，增殖系數(shù)為5以上。
優(yōu)選的，所述的WPM培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、維生素B1 1.0mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、瓊脂 6g/L、pH為5.2。
優(yōu)選的或者進(jìn)一步的，所述的MS培養(yǎng)基配方為：無(wú)機(jī)鹽:NH4N03 l650mg/L、KNO31900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有機(jī)物：肌醇 100mg/L、煙酸 0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、維生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
實(shí)施例9
案例1：
選取1000個(gè)楨楠的嫩莖上芽體作為培養(yǎng)材料，清洗消毒后置于75％的乙醇溶液中處理10-30秒，然后再經(jīng)0.1％的升汞消毒后用無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌吸水紙吸干水分，切去外植體變色的部分后,將滅菌處理后的芽體接種在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基上，pH值為5.8-6.0，培養(yǎng)溫度（25±2）℃，每天光照為12小時(shí)，光照強(qiáng)度1700Lx，接種后8天芽體開(kāi)始萌發(fā)，15天后有992株形成帶葉的小苗。取出帶葉小苗放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天，條件為暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度（25±2）℃。接著將小苗切下轉(zhuǎn)接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培養(yǎng)基上，pH值為5.8-6.0，培養(yǎng)溫度（25±2）℃，每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度2000LX，繼續(xù)培養(yǎng)，25天后986形成叢生芽。將叢生芽放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L的生根培養(yǎng)基上，pH值為5.8-6.0，培養(yǎng)溫度（25±2）℃，每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度2000LX，20天后981株形成完整植株。將裝有981株楨楠幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗3天后，取出幼苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗干凈，移載到沙土或富養(yǎng)土中，注意保水保溫保濕，移栽45天后，有977株楨楠幼苗成活，成活率達(dá)到97.7%。
案例2：
與案例1基本相似，其不同之處在于：生根培養(yǎng)中選擇WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L作為生根培養(yǎng)基。最終楨楠小苗存活958株，成活率達(dá)到95.8%。
案例3：
與案例1基本相似，其不同之處在于：生根培養(yǎng)后的楨楠小苗不經(jīng)過(guò)煉苗而直接移栽到沙土或富養(yǎng)土中。最終楨楠小苗存活951株，成活率為95.1%。